ELISA-test för att diagnosticera
diabetes typ 1
Niklas Dahrén
Vad är syftet med ELISA-test?
ü
ü
ü
(t.ex. e, serumprov från en pa3ent) Sy$et med ELISA är a0 ta reda på om provet innehåller en specifik an3kropp eller an3gen. Detek5on av olika an5kroppar eller an5gener kan användas för a, t.ex. diagnos3cera olika sjukdomar men även för a, göra en del doping-­‐ och drogtester. ELISA är en förkortning som står för: ”Enzyme-­‐Linked-­‐ImmunoSorbent Assay”, (Enzymkopplad Immunabsorberande Analys). För att förstå ELISA-testet måste vi veta
vad antikroppar och antigener är
ü An5kroppar: An3kroppar (immunglobuliner) är Y-­‐formade proteiner som produceras av kroppens immunförsvar (av B-­‐lymfocyter). Dessa har som uppgiN a, binda 3ll främmande ämnen som har kommit in i kroppen, s.k. an3gener. ü
An5gener: E, an3gen är e, främmande ämne (protein, kolhydrat) som har kommit in i kroppen och som får immunförsvaret a, reagera och producera specifika an3kroppar mot just det an3genet. An3gener är oNa ytmolekyler som si,er på bakterier, virus eller parasiter. Ibland kan dock kroppsegna ämnen fungera som an3gener och trigga an3kroppsproduk3onen. Obs. Varje an3kropp är specifik mot just en typ av an3gen. ELISA-test kan användas för att kunna
skilja mellan diabetes typ 1 och typ 2
ü Diabetes typ 1 och typ 2 är två olika sjukdomar fast med liknande sjukdomsbild. De,a gör av fasteglukos, HbA1c eller e, OGTT kan a, det kan vara svårt a, skilja dem åt. Mätning inte användas för a, avgöra vilken typ av d iabetes personen har. A, ställa rä, diagnos är dock mycket vik3gt för a, pa3enten ska få rä, behandling. ü
ü
För snart 30 år sedan, 1974, upptäcktes dock a0 de flesta pa3enter med diabetes typ 1 har an3kroppar i blodet som ”a,ackerar” de langerhanska öarna. Dessa an3kroppar fick därför namnet ”islet cell an3bodies” (ICA), kallas ibland för ”ö-­‐an3kroppar” på svenska. ICA kan uppträda många år innan den kliniska debuten av diabetes typ 1. An3kroppar som a,ackerar kroppsegna celler och vävnader kallas för autoan3kroppar. ämnen i öarna som ICA reagerar mot Under 1990-­‐talet iden5fierades flera av de (an3gen), framför allt GAD 65 (glutaminsyredekarboxylas) och IA-­‐2 (protein tyrosinfosfatas-­‐liknande protein) som båda finns i betacellen. Det är alltså mer specifikt betacellerna som a,ackeras. ü Med hjälp av e0 s.k. ELISA-­‐test kan vi ta reda på om pa3entens blod innehåller just denna typ av autoan3kroppar. ELISA-­‐metoden skapades 1971 av Peter Perlmann och Eva Engvall vid Stockholms universitet. Diabetes typ 1
Autoan3kroppar Betacellsdestruk3on Insulinbrist ELISA-testet utförs genom att tillsätta
antigener och antikroppar till brunnarna i
mikrotitrerplattor
Bildkälla: "Micro3ter plate" by Jeffrey M. Vinocur -­‐ Own work. Licensed under CC BY 2.5 via Commons -­‐ h,ps://commons.wikimedia.org/wiki/File:Micro3ter_plate.JPG#/
media/File:Micro3ter_plate.JPG Principen för att detektera
autoantikroppar med ELISA-test
ü Det finns många varianter av ELISA-­‐test men i det här testet är syNet a, detektera autoan3kroppar i pa3entens serum. Till bo,en av brunnarna 3llsä,s därför ”betacellsan3gener”. Sedan 3llsä,er vi pa3entens serumprov. Om serumprovet innehåller autoan3kroppar kommer dessa binda 3ll an3generna i bo,en av brunnarna. med e0 kopplat enzym, och i det sista ü Genom a0 sedan 5llsä0a en sekundär an5kropp steget e, ofärgat substrat 3ll enzymet, så kan vi få e, synligt resultat eNersom enzymet omvandlar det ofärgade substratet 3ll e, färgat substrat. Brunnarna som innehåller autoan3kroppar blir därför färgade. Autoan3kropp från pa3entens serum Betacellsan3gen (t.ex. IA-­‐2) S
Y Y Sekundär an3kropp med kopplat enzym Ag E S
Film: ELISA-test för att detektera
autoantikroppar
h,ps://www.youtube.com/watch?v=RRbuz3VQ100 ELISA-testet steg för steg (lite förenklat)
1. An5gener: Brunnarna i ELISA-­‐pla,an fylls med betacellsan3gener (t.ex. IA-­‐2) som under inkuberings3den (oNa över na,en) kommer binda 3ll bo,en av brunnarna. Tvä,ning av som ej har bundit. brunnarna sker sedan för a, tvä,a bort det 2.
3.
4.
Serumprov: Pa3entens serumprov 3llsä,s sedan. Om provet innehåller auotoan3kroppar mot betacellesan3gener så kommer auotan3kropparna binda 3ll dessa i bo,en av brunnarna. Tvä,ning av brunnarna sker sedan för a, tvä,a bort det som ej har bundit. Sekundär an5kropp + enzym: För a, kunna se om autoan3kroppar i serumprovet har bundit 3ll an3generna måste vi 3llsä,a en s .k. sekundär an3kropp med e, kopplat enzym (si,er bundet 3ll an3kroppen). Om det finns autoan3kroppar i brunnarna så kommer den sekundära an3kroppen binda 3ll dessa. Vi tvä,ar igen. Finns det inga autoan3kroppar a, binda 3ll så kommer den sekundära an3kroppen inte kunna binda utan istället tvä,as bort i det här steget. substrat. Enzymet (som är kopplat 3ll den Substrat: I det sista steget 3llsä,s e, ofärgat sekundära an3kroppen) har förmåga a, omvandla de,a ofärgade substrat 3ll e, färgat substrat och det gör a, brunnarna i ELISA-­‐pla,an får en mörkare färg. De,a sker dock endast om det finns autoan3kroppar för annars har ju den sekundära an3kroppen och enzymet redan tvä,ats bort! ELISA-testet kan även användas för att
detektera en specifik antigen
An5gen-­‐ELISA: Detektera en specifik an3gen i t.ex. en pa3ents serum. An5kropps-­‐ELISA: Detektera en specifik an3kropp i t.ex. en pa3ents serum. Y E Y Ag An3gen-­‐ELISA S
S
Y Y S
Från pa3entens serum E Ag An3kropps-­‐ELISA S
Se gärna fler filmer av Niklas Dahrén: h0p://www.youtube.com/Kemilek5oner h0p://www.youtube.com/Medicinlek5oner
