Analys av ett salivprov för DNA
Den nya DNA-lagstiftning som trädde i kraft den 1 januari 2006 innebär
bland annat att jämförelseprover från en person kan tas som salivprov. Provet tas
genom att en mjuk skumgummispatel gnuggas mot insidan av provgivarens kinder.
Här kan du steg för steg följa hur den kriminaltekniska analysen av salivprovet går till.
Vad är DNA och vilken del är det som analyseras?
Primrar är sekvenser
som hittar de olika
STR-områdena och
visar var på DNA:t
kopieringen ska börja.
Byggklossar för att
bygga DNA, det vill
säga de olika kvävebaserna (nukleotiderna)
Nukleotid A
(adenin)
Nukleotid C
(cytocin)
Nukleotid T
(tymin)
Nukleotid G
(guanin)
A
PCR-mixen tillsätts till de rensköljda
diskarna. Plattan med dessa placeras
i PCR-maskinen.
G
T
I kroppens alla cellkärnor finns vår
arvsmassa (DNA) samlad i kromosomer.
DNA-molekylen är spiralformad och består av sammanbundna strängar
som förenas av fyra kvävebaser (nukleotider); adenin (A), tymin (T),
cytocin (C) och guanin (G). Ett A i den ena strängen motsvaras alltid av
ett T i den andra och C i den ena av ett G i den andra. Förenklat kan
man säga att kombinationen av basparens ordningsföljd längs
DNA-molekylen ger oss våra egenskaper och anlag.
2. PCR-mix tillsätts
Plattan förbereds för att köras i en PCR-maskin. PCR
står för Polymerase Chain Reaction och går ut på
att masskopiera de intressanta STR-områdena så
att dessa ska synas ordentligt när man sen gör en analys.
Först tillsätts en PCR-mix, en blandning av fyra viktiga
beståndsdelar.
Taq-polymeras är ett
enzym som styr byggandet av kopiorna.
Kan liknas
vid små,
mycket
noggranna
hantverkare.
Fluoroforer är bundna
till primrarna och är inmärkta i tre olika färger. Det är dessa som
detekteras i slutet
av analysen.
4. Separering och utläsning
När PCR-kopieringen är klar har man miljontals kopior
av de 10 STR-områdena färglagda med fluorescerande
molekyler. Dessa ska nu separeras och sorteras.
Metoden som används kallas kapillärelektrofores.
Provet sugs in
i DNA-typbestämningsmaskinen.
I maskinen finns
en kapillär (ett
mycket tunt rör)
i vilken de olika
STR-bitarna börjar
vandra uppåt. De
korta fragmenten
rör sig snabbare
än de längre.
I kapillärens slutände
sitter en detektor. Den
läser av när de olika
STR-bitarna passerar
och markerar detta i ett
elektroferogram.
A
B
Detektor
C
PCRmaskin
C
A
B
C
3. Kopiering
Kapillär
Tid
PCR-maskinen är ett värmeblock som ändrar temperatur efter ett visst schema. Varje cykel består av
tre olika temperatursteg som aktiverar olika delmoment i kopieringen av STR-områdena.
STR-bit
Det finns 16
kapillärer i en
maskin.
DNA-typbestämningsmaskin
Färdig sträng
Detektor
DNA:t består av ca 3 miljarder baspar men endast en miljondel undersöks vid en analys. Det är tio
speciellt utvalda områden av molekylen, så kallade STR-områden, som granskas.
Ögonfärg
Nonsens-DNA
Primer
Hårfärg
STR-område
Dessa STR-områden ligger i de delar av DNA-spiralen som kallas "nonsens-DNA". Dessa delar
innehåller inte några kŠnda anlag såsom ögonfärg, musikalitet, hårfärg eller liknande.
Däremot skiljer sig olika individers arvsmassa mycket åt i just STR-områdena.
1. Utvinning av DNA
Först värmer man till 94 grader.
DNA-molekylen särar på sig
och blir till två enkelsträngar.
2. Cellerna överförs
från skumgummispateln till ett rosa
specialpapper, FTA.
Kemikalier i papperet
gör att cellerna i
provet spricker upp,
DNA frigörs och
binds till papperet.
DNA-provet tas med en
skumgummispatel
som gnuggas mot
insidan av kinden
för att lossa och
samla upp celler
från slemhinnan.
Primer
Sedan kyler man till 59 grader
varvid primrarna fäster
där STR-områdena börjar
på strängarna.
o
94
59
Temperaturen höjs igen till 72
grader och Taq-polymeraset
gör sitt jobb.Det är många
nukleotidbyggklossar
som ska på plats.
o
72
5. Utvärdering
Topparnas placering i elektroferogrammet visar längden
på de olika STR-bitarna. Den slutliga DNA-profilen i
sifferform kan nu jämföras med andra resultat från
exempelvis DNA-spårregistret.
o
15
3. Små rundlar,
så kallade diskar,
stansas ut ur
FTA-papperet och
placeras i brunnar
i en s k platta,
varefter de sköljs
rena med vatten.
Tvinnat
DNA
Kromosomer
Cell
För varje temperaturcykel
om vardera tre minuter
fördubblas STR-bitarna.
Efter 29 cykler har man
miljontals kopior.
Samtliga är nu
dessutom
markerade med ett
fluorescerande
färgämne för att
kunna detekteras
vid utläsningen.
14
16
9
16
20
10
23
O.S.V
O.S.V
O.S.V
X
12
Y
14
2 kopior
4 kopior
8 kopior
16
32
64 128
28
13
7
15
12
31
24
9.3
15
26
Den färdiga DNA-profilen i sifferform:
D3 VWA D16 D2 D8 D21 D18
D19
TH01
FGA
15/16
14/15
7/9.3
24/26
14/16
9/10
20/23 12/13
28/31
12/15
Illustration: MARTIN EK [email protected]
