Monoclonal Mouse
Anti-Human
Mammaglobin
Clone 304-1A5
Kod M3625
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik
Denna antikropp är avsedd för laboratorieanvändning för att med ljusmikroskopi kvalitativt identifiera mammaglobin-uttryckande celler i
normala och neoplastiska vävnader med immunhistokemiska (IHC) testmetoder. Positiva resultat är till hjälp vid klassificeringen av
bröstcancer. Den kliniska tolkningen av närvaro eller frånvaro av positiv färgning ska kompletteras med morfologiska och histologiska studier
med ordentliga kontroller. Tolkning måste göras av kvalificerad specialist inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Synonym
Antikroppsynonym: MGA
Antigensynonym: Mam-1A5
Sammanfattning och förklaring
Mammaglobin är ett 93-aminosyraprotein med homologi till andra medlemmar av sekretoglobin-uteroglobin-familjen som ursprungligen
identifierades i undersökningar av differentiellt uttryckta cDNA från bröstkarcinomcellinjer.1 Uttryck av mammaglobin har rapporterats i olika
maligna och icke-maligna vävnader som härrör från kvinnligt könsorgan med RT-PCR.2 Uttryck av mammaglobin-genen och -proteinet har
också uppvisats i neoplastiska bröstvävnader och i en underuppsättning av normala bröstepitelceller inom acini av lobuli av typ I och II och
inom cylinderepitelceller i terminala körtelgångar.3 Uttryck av mammaglobin har påvisats i väl, måttligt och svagt differentierade invasiva
körtelgångskarcinom med IHC och i metastatiska och ockulta bröstkarcinom med RT-PCR.3,4 Uttryck av mammaglobin är starkt begränsat till
bröstvävnad och detekteras inte i de flesta utvärderade normala vävnadstyper, med undantag av hud.1
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer för:
(1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning, (5) Färgningsprocedur,
(6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Kod M3625
Monoklonal mus-antikropp levererad i flytande form som vävnadskultursupernatant i 0,05 mol/L Tris-HCl, pH
natriumazid. Denna produkt innehåller stabiliserande protein.
7,2, och 0,015 mol/L
Klon: 304-1A51 Isotyp: IgG1, kappa
Mus-IgG, koncentration mg/L: Se etikett på flaskan.
M3625 kan användas vid en spädning på 1:100 vid utförande av IHC med EnVision™+ detektionssystem. Detta är endast riktlinjer. Optimala
antikroppskoncentrationer kan variera beroende på prov och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt laboratorium.
Immunogen
Renat rekombinant mammaglobin-protein, innehållande aminosyror 15–93.1
Specificitet
Monoklonal anti-mammaglobin från mus rapporteras reagera med en konformationell epitop, vilket påvisas av dess brist på reaktivitet med
ELISA med överlappande peptider som motsvarar mammaglobin-sekvensen. Klon 304-1A5 reagerar i Western blotting med rekombinant
mammaglobin och med lysat av bröstkarcinomcellinje MDA-MB-415 och primär brösttumörcellinje 450-17. Ingen reaktivitet uppvisas i primär
bröstcancercellinje 450-88. Även om den förväntade molekylmassan för mammaglobin är 9 kD, detekterade anti-mammaglobin band på 14
kD och 21 kD i Western blotting. Mammaglobin-formen på 9 kD uppvisades i Western blotting efter enzymatisk deglykosylering av MDA-MB415, vilket påvisar glykosylering av mammaglobin-proteinet.1
Material som behövs, men inte ingår
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning och/eller detektionssystemets instruktioner. Föreslaget spädningsmedel för
IHC-procedurer:
Antibody Diluent (kod S0809)
Följande negativa kontroll rekommenderas för IHC-procedurer:
Mouse IgG1 (kod X0931)
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan NaN3, trots att
det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten
vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.5
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala och nationella föreskrifter.
(113644-002)
306574SE_001 s. 1/3
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C. Får ej användas efter det utgå ngsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden
som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och
negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna. Kontakta Dako teknisk service om du observerar oväntad färgning som inte
kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det finns något problem med antikroppen.
Provberedning
Paraffinsnitt
Anti-mammaglobin kan användas på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Förbehandling av vävnad med proteolytiska enzymer
rekommenderas inte.
De avparaffinerade vävnadssnitten måste värmebehandlas före IHC-färgningsproceduren. Värmeinducerad epitopretrieval (HIER) innefattar
nedsänkning av vävnadssnitt i en föruppvärmd buffertlösning som bibehåller temperaturen i ett vattenbad (95–99 °C). Alternativa
värmekällor kan användas för HIER vid validering av den rekommenderade proceduren. Använd ett 40-minuters uppvärmningsprotokoll för
HIER som utförs vid 95–99 °C. Låt kärlet med buffer t och objektglas svalna i 20 minuter vid rumstemperatur efter värmebehandlingen. Skölj
ordentligt med buffert eller avjoniserat vatten efter HIER. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas
användning av Silanized Slides (kod S3003). Target Retrieval Solution pH 9,0 (kod S2368) eller 10x Concentrate (kod S2367)
rekommenderas.
Kryostatsnitt och cellutstryk
Anti-mammaglobin kan användas för märkning av acetonfixerade kryostatsnitt eller fixerade cellutstryk.
Färgningsprocedur
Följ proceduren för det valda detektionssystemet.
Tolkning av färgningen
Det cellulära färgningsmönstret för anti-mammaglobin är cytoplasmiskt och/eller membranöst.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader1
Vävnadstyp (antal testade)
Bröst (10)
Tjocktarm (5)
Njure (6)
Lever (3)
Lunga (4)
Hjärna (3)
Hjärta (2)
Benmärg (1)
Binjure (3)
Livmoderhals (2)
Hud (7)
Tolvfingertarm (2)
Gallblåsa (1)
Ileum (2)
Äggstock (4)
Bukspottkörtel (2)
Öronspottkörtel (1)
Prostata (4)
Mjälte (3)
Testikel (1)
Skelettmuskel (1)
Livmoderslemhinna (3)
Positivt färgade vävnadselement
5/10 duktala epitelceller
0/5
0/6
0/3
0/4
0/3
0/2
0/1
0/3
0/2
7/7 epitelceller som omger apokrina
och ekkrina svettkörtlar
0/2
0/1
0/2
0/4
0/2
0/1
0/4
0/3
0/1
0/1
0/3
Onormala vävnader1,6,7
Tumörtyp (antal testade)
Bröstcancer (35)
Bröstinfiltrerande duktalt karcinom (IDC) (96)
Endometriekarcinom (4)
Epitelmesoteliom (EM) (16)
Gastrointestinalt karcinom (4)
Urogenitalt karcinom (2)
Lungkarcinom (32)
Äggstockskarcinom (9)
Seröst papillärt äggstockskarcinom (OSPC) (21)
Lungadenokarcinom (PAC) (23)
Endometrioidkarcinom i livmoder (UEC) (18)
(113644-002)
Positivt färgade
tumörer
23/35
78/96
0/4
1/16
0/4
0/2
0/32
0/9
0/21
6/23
6/18
306574SE_001 s. 2/3
Referenser
1. Fanger GR, Houghton RL, Retter MW, Hendrickson RC, Babcook J, Dillon DC, Durham MD, Reynolds LD, Johnson JC, Carter D,
Fleming TP, Roche PC, Persing DH, Reed SG. Detection of mammaglobin in the sera of patients with breast cancer. Tumour Biol
2002;23(4):212-21
2. Grünewald K, Haun M, Fiegl M, Urbanek M, Müller-Holzner E, Massoner A, Riha K, Propst A, Marth C, Gastl G. Mammaglobin
expression in gynecologic malignancies and malignant effusions detected by nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction.
Lab Invest 2002;82(9):1147-53
3. Watson MA, Dintzis S, Darrow CM, Voss LE, DiPersio J, Jensen R, Fleming TP. Mammaglobin expression in primary, metastatic, and
occult breast cancer. Cancer Res 1999;59:3028-31
4. Min CJ, Tafra L, Verbanac KM. Identification of superior markers for polymerase chain reaction detection of breast cancer metastases
in sentinel lymph nodes. Cancer Res 1998;58(20):4581-4
5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of laboratory workers from instrument biohazards and infectious
diseases transmitted by blood, body fluids, and tissue; approved guideline. Villanova, PA. 1997; Order code M29-A
6. Ciampa A, Fanger G, Khan A, Rock KL, Xu B. Mammaglobin and CRxA-01 in pleural effusion cytology: potential utility of distinguishing
metastatic breast carcinomas from other cytokeratin 7-positive/cytokeratin 20-negative carcinomas. Cancer 2004;102(6):368-72
7. Stachurski D, Fanger G, Xu B, Edminston K, Rock KL, Khan A. CRxA-01 and mammaglobin expression in breast cancer: potential role
in differentiating breast cancer from other CK7+/CK20- tumors. (205) Mod Path 2003;16(1):48A
Edition 07/07
(113644-002)
306574SE_001 s. 3/3
