Nya biomarkörer för
diagnostik av tidig
ovarialcancer; studier på
cystvätskor
Karin Sundfeldt och blod
Docent
Kvinnokliniken
Sahlgrenska Akademin vid Göteborgs Universitet
Ovarialcystor/cancer Diagnostik
Gynekologisk undersökning
Vaginalt ultraljud
Blodprov – CA125 – Risk Malignity Index (RMI)
CT / MR
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Ovarial cystor
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Ovarial cancer
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Historia
2002–Lancet; 359, 572-77, Petricoin et. al.
Mass spektrometri av serum – 50+50
Data algoritmer fann mönster inom varje grupp
Validering av algoritmen i 66+50 nya prover
Specificitet 95%, sensitivitet 100%
2001 uppstart Sahlgrenska
Etiskt tillstånd godkänt 2000 för enskilda markörer
Tillägg 2006 - analys av hela proteomet i
samarbetet med Vermillion Inc., CA, USA
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Upplägg av studien – Steg 1
Alla patienter som opereras för ovarialcysta
på Kvinnokliniken, Sahlgrenskas avdelning
för gynekologisk tumörkirurgi
Cystvätska/Blod/Serum
Tumör/Vävnads biopsi
Fryses i -80
Avidentifieras efter säkert PAD + CA-125
svar
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Metod svårigheter
När ta proverna
Hur lång tid tar det innan det fryses
Reproducerbarhet
Gruppstorlek
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Varför cystvätskor?
Outforskad källa för nya biomarkörer
Närmast själva patologin
Mycket höga nivåer av proteiner jämfört
med serum
Lätt tillgängligt – men inte tillåtet?
Nya mål för ”molecular imaging”
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Plasma Proteomet
Albumin
Apolipo-A1*
Apolipo-B
AGP
Lipoprotein A
Factor H
IgG
Transferrin*
Fibrinogen
IgA
α2 macroglobulin
IgM
α1-AT
C3 Comp factor
Haptoglobulin
10%
Ceruloplasmin
C4-Comp factor
Comp factor B
Pre-albumin
Deep
Proteome™
1000-tals
proteiner i små
mängder
C9-Comp factor
C1q-Comp factor
C8-Comp factor
1%
Karin Sundfeldt SFOG 2008
H.J. Issaq, 2003
M.F. Lopez, 2000
Arbetsplan nya biomarkörer
Steg 1 – insamling av material 2002-2006
Steg 2 - 2006
Seldi-Tof MS
Surface Enhanced Laser Desorption and Ionization
–Time Of Flight – Mass Spectrometry
Immunocapture MS
Steg 3 - Utvärdering och intern validering
Steg 4 - Extern validering – prospektiv studie
Steg 5 - Randomiserad kontroll studie
Karin Sundfeldt SFOG 2008
SELDI-ToF Mass Spectrometry
Surface Enhanced Laser Desorption and Ionization –Time Of Flight
– Mass Spectrometry
Denature
and dilute
Specimen
rr11
rr22
rr33
Robotics
IMAC30
IMAC30
rr44
Wash
Q10
Q10
rr55
H50
H50
rr66
CM10
CM10
Internally mass calibrate,
baseline subtract, and intensity
normalize
Spectral Analysis
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Protein peaks generated
SELDI ToF-MS
Surface Enhanced Laser Desorption and Ionization –Time Of Flight
– Mass Spectrometry
Laser
Detector
Proteins are extracted from the ProteinChip Array by Laser
Desorption/Ionization
Ionized proteins are detected and their mass accurately
determined by Time-of-Flight Mass Spectrometry
TOF-MS
Intensity
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Molecular Mass (Da)
Ovarian cancer in the
proteomics era
CM Annunziata, N Azad, AS Dhamoon, G
Whiteley, EC Kohn
Int. Journal of Gynecological Cancer
2008, Volume 18, supplement 1
Review
Patientdata - 2006
första omgången 220(207) patienter
Benign
Borderline
EOC
Germ Cell
Tumor
130
16
48
3
10
42 (30-52)
47 (40-61)
45 (32-51)
46 (20-73)
49 (27-52)
Stage I
12
21
Stage II
1
2
Stage III
2
21
Number
Age (median,
IQ range)
Stage IV
3
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Other
Cancer
Resultat Steg 2 - 2006
700 toppar (arean under kurvan) signifikant
(p<0.05) skilda mellan benigna cystor och
ovarialcancer
Baserat på signifikans nivå har 57 toppar
valts ut för fortsatt analys
Bland dessa var 7 stycken (p<10-10) högre i
benign cystvätska
och 2 stycken (p<10-10) mindre i benign
cystvätska
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Resultat Steg 2 - 2006
Patentansökan 60/908,670, 28 mars 2007
och bekräftad juni 2008.
Titel:
Methods for diagnosing ovarian cancer
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Vad händer just nu – Steg 3
Utvärdering och intern validering
Analys av enskilda toppar/proteiner
Re-analys av cystvätskor
Analys i serum och tumörvävnad
Karin Sundfeldt SFOG 2008
Pågående diskussion
Enskild biomarkör, flera markörer
eller algoritm grupperingar
TRIAGE test – markörer och u-ljud
och CA125
Karin Sundfeldt SFOG 2008
TACK för visat intresse
Björg Kristjansdottir
Doktorand
Pernilla Dahm-Kähler
Janusz Marcickiewicz
Mats Brännström
Karin Sundfeldt SFOG 2008
