KNOCKOUTMÖSS
Sara Franzén, Helena Skröder, Malin Andersson och Elin Ander
Disposition
• Inledning och frågeställning
• Knockoutmetoden
– Vektorbildning och homolog rekombination
– Mutantmusavel
• Studieexempel
• Andra användningsområden
Introduktion
• Knockoutmöss
– Inaktiverad gen
Syfte
• PPARα
– Kärnreceptor
– Transport och metabolism av lipider
– Lever, muskel, fettväv
• NASH (Nonalcoholic Steatohepatitis)
• Högfettskost/normalkost
Knockoutmetoden
• Avsiktligt stänga av (knocka) en eller flera
gener
• Använder embryonala stamceller
Riktad genförändring
Positiv-negativ selektion
Införandet av genförändrade
embryonala stamceller i
blastocyster
Från genförändrade
embryonala stamceller
till genförändrade möss
Randomiserat kontrollförsök
• Hepatiskt metabolt syndrom
• Fyra grupper med slumpade möss
• Högfettkost
– 71 E% fett
– 11 E% kolhydrater
– 18 E% protein
• Normalkost
– 35 E% fett
– 47 E% kolhydrater
– 18 E% protein
• Tre veckor
Efter tre veckor…
• Musavlivning
• Leverprover
• Histologiska och kemiska
analyser
– Western blot
• Dataanalyser
– En- och tvåsidig Anova
Resultat
• Histologiskt
• Lever:kroppsvikt-ratio
• Proteinanalys: flera tecken på
ökad lipidoxidation och
inflammation i cellerna
• Slutsats: avsaknad av PPARαgen ökad risk för
fettleverrelaterade sjukdomar
hos möss
Avslutning
• Fler områden
– Endokrina, metabola och inflammatoriska sjukdomar
– Cancer, fetma, hjärtkärlsjukdom, diabetes, missbruk
• Förstadie till neurotransmittorer feta möss
Insikt i uppkomst av fetma
Tack för
uppmärksamheten!
Referenser
•
•
•
•
•
Abdelmegeed MA, Yoo SH, Henderson LE, Gonzalez FJ, Woodcroft KJ, Song BJ. PPARalpha expression protects male mice from
high fat-introduced nonalcoholic fatty liver. J Nutr. 2011;141(4):603-10.
Fredholm L. NOBELPRISET I FYSIOLOGI ELLER MEDICIN 2007 gemensamt till Mario R. Capecchi, Martin J. Evans och Oliver
Smithies för deras upptäckter av ”principer för att introducera specifika förändringar av gener i möss med användning av
embryonala stamceller”. Stockholm: Nobelkommittén för fysiologi eller medicin, Karolinska Institutet; 2007 [läst 2013-02-25].
Tillgänglig: http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2007/popular-medicineprize2007-sv.pdf
National Human Genome Research Institute [läst 2013-02-25]. Tillgänglig: http://www.genome.gov/
Antonson P. Knockouttekniken. Föreläsning 2013-02-22, Karolinska Institutet.
Knockout Science: Chubby Mice Provide New Insights Into Obesity. JAMA. 1999;282(16):1507-1508.
doi:10.1001/jama.282.16.1507
