Cellbiologiprogrammet TENTAMEN I STRUKTURBIOLOGI FREDAGEN DEN 13 FEBRUARI 1998 EFTERNAMN:…………………………….... FÖRNAMN:……………………………….... PERSONNUMMER:………………………..…. POÄNGSUMMA: RESULTAT: Glöm inte att skriva namn och personnummer på ev. lösa blad! Tentamen innehåller 20 frågor som var och en ger 2 poäng. Till flervalsfrågor finns ett korrekt svarsalternativ, om ej annat anges. LYCKA TILL! -2- Namn:……………………………… Personnummer:……………………… Flervalsfrågor 1/ Följande påståenden om proteinstruktur är antingen Sanna eller Falska; markera med S eller F för varje påstående. ( ) proteiner är i allmänhet hydrofoba på insidan och hydrofila på utsidan ( ) proteiner veckar sig spontant till sin nativa konformation ( ) globulära proteiner är lösta packade med många håligheter inuti ( ) prolin och glycin finns aldrig i helixar 2/ Vad är hypokromicitet? a) ökad absorbans t ex i DNA/RNA när baserna stackas b) minskad absorbans, t ex i DNA/RNA när baserna stackas c) förändring till högre våglängd pga intermolekulära interaktioner d) förändring till lägre våglängd pga intermolekulära interaktioner e) minskad cirkulär dikroism pga sekundärstruktur formation 3/ En elektronmikroskopisk bild av ett tunt föremål uppstår genom a) absorption av elektroner i tjockare delar av preparatet b) absorption av elektroner i atomer med högt atomnummer c) faskontrast d) absorptionskontrast e) registrering av sekundära elektroner 4/ Man kan ha mycket tunnare preparat i elektronmikroskopi än i röntgenkristallografi därför att: a) elektroner interagerar mycket starkare med preparatet än vad röntgenstrålar gör b) i röntgenkristallografi måste man ha 3-dimensionella kristaller c) det är vakuum inuti elektronmikroskopet d) elektronstrålen kan inte fokuseras på ett tjockt preparat e) i elektronmikroskopet finns det en lins för elektronerna, vilket inte är möjligt med röntgenstrålning -3- Namn:……………………………… Personnummer:……………………… 5/ Elektronmikroskopi är särskilt väl lämpat för strukturbestämning av: a) nukleinsyror b) membranproteiner c) proteiner med övervägande -sheets d) DNA:protein komplex e) metallfria proteiner 6/ För ett NMR experiment är följande påståenden Sanna eller Falska; markera med S eller F för varje påstående: ( ) Due to unfavorable relaxation processes, the molecular weight upper limit for obtaining atomic resolution structural information for biological macromolecules is 30-40 kD. ( ) When two NMR spectra of a molecule, recorded using magnetic fields of 11.7 and 8.3 Tesla, are compared, resonances assigned to the same proton in each spectrum will have a different chemical shift offset from TMS, but identical coupling constants. ( ) Molecular conformation can effect scalar (3J) coupling constants but not chemical shifts. ( ) Higher magnetic fields improve sensitivity in NMR by increasing the energy difference between the spin states resulting in a larger fraction of nuclei in the lower energy state. 7/ A short segment of the polypeptide backbone of a globular protein has the following characteristics. The coupling constants 3JHHN of .the residues are <5 Hz; backbone HN protons are observed to exchange slowly with solvent deuterons; and relatively intense NOE crosspeaks are observed between backbone amide protons of sequentially neighboring residues. With this information, what is the likely secondary structure of the segment? a.) strand b.) helix c.) turn d.) disordered e.) cannot determine Namn:……………………………… -4- Personnummer:……………………… COSY (H2O) 8 2 6 4 NOESY (H2O) 2 4 4 6 6 8 8 2 ppm 8 6 4 2 ppm A 2D COSY and a 2D NOESY spectra are represented as cartoons above. Each spectrum contains the resonances and their crosspeaks from two sequential amino acids in a polypeptide chain. The amino acids are Aspartic acid and Threonine (structures shown below) Use these two spectra to answer the following two questions. N Hd O Ha Hb N C O He C C C Hf C Hg Hc C CH3 C H O Threonine O O Aspartic Acid 8/ The resonance at ~5.3 ppm belongs to the proton labeled a.) Ha b.) Hb c.) Hc d.) Hd e.) He 9/ The resonance at ~8.2 ppm belongs to the proton labeled a.) Ha b.) Hb c.) Hc d.) Hd e.) He Namn:……………………………… -5- Personnummer:……………………… Kortsvarsfrågor 10/Markera i den schematiska (sidokedjorna visas som "R") pentapeptiden nedan a) mellan vilka atomer det skulle finnas vätebindningar om peptiden har en -helix konformation b) torsionsvinklarna , , och 1 vid respektive bindning i någon av de mittre residuerna H N H O R H C C N C N R H H H O R H C C N C C N O R H H O H C C O R 11/Beskriv den principiella uppbyggnaden av en masspektrometer och ange huvudkomponenternas funktion. 12/ När kan man använda homologimodellering, och hur går det till i huvuddrag? C -6- Namn:……………………………… Personnummer:……………………… 13/ Varför kan inte en proteinkristall ha spegelsymmetri? 14/ Varför kan man inte ha elektronmikroskopiska preparat i vattenlösning? Diskutera kortfattat någon av de vanliga preparationsmetoderna. 15/ Beskriv vilka steg som ingår i 3D-strukturbestämning av ett protein med röntgenkristallografi. Utgå ifrån att proteinet finns tillgängligt i lösning. -7- Namn:……………………………… Personnummer:……………………… 16/ Diskutera kortfattat några faktorer som påverkar kristallisation av ett protein. Antag att du har gjort omfattande kristallisationsförsök under olika betingelser, utan att erhålla några kristaller av ditt protein. Beskriv kortfattat vad du skulle göra i en sådan situation (t ex, vilka kontroller skulle du göra med proteinet och kristallisationsförsöken, vad skulle du ändra för att ge bättre resultat) 17/ Vad mäter detektorn vid röntgenkristallografisk datainsamling? Beskriv kortfattat hur dessa data är relaterade till elektrontätheten i proteinet. (ledning: F(hkl) V ( xyz) exp2i( xh yk zl)dxdydz ) 18/ Varför är det nödvändigt att förfina (“refine”) den strukturmodell som tas fram från den första elektrontäthetskartan? -8- Namn:……………………………… Personnummer:……………………… 19/ Det finns några olika kriterier för att karaktärisera kvalitén på en proteinmodell som tagits fram med röntgenkristallografi. Diskutera kortfattat tre sådana kriterier. 20/ If a spin ½ nucleus (A) is scalar coupled to three other spin ½ nuclei (B, C and D) with the following coupling constants JAB = 5, JAC = 10, JAD = 5, what would the multiplet fine structure look like? Peak intensities? Show work. 1 Hz