1 (2) INSTRUKTION Biologiavdelningen [email protected] 2017-02-16 Referensmaterial för mikrobiologiska livsmedelsanalyser Referensmaterialet är till för internt kvalitetskontrollarbete på mikrobiologiska livsmedelslaboratorier. Materialet kan efter upplösning användas för kvantitativ kontroll av mikrobiologiska livsmedelsanalyser samt för direkt eller indirekt testning av kvalitén på mikrobiologiska medier. Beteckning: Food 2015:12 Tillverkningsdag: 2015-03-25 Tillverkare: Livsmedelsverket, Sverige Förvaring: −18°C eller lägre Hållbarhet: t.o.m. februari 2018 Tabell 1: Mikroorganismer som ingår Bakterie Stam Micrococcus sp. SLV-055 Klebsiella oxytoca SLV-089 Escherichia coli SLV-082 Staphylococcus aureus SLV-350 Clostridium perfringens SLV-442 Enterococcus faecalis SLV-051 Bacillus cereus SLV-556 Candida sp. SLV-052 Kvalitetskontroll Referensmaterialet undersöks kontinuerligt vid Livsmedelsverket för kontroll av homogenitet och stabilitet. Beredning av prov Lös upp vialens innehåll med 4 ml rumstempererat peptonvatten (0.1%) med NaCl. Överför suspensionen till en flaska med 100 ml peptonvatten (0.1%) med NaCl och blanda noga. Totalvolymen 104 ml motsvarar det ospädda prov som ska analyseras. Utförande av analyserna Analyserna utförs enligt laboratoriets metodbeskrivningar. 2 (2) INSTRUKTION Biologiavdelningen [email protected] 2017-02-16 Kontrollintervall Tabell 2 visar Livsmedelsverkets initiala kontrollgränser. De kan användas innan egna kontrollintervall kan upprättas. Intervallet bygger på spridningsmått, erhållna dels från Livsmedelsverkets analyser enligt referensmetoder angivna i tabell 2, dels från resultat från analyser utfördra på 10 laboratorier utsedda av Livsmedelsverket. Koncentrationen av mikroorganismer anges i form av tiologaritmerade värden och toleransintervallet anger övre och nedre gräns var emellan ett enskilt analysresultat bör hamna för att anses rätt (med 95 % sannolikhet). Tabell 2: Initiala kontrollgränser för RM Food 2015:12 Analys Kontrollgränser Referensmetod (log10 cfu/ml) Aeroba mikroorganismer 6,6 – 7,3 NMKL nr 86 2013 Koliforma bakterier, 37°C 4,6 – 5,7 NMKL nr 44 2004 a Koliforma bakterier, 44°C 4,1 – 5,2 NMKL nr 125 2005 Enterobacteriaceae 4,8 – 5,9 NMKL nr 144 2005 Escherichia coli 4,1 – 5,2 NMKL nr 125 2005 Clostridium perfringens 3,2 – 4,1 NMKL nr 95 2009b Koagulas positiva stafylokocker 4,7 – 5,3 NMKL nr 66 2009 Enterokocker 5,2 – 6,0 NMKL nr 68 2011 Presumtiv Bacillus cereus 4,2 – 5,2 NMKL nr 67 2010 Jäst 4,2 – 4,9 NMKL nr 98 2005 På Livsmedelsverket har proven gjutits in direkt i violett röd galla agar utan föregående preinkubering. b På Livsmedelsverket har vi noterar att resultat hamnar i den nedre delen av intervallet om pH i tryptos sulfit cycloserin agar är >7,6. a Kontrolldiagram Instruktion för konstruktion av kontrolldiagram finns på webbplatsen www.livsmedelsverket.se/RM-micro. Upplysningar Biologiavdelningen, Livsmedelsverket, Sverige www.livsmedelsverket.se/RM-micro e-post: [email protected] Provberedning av frystorkad kulturblandning i glasvial, RM-livsmedel 1. Vrid fliken på aluminiumkapsylens översida i pilens riktning med en peang eller liknande. 2. Avlägsna aluminiumkapsylen. 3. Tag bort gummiproppen. Bränn försiktigt av vialens öppning över gaslåga. 4. Tillsätt 1 ml spädningsvätska. 5. Lös upp innehållet med en steril pasteurpipett . För över suspensionen till flaska eller kolv med 100 ml spädningsvätska. Upprepa momenten 4 och 5 ytterligare tre gånger med samma pasteurpipett. Skölj vialens väggar noga. 6. Efter noggrann omblandning är provet klart för analys. Dessa 104 ml motsvarar det ospädda provet som ska analyseras. Referensprov som innehåller mögelsvamp ska stå i 30 min innan analys. Biologiavdelningen, Livsmedelsverket, Uppsala