Amplified IDEIA Hp StAR - Thermo Fisher Scientific

4.
DEFINITIONER
Följande
symboler
produktinformationen.
Europe + 800 135 79 135 CA 1 855 805 8539
+
–
CONTROL
Key Code TSMX9398
www.oxoid.com/ifu
CONTROL
US 1 855 236 0910
ROW +31 20 794 7071
har
använts
genomgående
i
Positiv kontroll
Negativ kontroll
Katalognummer
Amplified IDEIA
Hp StAR
Medicinsk utrustning för diagnostik in vitro
Se bruksanvisning
Temperaturbegränsning
K663011-2������������������������������������96
Utsätt inte för direkt sol l jus
SV
1.
AVSEDD ANVÄNDNING
Amplified IDEIA Hp StAR enzymimmunoanalys (EIA) är ett
kvalitativt in vitro test för påvisande av Helicobacter pylori antigen
i humant faecesprov. Testresultaten syftar till att stödja diagnosen
H. pylori hos vuxna och barn samt att kontrollera att en behandling
lyckats.
2.
SAMMANFATTNING
År 1984 beskrev Marshall och Warren förekomsten av en
campylobacter-liknande organism i antrum- och corpusslemhinnan hos patienter med histologiskt fastställd gastrit
och peptiska duodenalsår 1. I våra dagar är det allmänt bekant
att H. pylori är en av de viktigaste orsakerna till uppkomst av
gastrointestinala sjukdomar2.
Infektioner orsakade av H. pylori leder till inflammationer, som
kan öka benägenheten för kronisk gastrit, sår i magsäck och
tolvfingertarm samt magkarcinom3, 4. Detta bekräftas ofta genom
att gastrit och sår mestadels läks ut efter eradikeringsbehandling.
H. pylori har utvecklat olika skyddsmekanismer för att överleva
i sur, baktericid magmiljö. Enzymet ureas spjälkar urinämne
till ammoniak och koldioxid, härvid neutraliseras magsyran.
Produktion av katalas och superoxiddismutas skyddar bakterien
mot angrepp av neutrofiler i magens slemhinna3.
Många H. pylori positiva patienter utvecklar en gastrit och ca. 10%
av patienterna får magsår. 90% av patienter med tunntarms- resp.
magsår är oavsett ålder H. pylori positiva. Orsakerna till dessa
fenomen och bakteriens smittväg är föremål för forskning över
hela världen5.
Man har två huvudsakliga metoder att tillgå för att diagnostisera
H. pylori infektion: direkt påvisande av organismen respektive
indirekt bestämning genom påvisande av antikroppar, som
patienter bildat mot H. pylori 1, 6, 7.
Till de direkta men invasiva metoderna att upptäcka en infektion
räknas ureas-snabbtest, histologi eller odling av organismen från
biopsi-material 8. Odling av H. pylori med hjälp av biopsi-material
är komplicerad och tidskrävande. De tekniska svårigheterna kan
leda till falskt negativa resultat, och därför nedsatt sensitivitet.
Dessutom visar H. pylori benägenhet att bilda kolonier i
magslemhinnan i form av öar och kan därför förbises vid
endoskopi 9.
Andningstest är ytterligare en direkt metod att undersöka
förekomst av H. pylori. Testet går ut på att påvisa koldioxid, som
bildats av det bakteriella enzymet ureas. Andningstestet har hög
sensitivitet och specificitet, men kräver speciella mätinstrument
och patienterna måste inta isotopmarkerat urinämne 8, 10.
En ofta tillämpad metod är att göra serologisk bestämning
av H. pylori-specifika antikroppar. Detta är en indirekt
påvisningsmetod, med vilken man kan upptäcka antikroppar som
patienter har bildat mot H. pylori10. Sensitivitet och specificitet
varierar i hög grad mellan testerna från olika tillverkare. Dessutom
ger serologiska undersökningsmetoder inte tillfredsställande
resultat när det gäller att kontrollera om en eradikeringsbehandling
varit effektiv, eftersom antikroppstitern sjunker långsamt under
flera månader.
Amplified IDEIA Hp StAR är en enzymimmunoassay (EIA) i
mikrotiterplatt-format för direkt, icke-invasivt påvisande av
H. pylori-antigen i human faeces. Genom direkt påvisning av
antigen hjälper testet både till att ställa en första diagnos och
att kontrollera om en behandling lyckats. Detta kan konstateras
4 till 6 veckor efter avslutad eradikeringsbehandling eller för att
konstatera att en ny infektion uppstått.
3.
TESTPRINCIP
Amplified IDEIA Hp StAR är en enzymimmunoanalys där en så
kallad sandwichtyp förstärkningsteknik tillämpas för bestämning
av H. pylori antigen i faecesprov.
Mikrotiterplattans brunnar är belagda med monoklonala
antikroppar mot H. pylori antigen. Supernatant av en faecessuspension
och
väteperoxidas-markerade
monoklonala
antikroppar
(enzymkonjugat)
pipetteras
i
brunnarna.
Under inkubationen binds närvarande H. pylori antigen ur
faecessuspensionen både till antikropparna på testplattan och
till de väteperoxidaskonjugerade antikropparna och bildar ett
‘sandwich-komplex’.
Enzymkonjugat som inte bundits tvättas bort från testplattan.
Därefter pipetteras ett färglöst enkomponentssubstrat
(tetrametylbensidin-TMB) i brunnarna. Bunden väteperoxidas
oxiderar substratet till en blåfärgad produkt. Vid tillsats av
stopplösning skiftar färgen om till gult. Färgens intensitet avläses
med spektrofotometer.
Schematiskt diagram av analysprincipen för Amplified IDEIA Hp
StAR
N
Innehåller tillräckligt för 'N' prov
Lotnummer
Använd före
Tillverkare
5.
MEDFÖLJANDE REAGENSER
96 – Varje sats innehåller tillräckligt mycket material för
- Satsens hållbarhet står på etiketten på
96 bestämningar.
ytterförpackningen.
5.1. INNEHÅLL I AMPLIFIED IDEIA Hp StAR
En bruksanvisning.
1 X Täckfolie för mikrotiterstrips
100 X Provtagningsstickor (trästickor)
En mikrotiterplatta med 96 brunnar
med tolv avbrytbara strips om 8
mikrobrunnar belagda med H. pylori
specifik monoklonal antigen. En
förseglingsbar foliepåse för förvaring
av oanvända mikrobrunnar.
En flaska av var och en av följande, om inget annat anges:
55mL provspädningsbuffert: 75mM
fosfatbuffertlösning, pH 7,4 med
antimikrobiella tillsatser
2mL positiv kontroll: inaktiverat,
fraktionerat H. pylori lysat i
75mM fosfatbuffert, pH 7,4, med
antimikrobiella tillsatser, rödfärgad
lösning
2mL Negativ kontroll: 75mM
fosfatbuffert,
pH
7,4
med
antimikrobiella tillsatser, blåfärgad
lösning
7mL
antikroppskonjugat:
monoklonala
antikroppar
specifika för H. pylori antigen,
pepparrotsperoxidas-konjugerade
i 75mM fosfatbuffert, pH 7,4 med
antimikrobiella tillsatser, grönfärgad
lösning
100mL
tvättbuffertkoncentrat
(x10): 250mM fosfatbuffert, pH 7,4
med detergent och antimikrobiella
tillsatser
12mL substrat: Vattenhaltig lösning
med TMB och väteperoxid
5.2.
12mL
stopplösning:
0,5mol/L
svavelsyra.
FÖRBEREDELSE, FÖRVARING OCH ÅTERANVÄNDNING AV
SATSENS INNEHÅLL
Alla oanvända komponenter i satsen bör förvaras i enlighet med
nedanstående instruktioner för att säkerställa optimal prestanda.
5.2.1 Antikroppsbelagda mikrobrunnar Öppna förpackningen med plattorna genom att klippa längs
förseglingen. Bryt av det antal mikrobrunnar som krävs och
placera dem i ramen. Lägg tillbaka alla oanvända mikrobrunnar
och strips i den förseglingsbara foliepåsen med torkmedel.
Försegla foliepåsen noggrant och förvara vid 28°C.
5.2.2 Provspädningsbuffert
Klar för användning. Förvara oanvänd provspädningsbuffert vid
28°C.
5.2.3 Positiv kontroll
Klar för användning. Förvara oanvänd positiv kontroll vid 28°C.
5.2.4 Negativ kontroll
Klar för användning. Förvara oanvänd negativ kontroll vid 28°C.
5.2.5 Konjugat
Klar för användning. Förvara oanvänt konjugat vid 28°C.
5.2.6 Tvättbuffertkoncentrat
Levereras som x10 koncentrat. Förbered bruksfärdig tvättbuffert
genom att tillsätta 1 del tvättbuffertkoncentrat till 9 delar färskt
avjoniserat eller destillerat vatten. Den bruksfärdiga tvättbufferten
håller sig i tre månader vid en lagringstemperatur på 2 till 8°C i
stängd flaska. I tvättbuffertkoncentratet kan ett obetydligt
Substrate
Substrat
precipitat förekomma. Låt tvättbuffertkoncentratet värmas upp
Colour
Färg
till rumstemperatur före användningen och skaka det lätt tills
Solid
precipitatet löses upp. Förvara oanvänt koncentrat vid 2-8∞C.
phase
Extra tvättbuffertkoncentrat, produktkod S6126, finns hos din
lokala Oxoid-filial eller distributör.
5.2.7 Plate
Substrat
coating
Klar
för
användning.
Förvara oanvänt substrat Substrat
Färg
Colour
Substrate
antibody
vid 28°C,
skydda mot ljus.
5.2.8 H. pylori
Stopplösning
Substrate
Colour
Substrate
Colour
Klar förantigen
användning. Förvara oanvänd stopplösning vid 2-8∞C.
Solid
Solid
phase
på
Polymer
Based onBaserad
label amplification
6.
YTTERLIGARE REAGENSER
märkningsamplifiering phase
Substrate
Plate
6.1. molecule
REAGENSER
Colour
coating
Solid
Substrate
Colour Plate
Substrate
Colour
antibody
Colour
Färg
Färskt HRP
avjoniserat eller destillerat vatten för beredning av
phase
coating
H. pylori
Solid
Colour
Substrate
Substrate
Substrat
antibody
bruksfärdig tvättbuffert.
antigen
phase
Plate
Substrate
Colour
Polymer
H. pylori
Based on label amplification
7. Conjugated
UTRUSTNING
coating
molecule
antigen
Solid
Colour
Substrate
antibody
Plate
phase
Colour
Följande utrustning krävs:
Polymer
Based on labelcoating
amplification
HRP
H. pylori
Substrate
molecule
Colour
Substrate
Colour
antibody
antigen
Provrör.
Plate
antibody
Conjugated
Solid
Colour
Polymer
coating
Based on label
amplification
H. pylori
HRP
phase
Colour
Substrate
Vortexblandare.
molecule
Substrate
antibody
antibody
antigen
Colour
H. pylori
Conjugated
Destillerat eller avjoniserat vatten.
Solid
fas Substrate
Platt- täckande
H. pylori PolymerPolymer- HRP
HRP
Konjugerad
Based
on label
amplification
Plate
antigen
coating antikropp
antigen moleculemolekyl
antikropp
Polymer
d on
label amplification
Colour
Rent absorberande papper (på vilket mikrobrunnarna kan knackas
antibody
Conjugated
antibody
Colour
molecule
HRP
H. pylori
torra).
bstrateColour
antibody
HRP
antigen
Precisionsmikropipetter och engångsspetsar för tillsättning av
Conjugated
Polymer
on
Conjugated
molecule
volymerna 50µL, 100µL och 500µL (valfritt).
antibody
HRP
antibody
Centrifug (minst 5000 rpm).
Conjugated
Mikrotitreringsplattskak med en minimihastighet på 500rpm
antibody
med en orbitaldiameter på 1-3 mm. För information om olika
plattskakars lämplighet kontakta det lokala Oxoid bolaget eller
distributören.
Automatiska plattvättar (tillval) eller lämplig utrustning för
tvättning av strippar med 8 mikrobrunnar (se avsnitt 10.4.4).
>
>
>
>
>
>
>
Obs! Vid tvättning av färre än 8 testmikrobrunnar i en stripp med
en automatisk tvätt med huvud för 8 mikrobrunnar, är det viktigt
att helt fylla strippen med blanka mikrobrunnar.
Spektrofotometer eller EIA-plattläsare som kan läsa av en platta
med 96 mikrobrunnar i strips om 8 mikrobrunnar vid en absorbans
på 450nm med en referens på 620-650nm. (avsnitt 10.3, Avläsning
av testresultat.)
Tillämpningsanvisningar för användning på öppna, automatiska
system finns för denna analys. Kontakta Oxoid lokala dotterbolag
eller distributör.
8.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
- För in vitro-diagnostik. Den som utför en analys med
denna produkt måste vara utbildad i dess användning och ha
erfarenhet av laboratorieprocedurer.
8.1. SÄKERHETSÅTGÄRDER
8.1.1
Stopplösningen innehåller svavelsyra (0,5mol/L). Undvik
kontakt med hud och ögon genom att bära skyddskläder
och skyddsglasögon.
8.1.2
Reagenserna i detta testkit innehåller antimikrobiella
ämnen
och
substratlösningen
innehåller
tetrametylbenzidin. Undvik kontakt med hud eller
slemhinnor/ögon. Vid kontakt skölj omedelbart med
rikligt med vatten.
8.1.3
Du bör inte äta, dricka, röka, förvara eller laga mat eller
sminka dig inom arbetsområdet.
8.1.4
Pipettera inte material med munnen.
8.1.5
Använd engångshandskar vid hanteringen av kliniska
prov och reagenser. Tvätta alltid händerna när du har
arbetat med smittsamma ämnen.
8.1.6
Kasta alla kliniska prov i enlighet med lokal lagstiftning.
8.1.7
Ett datablad om säkerhet finns för professionella
användare.
8.2. TEKNISKA FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
8.2.1
Komponenter får inte användas efter det Använd föredatum som står på etiketterna. Blanda/Byt inte ut olika
reagenssatser mot varandra.
8.2.2
Frys INTE kitkomponenterna.
8.2.3
Reagenserna
tillhandahålls
med
fasta
arbetskoncentrationer. Testprestanda påverkas om
reagenser modifieras eller förvaras under andra
förhållanden än de som anges i avsnitt 5.2.
8.2.4
Kontrollerna är avsedda att pröva om reagensernas
tillförlitlighet försämrats. Den positiva kontrollen
säkerställer inte exakt resultat i närheten av cut-off.
8.2.5
Granska kitkomponenterna med avseende på
kontamination, försämring eller otäthet. Blåfärgad
substratlösning får inte längre användas.
8.2.6
Visar den negativa kontrollen absorbansvärden > 0,10
(450/620-650nm), or > 0,14 (450nm), kan detta tyda på
otillräcklig tvättning. Då rekommenderas att upprepa
testet med grundligare tvättning.
8.2.7
Undvik kontaminering av reagenser.
8.2.8
Använd olika engångspipetter eller pipettspetsar
för varje prov, kontroll eller reagens för att undvika
korskontaminering av proven, kontrollerna eller
reagenserna, vilket kan leda till felaktiga resultat.
8.2.9
Förvara avjoniserat eller destillerat vatten för spädning
av koncentrerad reagens i rena behållare för att
förhindra mikrobiell kontaminering.
8.2.10 Undvik kontaminering med metalljoner och oxiderande
ämnen.
8.2.11 Skydda substratet mot ljus.
8.2.12 Använd inte substrat som har en blå färg innan det
tillsätts mikrobrunnarna.
8.2.13 Mikrobrunnar kan inte återanvändas.
8.2.14 Manuell eller automatisk tvättutrustning måste vara
fri från mikrobiell kontaminering, rätt kalibrerad och
underhållen enligt tillverkarens instruktioner.
9.
PROVTAGNING
OCH
FÖRBEREDELSE
AV
AVFÖRINGSPROV
9.1. PROVTAGNING
Testet utförs med färskt eller fryst faecesprov. Färska faecesprov
kan transporteras utan kylning upp till två dagar. När
faecesproverna inkommit till laboratoriet fryses de ned och lagras
vid 20°C eller kallare.
Utförs testet inom 3 dagar efter ankomst till laboratoriet, kan
provet förvaras vid 2 till 8°C utan att analysresultatet påverkas.
Upprepad infrysning och upptining av proverna bör undvikas.
Faecesprov i transportmedium eller andra konserveringsmedel är
inte lämpliga för testet.
9.2. FÖRBEREDELSE AV FAECESPROV
Fyll först 500µL provbuffert i ett märkt provrör. Blanda
faecesprovet och tillsätt med hjälp av den medföljande trästickan
ca. 0,1g (mängden av en ärtas storlek) av patientens faeces
till provbufferten. Om faecesprovet är flytande, tillsätt 100µL
faeces. Slamma upp provet med Vortexmixer (15 sekunder) och
centrifugera det sedan i 5 minuter med ≥ 5000 rpm (2500g).
Använd en ny trästicka för varje prov. Faecessuspensionen är
hållbar 24 timmar vid 2 till 8°C, men den får inte frysas igen.
10.
TESTPROCEDUR
SE AVSNITT 8.2 TEKNISKA FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER INNAN DU
UTFÖR TESTPROCEDUREN.
Reagenser och prov skall värmas upp till rumstemperatur (1530°C)
före användning.
10.1. FÖRBEREDELSE AV KONTROLLER
Blanda försiktigt före användning.
Minst en Amplified IDEIA Hp StAR negativ kontroll och en positiv
kontroll måste inkluderas i varje sats av prov som testas (se avsnitt
10.2.1).
10.2. ANALYSPROCEDUR
10.2.1 Tillsättning av prov
Pipettera 50µL av faecesprovets supernatant, 50µL av den
positiva kontrollen och 50µL av den negativa kontrollen i en
brunn vardera.
Undvik att störa eller ta prov från sedimentet i flaskan. Vid
dispensering av prov, håll överföringspipetten vertikalt med
spetsen direkt ovanför mikrobrunnen och se till att provet
tillsätts utan att vidröra mikrobrunnens sidor. Se till att inte
korskontaminera prov och kontrollmikrobrunnar eftersom detta
kan orsaka felaktiga resultat.
10.2.2 Tillsättning av konjugat
Tillsätt 50µL per brunn av det bruksfärdiga konjugatet direkt till
provet och kontrollerna.
10.2.3 Första inkuberingen
Inkubera plattan i 60 ± 5 minuter vid 18 till 27°C på skakapparat.
Täck över brunnarna med bifogad folie tillklippt till lagom format.
10.2.4 Tvättning av mikrobrunnarna
Tvättekniken är av yttersta vikt för testprestandan (se avsnitt
8.2.12) och bör utföras så att fullständig fyllning (med minst 250300µL bruksfärdig tvättbuffert) och tömning av mikrobrunnarna
säkerställs.
Fem tvättcykler är nödvändiga, antingen med automatiska eller
manuella tekniker.
Ta försiktigt bort plattförseglingen före tvättningen.
Manuell tvättning
Om mikrobrunnarna tvättas manuellt, ska deras innehåll
aspireras eller skakas ut. Använd ny tvättbuffert och se till
att mikrobrunnarna fylls och töms helt. Mellan varje tvätt
ska all kvarvarande tvättbuffert avlägsnas genom att knacka
mikrobrunnarna mot rent, absorberande papper. Effektiviteten
av manuell tvätt kan förstärkas ytterligare om tvättbuffert tillsätts
i vinkel så att en virvel bildas i mikrobrunnarna. Efter den sista
tvätten ska plattan vändas och knackas mot absorberande papper
för att avlägsna de sista spåren av tvättbuffert.
Automatisk tvättning
Automatiska tvättapparater bör programmeras att genomföra
5 tvättcykler. Tvättapparaten måste vara rätt kalibrerad så
att den fyller och tömmer mikrobrunnarna helt mellan varje
tvätt. Efter den sista tvätten bör plattan vändas och knackas
mot absorberande papper för att avlägsna de sista spåren av
tvättbuffert.
10.2.5 Tillsättning av substrat
Tillsätt 100µL substrat i varje mikrobrunn.
10.2.6 Andra inkuberingen
Inkubera vid 20-30°C i 10 minuter.
10.2.7 Stoppa reaktionen
Stoppa substratreaktionen genom att tillsätta 100µL stopplösning.
10.3. AVLÄSNING AV TESTRESULTAT
10.3.1 Fotometrisk avläsning
Mikrobrunnarna bör avläsas fotometriskt inom 15 minuter efter
tillsättning av stopplösning. Blanda innehållet i mikrobrunnarna
och läs av absorbansen för varje mikrobrunn med en lämplig
spektrofotometer eller EIA-plattläsare inställd på 450nm. Se till att
mikrobrunnarnas bottnar är rena före avläsning och kontrollera
att inget främmande material finns i mikrobrunnarna. Läsaren bör
blankinställas på luft (d.v.s. utan platta i hållaren) innan plattan
avläses.
Om spektrofotometern eller EIA-plattläsaren medger användning
av referensvåglängd (vid 620-650nm), kan avläsning med dubbla
våglängder göras. Detta eliminerar potentiell interferens orsakad
av aberrationer, t.ex. smuts eller fläckar på mikrobrunnarnas
optiska yta.
10.4. SaMMANFATTNING AV ANALYSPROCEDUR FÖR Amplified
IDEIA Hp StAR-TEST
Se till att alla reagenser uppnår rumstemperatur
(15-30∞C) innan de används
Tillsätt 50µL kontroll eller prov
Tillsätt 50µL konjugat
Inkubera vid 18-27°C i 60 minuter. med skakning
Tvätta (x5)
Tillsätt 100µL substrat
Inkubera vid 20-30°C i 10 minuter.
Tillsätt 100µL stopplösning
Läs av absorbans i spektrofotometer vid
450nm (gult) (referens 620-650nm)
11.
TOLKNING AV TESTRESULTAT
11.1. POSITIV KONTROLL OCH NEGATIV KONTROLL
Enligt anvisningarna i avsnitt 10.1 (Förberedelse av kontroller)
måste minst en negativ kontroll och en positiv kontroll utföras i
varje analyskörning.
Följande kvalitetskriterier måste vara uppfyllda:
Positiv kontroll:
OD450 / 620 to 650nm > 1.00 (OD450nm > 1.04)
Negativ kontroll:
OD450 / 620 to 650nm < 0.10 (OD450nm < 0.14)
11.2. PROV
Testresultaten tolkas enligt följande:
Dubbel våglängd (450/620 till 650nm)
Prov med absorbansvärden ≥ 0,150 bedöms som positiva.
Prov med absorbansvärden < 0,150 bedöms som negativa.
Avläsning vid en våglängd (450nm)
Används en mikroplattsläsare utan möjlighet att avläsa mot en
referensvåglängd mellan 620 och 650nm , är cut-off fastslagen
enligt följande:
Prov med absorbansvärden ≥ 0,190 bedöms som positiva.
Prov med absorbansvärden < 0,190 bedöms som negativa.
Ett positivt testresultat tyder på närvaro av H. pylori antigen
i faecesprovet. Ett negativt testresultat tyder på att H. pylori
antigen saknas eller på en antigenkoncentration under
detektionsgränsen.
Om innehållet i en mikrobrunn blir mörkblått och bildar ett blått/
svart precipitat efter tillsättning av substrat, bör provet tolkas som
positivt.
12.
PRESTANDABEGRÄNSNINGAR
12.1. Amplified IDEIA Hp StAR är ett kvalitativt test och kan inte
användas till kvantitativa utvärderingar. Testresultaten bör
tolkas av klinikern tillsammans med kliniska data och/eller
andra diagnostiska procedurer.
12.2. Antibiotika, protonpumphämmare och vismutpreparat
hämmar tillväxt av H. pylori. Faecesprov får tas
tidigast 2 veckor efter det att medicinering med
protonpumphämmare eller vismutpreparat satts ut resp.
4 veckor efter avslutad antibiotikabehandling.
12.3. Ett negativt resultat utesluter inte möjligheten av H.
pylori infektion hos patienten. Att icke kunna upptäcka H.
pylori kan vara ett resultat av sådan faktorer som felaktig
provtagning eller felaktig hantering av prover.
12.4. Ett positivt testresultat är inte tillräckligt för att föranleda
eradikeringsbehandling. Det kan visa sig nödvändigt
att tillämpa andra metoder för verifikation av H. pyloriinfektion. För att fastställa ulcera, autoimmun gastrit
eller tumörer fordras en differentialdiagnos med invasiv
endoskopisk metod.
12.5. Testresultat inom 0,020 absorptionsenheter omkring cutoff värdet skall tolkas med försiktighet.
13.
FÖRVÄNTADE VÄRDEN
Förväntade värden är beroende av det geografiska läget och till
vilket folkslag patienterna hör. Andelen positiva testresultat kan
variera på grund av vilken påvisningsmetod man använder sig av
samt hur proven insamlas och hanteras.
Epidemiologiska studier visar att infektioner med H. pylori är
utbredda över hela världen. 2550% av befolkningen i Europa och
Nordamerika är infekterade. Studier i Asien, Afrika och Latinamerika
har resulterat i ännu högre prevalens, d.v.s. 70-90%1, 11.
Förekomst av H. pylori infektion korrelerar med ålder, etnisk
härkomst och levnadsstandard. I Förenta Staterna stiger t.ex.
infektionens prevalens för varje levnadsår med ca. 1%12.
14.
SPECIFIK PRESTANDAKARAKTERISTIK
14.1. KLINISKA STUDIER
Studie 1: Primärdiagnos vuxna patienter
Amplified IDEIA Hp StAR har utvärderats i 10 tyska centra på 356
patienter (201 kvinnor, 155 män, ålder 18-82 år), vilka genomgått
endoskopi på grund av abdominal smärta och dyspepsi. Testerna
på faeces utfördes som blindprov i oberoende laboratorier.
Patienterna visade olika patologiska fynd: lindrig gastrit (n=61),
C-gastrit (n=98), B-gastrit (n=144) (H. pylori), erosion i antrum
(n=11), Agastrit (n=2), ulcus ventriculi (n=5), ulcus duodeni (n=3),
adenokarcinom (n=2), submukös tumör (n=1), Schatzki’s Ring
(n=1), Crohn gastritis (n=1), asymptomatiska (n=27).
Resultaten av testerna med Amplified IDEIA Hp StAR jämfördes
med de histologiska undersökningsresultaten. Av denna utredning
framgick att testerna med Amplified IDEIA Hp StAR hade en
diagnostisk sensitivitet på 95.3% och en diagnostisk specificitet
på 97,1%. Konfidensintervall (CI) beräknades med hjälp av den
exakta binominalmetoden. Resultaten är sammanfattade i tabell
1.
Tabell 1:Primärdiagnos hos vuxna patienter med Amplified
IDEIA Hp StAR och histologi som referenstest
Hp StAR
+
-
Sensitivitet
Histologi
+
141
7
± 95% CI
6
202
Specificitet
± 95% CI
95,3% (141/148)
97,1% (202/208)
93,8 –98,9%
Hp StAR
+
-
Sensitivitet
+
70
1
± 95% CI
1
167
Specificitet
± 95% CI
98,6% (70/71)
Studie 3: Uppföljning av respons på eradikeringsbehandling
hos pediatriska patienter.
I denna studie ingick 40 H. pylori-infekterade barn med
återkommande abdominal smärta (ålder 3 till 15 år) från två
gastroenterologiska centra (13). H. pylori -infektionen påvisades
med ureaandningstest och serologi. Alla 40 faecesproven
identifierades med Amplified IDEIA Hp StAR som H. pyloripositiva.
Eradikering utfördes i form av en 7 dagars trippelterapi.
Eradikeringskontroll gjordes med andningstest 4 veckor efter
avslutad behandling. Amplified IDEIA Hp StAR visade i jämförelse
med resultaten av andningstestet en sensitivitet på 100% och en
specificitet på 98,9%. Konfidensintervall bestämdes enligt den
exakta binominalmetoden.
Tabell 3:Amplified IDEIA Hp StAR kontra UBT för uppföljning
av respons på eradikeringsbehandling hos
pediatriska patienter.
Hp StAR
+
-
Andningstest
+
8
0
1
31
Sensitivitet
100% (8/8)
± 95% CI
63,1 – 100%
Specificitet
± 95% CI
+
-
Utandningsprov
(UBT)
+
8
2
2
81
Sensitivitet
80% (8/10)
± 95% CI
44,4 – 97,5%
Specificitet
± 95% CI
97,6% (81/83)
91,6 – 99,7%
14.2. REPRODUCERBARHET
Intra- och Inter-Assay-varians utreddes genom test av negativa
(n=2), svagt positiva (n=2), medelstarkt positiva (n=2) och
starkt positiva prov (n=2). Avläsningarna gjordes i 3 oberoende
laboratorier i Europa. Varje prov testades i tio brunnar i vart och ett
av dessa laboratorier. Intra- och Inter-Assay-varianskoefficienter
(CV) beräknades och visas i tabell 4. För de olika faecesprovens
OD-värden och Intra- och Interassay-varians är de lägsta och
högsta värdena för vardera angivna.
Tabell 5:Amplified IDEIA Hp StAR faecesprovernas Intra- och
Inter-Assay-varians
OD 450/630nm
negativa
svagt
positiva
0,024 – 0.070
0,495–0,897 1,306 – 2,656 3,00 – 3,776
Intra-Assay 5,9 – 17.4%
CV
Inter-Assay 41,2– 46.1%
CV
2,7 – 10,1%
Pseudomonas fluorescens
Campylobacter fetus Pseudomonas putida
Campylobacter jejuni Salmonella agona
Citrobacter freundii
Salmonella choleraesuis
Enterobacter cloacae Salmonella infantis
Enterococcus faecalis
Salmonella ohio
Enterococcus faecium
Salmonella typhimurium
Escherichia coli
Serratia proteamaculans
Escherichia hermannii
Shigella flexneri
Lactoccocus lactis Shigella sonnei
Listeria innocua
Staphylococcus aureus
Proteus mirabilis Streptococcus agalactiae
Proteus vulgaris Streptococcus dysgalactiae
16.
1.
LITTERATUR
Marshall, B.J., Warren, J.R. (1984). 2.
Dunn, B.E., Cohen, H., Blaser, M.J. (1997). 3.
D’Elios, M.M., Andersen, L.P., Del Prete, G. (1998). 4.
Delchier, J.-C., Ebert, M., Malfertheiner, P. (1998). 5.
Feldman, R.A., Eccersley, A.J.P., Hardie, J.M. (1997).
6.
Graham, D.Y., Klein, P.D., Evans, Jr., D.J., Evans, D.G.,
Alpert, L.C., Opekun, A.R., Boutton, T.W. (1987).
Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with
gastritis and peptic ulceration. Lancet 1 (8390): 1311-1314.
Helicobacter pylori. Clinical Microbiology Reveiw 10: 720-741.
Inflammation and host response. Current Opinion in
Gastroenterology 14 (suppl. 1): 15-19.
Helicobacter pylori in gastric lymphoma and carcinoma.
Current Opinion in Gastroenterology 14 (suppl. 1): 41-45
Transmission of Helicobacter pylori. Current Opinion in
Gastroenterology 8: 8-12.
Campylobacter pylori detected noninvasively by the 13C-urea
breath test. Lancet 1 (8543): 1174-1177.
7.
Graham, D.Y., Klein, P.D., Opekun, A.R., Boutton, T.W. (1988).
8.
Barthel, J.S., Everett, E.D. (1990). 9.
Kokkola A., Rautelin H., Puolakkainen P., Sipponen P.,
Farkkila M., Haapiainen R., Kosunen T.U. (2000). Effect of age on the frequency of active Campylobacter pylori
infection diagnosed by the [13C] Urea breath test in normal
subjects and patients with peptic ulcer disease.Journal of
Infectious Diseases 157: 777-780.
Diagnosis of Campylobacter pylori infections: the "Gold
Standard” and the alternatives. Review of Infectious Diseases
12 (suppl.1): S107-S114.
Diagnosis of Helicobacter pylori infection in patients with
atrophic gastritis: comparison of histology, 13C-urea breath
test, and serology. Scand J Gastroenterol 35 (2): 138-141
10.
Vaira, D., Holton, J., Menegatti., M., Ricci, C.,
Landi, F., Ali, A., Gatta, L., Acciardi, C., Farinelli, S.,
Crosatti, M., Berardi, S., Miglioli, M. (1999). New immunological assays for the diagnosis of Helicobacter
pylori infection. Gut 45 (suppl. 1): I23-I27.
11.
Vaira D., Miglioli M., Mule P., Holton J.,
Menegatti
M.,
Vergura
M.,
Biasco
G.,
Conte R., Logan R.P., Barbara L. (1994). Prevalence of peptic ulcer in Helicobacter pylori positive blood
donors. Gut 35: 309-312.
12.
Graham
D.Y.,
Malaty
H.M.,
Evans
Evans D.J. Jr., Klein P.D., Adam E. (1991). medelstarkt
positiva
2,1 – 4,0%
starkt positiva
1,1 – 3,1%
23,0 – 25,8% 24,1 – 25,4% 8,1 – 10,2%
15.
KORSREAKTIVITET
Amplified IDEIA Hp StAR faecestest är högspecifik för H. pylori
antigen. Varje stam testades i en koncentration på > 1◊108
organismer/ml provbuffert. Korsreaktivitet har inte kunnat
påvisas för någon av de nedan angivna mikroorganismerna. I
motsats därtill visade H. pylori positivt testresultat.
D.G.,
Epidemiology of Helicobacter pylori in an asymptomatic
population in the United States. Effect of age, race, and
socioeconomic status. Gastroenterology 100: 1495-1501.
13.
Makristathis
A.,
Barousch
W.,
Pasching
E.,
Binder
C.,
Kuderna
C.,
Apfalter
P.,
Rotter M.L., Hirschl A.M. (2000). Two enzyme immunoassays and PCR for detection of
Helicobacter pylori in stool specimens from pediatric patients
before and after eradication therapy. Journal of Clinical
Microbiology 38 (10): 3710-3714
96,9% (31/32)
83,8 – 99,9%
Studie 4: Uppföljning av respons på eradikeringsbehandling
hos vuxna patienter
Stolprov togs från 93 patienter i nordöstra Spanien (64
män och 29 kvinnor mellan 21 och 80 år) som genomgått
eradikeringsbehandling för bekräftad H. pylori-infektion.
Patienterna uppmanades att ta prov från faeces samma dag
som utandningsprovet (UBT – urea breath test) gjordes för att
kontrollera resultatet av eradikeringsbehandlingen (minst 4
veckor efter behandlingen). Proven frystes omedelbart ned och
hölls nedfrusna vid -80°C. De tinades därefter upp och testades
med Amplified IDEIA Hp StAR.
Tabell 4 visar de resultat som erhållits med Amplified IDEIA Hp
StAR i jämförelse med referensmetoden (UBT). Amplified IDEIA
Hp StAR uppvisade en känslighet och specificitet på 80% (8/10)
respektive 97,6% (81/83) och en total överensstämmelse på
95,7% (89/93) med UBT.
Tabell 4:Amplified IDEIA Hp StAR kontra UBT för uppföljning
av respons på eradikeringsbehandling hos vuxna
patienter
Hp StAR
Aeromonas hydrophila hydrophila 92,4 – 100%
99,4% (167/168)
96,7 – 100%
Providencia stuartii
Aeromonas hydrophila anaerogenes Pseudomonas aeruginosa
90,5 – 98,1%
Studie 2: Primärdiagnos hos pedriatiska patienter
Amplified IDEIA Hp StAR har testats i en studie med faecesprov
från barn, vilka genomgått endoskopi på grund av abdominal
smärta och/eller andra intestinala besvär. Undersökningen
omfattade 239 barn (124 pojkar, 115 flickor; ålder 6 månader - 18
år) från 3 pediatriska gastroenterologicentra i Europa.
Histologi och odling användes som referenstest. Patienterna
definierades som H. pylori-positiva, när histologi och/eller kultur
utföll positivt och som H. pylori-negativa, när båda testerna var
negativa. Amplified IDEIA Hp StAR visade en sensitivitet på 98,6%
och en specificitet på 99,4%. Konfidensintervall (CI) beräknades
enligt den exakta binominalmetoden.
Tabell 2:Primärdiagnos hos pediatriska patienter med
Amplified IDEIA Hp StAR och referenstesterna
histologi/odling
Histologi
Odling
Acinetobacter lwoffii IFU X9398 Augusti 2015
OXOID Limited, Wade Road, Basingstoke,
Hampshire, RG24 8PW, UK
Ställ alla frågor till Oxoid lokala dotterbolag eller distributör.