Lisette Laurin
Hur hittar man en viruspartikel som är 0,000019 mm bred?
Sockerbetan är en rotfrukt och en viktig gröda i vårt samhälle. Från sockerbetan
utvinner man ca 18 procent socker och totalt står sockerbetan för 30 procent av
världens sockerproduktion. Beet soilborne mosaic virus (BSBMV) är ett virus som
angriper sockerbetan. BSBMV orsakar mosaikmönster och gulnad av venerna på
sockerbetsbladen som kan leda till torra partier. Detta i sin tur orsakar en lägre
sockerhalt i betan. I vissa fall kan även BSBMV påverka roten så att den blir mindre
och formad som ett vinglas.
BSBMV är ett stavformat virus och är 19 nm brett och 50 till 400 nm långt, det vill
säga 0,000019 mm brett och 0,00005 till 0,0004 mm långt. Viruset består av ett
proteinhölje med fyra enkelsträngade RNA-kedjor inuti. Det är från dessa fyra RNAkedjor viruset kodar för sitt proteinhölje, replikering, symptom på betan m.m. RNAkedjorna är virusets arvsmassa.
I mitt examensarbete var jag intresserad av att utveckla en metod där man på ett
enkelt sätt kan påvisa BSBMV i sockerbetan. I en så kallad ELISA (Enzyme-Linked
ImmunoSorbent Assay) analys kan man genom att använda antikroppar mot viruset
påvisa existensen av BSBMV i extrakt från sockerbetan på ett enkelt och snabbt sätt.
För att producera antikroppar mot BSBMV ska först viruset renas fram från måll-blad
som blivit artificiellt infekterade. Först krossas infekterade blad i en mortel med
flytande kväve, därefter extraheras viruset från cellerna och fälls ut. BSBMV
separeras från andra molekyler genom centrifugering i en ultracentrifug. Här skiktas
de olika molekylerna beroende på densitet. Genom att veta ungefär var ens virusband
ska hamna efter centrifugeringen kan man ta ut ett prov innehållande framrenat virus.
Detta framrenade virusprov immuniseras i en kanin som producerar antikroppar mot
viruset. Från kaninen tas serum som innehåller stora mängder antikroppar mot
BSBMV. En typ av antikropp, kallad IgG, renas fram från antiserat och just IgGantikroppen används vid ELISA-analys. Ett konjugat gjordes genom att koppla på ett
enzym på antikroppen som gör att det blir synligt för ögat vid kontakt med ett
substrat. De antikroppar som vi producerade mot BSBMV visade sig vara specifika
mot BSBMV.
Vid framtida tester kan man med hjälp av de producerade antikropparna snabbt och
enkelt se om BSBMV finns i sockerbets- eller jordprov. Viruset tycks kunna
interagera med andra jordburna virus och genom diagnostisering av BSBMV kan man
t.ex. lättare tolka resultat från fältförsök.
Handledare: Einar Everitt, Britt-Louise Lennefors
Examensarbete 20 p i mikrobiologi/virologi HT/VT 2007
Institutionen för cell- och organismbiologi, Lunds universitet
Lisette Laurin
Preparation and evaluation of a serological reagent against Beet
Soilborne Mosaic Virus (BSBMV).
Beet soilborne mosaic virus, BSBMV, is a virus infecting sugar beets causing a
disease similar to rhizomania (caused by Beet necrotic yellow vein virus, BNYVV).
Rhizomania is one of the most destructive diseases of sugar beet, not only because it
causes a severe loss in root yield and sugar content, but it is also difficult to control. It
is of interest to be able to detect the presence of BSBMV in sugar beets by analyses
such as ELISA and therefore it was of interest to produce antibodies against BSBMV.
In this study BSBMV was isolated from leaves of Chenopodium quinoa. Virus was
precipitated with NaCl/PEG 6000 and purified by gradient centrifugation in the
preparative ultra centrifuge. Given that BSBMV only is fairly well studied different
gradients were employed to attain the most profitable method. Obtained virus
particles were analysed by SDS-PAGE and visualized in the EM. Purified and
concentrated BSBMV was injected in rabbits to produce antibodies, which thereafter
were studied in ELISA for their affinity and specificity to its corresponding antigen.
The results were successful in view of the fact that the newly produced antibodies
indeed had a high affinity to its antigen and also that the specificity was exclusively
against BSBMV.
Supervisors: Einar Everitt, Britt-Louise Lennefors
Degree project 20 credits in Microbiology/Virology. Spring/Autumn 2007
Department of Cell- and Organism-biology, Lund University
