PI Signaltransduktion Fosfatidylinositol och sekundära budbärare • Fosfolipas C (β, γ), PLCβ, γ • PLCβ – GPCR, PLCγ RTK/Cytokinreceptorer – IP3, DAG – Ca2+ • Calmodulin + olika Ca bindande proteiner • CaM kinaser – Protein kinas C, PKC • NO cGMP • Fosfoinositol-3-kinas, PI-3 kinas CMB Sammanfattning av receptor och signaltransduktionsvägar – Protein kinas B (PKB/Akt) Signalling by the membrane Extra cellular Lipid bilayer Intracellular 1 Membranlipider: Fosfolipider Sekundära budbärare Olika 2:a budbärare medverkar i intracellulär signalering Påverkar bl.a. kinaser Fosfatidylinositol (PI) PI= Phosphatidyl-inositol purinderivat (adenosin, guanosin) Ca 2+ Normalt 10 -7 M i cytosolen inositol-1,4,5-trisfosfat (IP3) 1,2-diacylglycerol (DAG) Lodish Fig 15-9 Inositol – en central aktör OH 5 6 HO 1 OH 4 OH HO OH 3 2 fosfolipid Syntesen av PhosphoInositider, DAG och IP3 Inositol Följ steg för steg! Inositol — 6-värd cyklisk alkohol = Phospho-inositider Lodish Fig 15-35 2 Fig 15-35 Fig 15-35 Phospholipase C, PLC DAG • Phospholipas C; 13 isotyper – två huvudtyper PLCβ och PLCγ – PLCβ – aktiveras av vissa GPCRs (membran associerat) – PLCγ – aktiveras av många RTKs och cytokinreceptorer (kan binda membranet) IP3 Lodish Fig 15-35 3 PLC aktivering ger klyvning av PI, Ca2+frisättning och aktivering av PKC Ca2+ Vad sker nedströms om PLC? Ca2+-joner i ER active IP3 reglerar Ca2+ frisätts i cytosolen från ER Produktion av “2d messengers”: PI3 , DAG , Ca2+ Proteinkinas C (PKC) aktiveras av Ca2+ och DAG Effektor: Protein kinas C, PKC Mål: varierande, bla glukos metabolismen PLC aktivering ger extracellulär Ca2+frisättning och ökad [Ca2+ ]cyt Ca2+-joner i ER IP3 reglerar Ca2+ frisätts i cytosolen från ER Proteinkinas C (PKC) aktiveras av Ca2+ och DAG [Ca2+ ]cyt ökar [Ca2+ ]ER minskar Lodish Fig 15-36 modifierad DAG reglerar proteinkinas C • Funktionen hos DAG är att aktivera PKC på insidan av cellmembranet • Diacylglycerol (DAG) förblir membranassocierad • Proteinkinas C regleras också av Ca2+ i cytosolen • Samspel mellan de två grenarna i inositollipidsignalvägen [Ca2+ ]cyt ökar [Ca2+ ]ER minskar Lodish Fig 15-36 modifierad Öppnar kanal mot extracellulär Ca2+ 4 Aktivering av PLCβ av GPCRs Aktivering av PLCγ av RTKs och cytokin receptorer PLCγ binder till en aktiverad RTK genom sin SH2 domän och förs upp till insidan på membranet. PLCγ binder till PI 4,5-P2 med PH domänen. RTK fosforylerar PLCγ vilket ökar dess katalytiska aktivitet att klyva PIP2 till DAG och IP3 PH-domain (pleckstrin homology domain): binder PIP2 fosfolipider Gα0 eller Gαq P PLCγ P GPCRs som interagerar med vissa G protein (Gα0, Gαq) kan aktivera PLC SH2-domän: binder Fosfo-Y, PLCγ är ett multidomänprotein som lokaliseras till membranets insida med SH2 domänen till fosfo-Y i aktiverad RTK PH domän: binder PIP2 fosfolipider “CCC”-regeln • PLC • Ca2+ • PKC (DAG-IP3) Katalytisk domän SH2 domän: binder Phospho-tyrosin i RTKs, 5 Ca2+ har många effekter i cytoplasman Calmodulin binder fyra Ca 2+-joner • Påverkar olika Ca2+ – bindande proteiner – Calmodulin ett av de viktigaste – Modulator av andra proteiner • Påverkar membranvesikeltransport och fusion med plasmamembranet • Muskel kontraktion • cAMP nedbrytning • Kväveoxid (NO) syntes Calmodulin i cytosolen medierar Ca2+-effekter i cytoplasman Påverkar Ca2+/calmodulin-beroende kinaser, aktiverar cAMP-degradering och NO-syntes Lodish Fig 3-31 NO och intracell. guanylatcyklas NO syntas (NOS) • Syntes av kväveoxid ( NO ) av enzyme NO syntas (NOS) L-arginine + 3/2 NADPH + H+ + 2 O2 Ca2+ = eNOS3 (endotelialt Nos) citrulline + NO + 3/2 NADP+ Lodish Fig 15-37 Cykliskt GMP Relaxerar glatta muskelceller kring blodkärl 6 Kväveoxid och cGMP-syntes • Aktiverat Ca2+/calmodulin stimulerar bildning av gasen kväveoxid (NO, kvävemonoxid) från arginin • Löslig cytosolisk och transmembran form av guanylatcyklas • Lösligt guanylatcyklas aktiveras av NO • Cykliskt GMP reglerar aktiviteten hos specifikt proteinkinas (PKG), leder till muskel-avslappning runt blodkärlen Sammanfattning av receptor och signaltransduktionsvägar Phosphatidyl Inositol-3 kinas (PI-3K) Effektor: Aktivering av protein kinas B, PKB (Akt) Mål: anti-apoptotisk reglering, insulin reglering mm. Translokering av PI-3 kinaset till sitt substrat med hjälp av RTKs och cytokin receptorer PI-3 K binder till en aktiverad RTK genom sin SH2 domän och förs upp till insidan på membranet. PI-3 kinaset fosforylerar PI 4,5-P2, och PI 4-P. SH2-domän: binder phospho-Y i RTK, P PI-3 K Kinase domän Modifierad fig 7 Mer om fosfatidylinositolerna Lodish Fig 16-25 Ingen PLCklyvning PIP-5 kinas PIP-5 kinas Fosfatidylinositol4-fosfat PI-3 kinas Lodish Fig 16-25 PI3-kinas aktiverar PKB/Akt • Proteinkinas B/Akt (stimulerar bl.a. cellöverlevnad) • RTK-signalering via Ras-oberoende väg (PI-3 kinas, Akt) PKB (=Akt) Många substrat, beroende på RTK • Inhibering av pro-apoptotiskt celldödsprotein (Bad) • Inhibering av pro-apoptotiska transkriptionsfaktorer (FoxO3a) Insulin receptor (RTK) aktiverar PKB PKB aktiverar glukos transportörer (GLUT4) Glukos tas då upp av cellerna Lodish Fig 16-26 8 Glukos leder till insulin-frisättning av beta cellerna i pankreas Sammanfattning • Sekundära budbärare deltar i en rad signalöverföringar i cellen • Aktivering av fosfolipas C ger IP3 som reglerar fritt Ca2+ och DAG som tillsammans aktiverar proteinkinas C • PI-3 kinas fosforylerar fosfatidylinositoler i cellmembranet vilka leder till aktivering av PKB • Signalkaskaderna aktiverar protein kinaser (PKC resp. PKB) med olika substrat bla. transkriptionsfaktorer som translokeras till kärnan 9