SAMMANFATTNING
“Cytolethal Distending Toxin” (CDT) är ett toxin, som produceras i ett flertal
patogena bakterier. Celler som utsätts för CDT växer inom 72 timmar i storlek med 35 gånger. CDT har visats sig attackera DNA, då det klyver DNA-molekylens bägge
strängar. Detta gör att en kaskad av varningssignaler slås på, vilket så småningom
leder till att celldelningen upphör. CDT går in genom cellen via endocytos via
clathrinklädda gropar i cellmembranet. Därefter transporteras toxinet i blåsor till
Golgi-apparaten och endoplasmatiska nätverket (ER). Sedan tar sig toxinet in i
cellkärnan där de utövar sin toxicitet. CDTs receptor är ännu inte känd, men det är
känt att toxinbindningen till cellytan är kolesterolberoende.
Målet med studien var att förklara och studera CDTs internaliseringsväg från
bakterien Haemophilus ducreyi (HdCDT). I studien analyserades toxinbindning på
cellytan, nedbrytning i cytosolen och CDT-känsligheten hos några cellinjer.
Toxinets bindning undersöktes genom ett bindningsexperiment där celler inkuberades
med fluorescentmärkt HdCDT tillsammans med Koleratoxin eller Perfringolysin.
Därefter detekterades bindningen med hjälp av fluorescensmikroskop. För att ta reda
på toxinets nedbrytning i cytosolen användes fyra plasmider med den aktiva
toxinsubenheten i. Dessa plasmider transfekterades i en vildtyp cellinje och en
muterad cellinje som har en ökad cytosolisk nedbrytning, sedan spårades
transfektionen med hjälp av fluorescensmikroskop. För att undersöka hur känsliga
cellinjerna är för CDT gjordes western blots and cellcykelanalyser.
Resultatet i studien visar att förmodligen binder HdCDT till kolesterolrika områden
på cellmembranet, detta grundat på jämförelser med andra toxiner som gör på samma
sätt. Plasmiderna med aktiva subenheten var felkonstruerade, vilket innebär att det
inte blev något resultat av studien om nedbrytning i cytosolen. Analyserna från
cellinjerna visar att myc kan ha en viktig funktion vid toxininducerad celldöd.
a Guerra
mensarbete i biologi, 20 p, VT 2004
itutionen för biologisk grundutbildning, Uppsala universitet
dledare: Monica Thelestam and Teresa Frisan, MTC, Karolinska Institutet
