Provsvarförklaring
Mikrobiell provtagning av inomhusmiljön med DNA-teknik.
Skillnaden mellan konventionell mikrobiologi och modern DNA-teknik
När mikrobiologer talar om förekomst av mikroorganismer så menar man antalet som
växer på odlingsplattor av konventionellt snitt. Måttet kallas för CFU (colony forming units).
Man kan även titta i mikroskop och räkna antalet bakterier och svampar. Vanligtvis ser man
25 till 50 gånger fler celler från mikroorganismer än när man odlar. Direkträkning i
mikroskop med eller utan infärgning av t.ex. acredin orange ger således ett bättre mått på hur mycket som
förekommer. Däremot vet man inte vilken art det är.
Med realtids-PCR eller QPCR kan man bestämma antalet typiska DNA-snuttar från levande varelser. DNAsnuttarna kan väljas så att de är typiska för släkte, art eller till och med för individ. Väljer man en DNA-snutt
som är typisk för pappersmögel (Stachybotrys chartarum) och inte finns i andra levande
organismer så kan man beräkna hur många celler med det DNA det finns i ett prov. (Det
finns en DNA-sträng per cell i princip).
Metoden är också mycket känslig. I teorin kan en enstaka DNA-snutt detekteras. Läs mer
om QPCR på vår hemsida.
Principerna för anoZonas Sjukahusprov och Hussvampsprov.
När mögel och bakterier växer släpper de ifrån sig celler med sitt DNA på. Särskilt sker detta när svampar
sporulerar men det förkommer också annars. Sporerna eller cellfragmenten är mycket små mindre än 10
miljondels meter. Detta gör att de gärna svävar med även små luftströmmar och följer med luften även genom
mikroskopiska hål.
Så småningom landar de emellertid på plana ytor och hålls kvar i damm som redan ligger där. Fördelningen av
DNA-damm på husets plana ytor motsvarar mängden DNA i rumsluften.
Bäst representatvt blir provet då det tas i en torr miljö långt borta från eventuella tilluftsdon och våtrum.
Varför skall man mäta DNA från mikroorganismer kvantitativt.
Man har länge vetat om att hus med fukt och mögelproblem ger ett dåligt inneklimat. Många människor
upplever hälsobesvär i fuktskadade hus men man har länge letat samband. På senare år har det
uppmärksammats att de toxiner som mikroorganismer producerar även kan mätas i rumsdamm på drabbade
hus. Halterna är extremt låga och de flesta toxinerna är ännu okända.
anoZona ab
Innehar F-skattesedel
Vallongatan 1
Org.nr: 556336-2481
752 28 Uppsala
Bankgiro 5618-5614
Tfn:
018 444 43 41
Fax:
018 55 58 88
E-post:
Internet:
[email protected]
www.anoZona.com
PROVSVARSFÖKLARING
ANOZONA
2
Dessa mögelgifter följer med fragment och sporer från mikroorganismer från själva växtplatsen ut i rummet.
Där får människor kontakt med dem, antingen genom att andas ned dem i lungorna eller att de fäster på huden.
Visserligen ligger de flesta i dammet men när man rör sig i rummet så virvlar dammet upp och man får kontakt
med cellfragment och sporer med toxiner. Ju mer det finns i dammet desto mer kontakt får människorna i
detta rum.
Vad betyder siffrorna och hur skall jag tolka provsvaret.
Mängden organism per
Cm
2
Bedömning
Totalt antal mögel
17 287
10 - 100 ggr mer än normalt
Aspergillus och penicilliearter
10 685
Mycket kraftig förekomst
Stachybotrys chartarum
52
Viss förekomst
Aspergillus versicolor
511
Förhöjd förekomst
Streptomyces spp
17
Viss förekomst
Andel toxinindikatorer
62,1%
Bedömning
Trolig fuktskada
Påverkan på rummet
Tydlig påverkan
1.E+08
Sjukahusprovet
1.E+06
1.E+04
Totalt antal mögel
1.E+02
Bedömning: ”Normalt eller under normalt”.
Streptomyces
spp.
A. versicolor
Stachybotrys
Asp/pen
Totalantal
mögel
1.E+00
Bakgrundsvärdet i helt nya hus är cirka 500 DNA från mögelsvampar (totalt
antal) per kvadratcentimeter. Det är sådant som kommer in utifrån samt
från föremål vi tar in i huset. Vi har satt gränsen för normalt till 1000
2
DNA/cm .
Bedömning Trolig fuktskada.
2
Då antalet totalmögel överstiger 10 000/cm är det vår erfarenhet att orsaken nästan alltid är en fuktskada i
2
huset som påverkar inomhusklimatet. Vi har upplevt upp till 150 000/cm i riktigt allvarligt fuktskadade hus.
Bedömning ”Indikerar fuktskada”
Mellan de båda ovanstående lägena finns en gråzon där bedömningar blir svårare. Om antalet överstiger
normalt med 1-3 ggr så kan ju rena tillfälligheter ligga bakom. Man kan ha t.ex. hanterat möglig ved som vi varit
med om. Det kan även vara så att dammet är över ett år gammalt eller att det finns en fuktskada i andra delar
som dammar in i detta rum. Det kan ju även finnas en liten mögelhärd någonstans i huset som det ju nästan
alltid gör i ett äldre hus.
Vid dessa tillfällen så tittar vi på andelen av de organismer som startar snabbast vid fuktskada. Vi har funnit en
gemensam DNA-snutt i Aspergillus och Penicilliumarterna. Det flest i denna grupp startar snabbt vi c:a 75-80%
RH och brukar betraktas som säkra fuktindikatorer. I de fall då andelen asp/pen är mer än normalt indikerar
provet en fuktskada .
MIKROBIELL PROVTAGNING MED QPCR
ANOZONA
Aspergillus och penicillier
I 46 % av kolonier av mögel i gruppen har man kunnat mäta upp svampgifter/toxiner. En del av arterna som
Aspergillus flavus har starka toxiner, andra producerar inte några idag kända sådana. Vissa arter i gruppen kan
angripa människor och djur med nedsatt immunförsvar. Sanering bör ske vid Kraftig förekomst.
Stachybotrys chartarum
Denna art producerar i över 90% av fallet toxiner och har ett dåligt rykte i
innemiljökretsar. Den sägs i mycket höga halter förorsaka lungblödningar och
näsblod i mildare fall. Det är osäkert om stammarna i Skandinavien har dessa
egenskaper. Fallen av lungblödning har främst funnits kring de stora sjöarna i
Förenta Staterna vid gränsen mot Kanada.
Stachybotrys växer helst på cellulosarika material som tapet, gipsskivor trä etc.
Den vill helst ha det riktigt fuktigt, nära fritt vatten. Med den byggnadsteknik vi har i Sverige är det inuti
mellanväggar av gipsskivor som är den vanligaste växtplatsen. Undersök miljön från Viss förekomst.
Aspergillus versicolor
Från början valdes denna organism in i analysen eftersom den kan visa på intermittent uppfuktning, t.ex.
säsongsvis. Den är också en välkänd fuktmarkör. På senare tid har man börjat misstänka att den spelar en
betydligt större roll när det gäller hälsobesvär i inomhusmiljön.
Streptomyces spp
Streptomyces producerar Streptomycin och en del andra toxiner. Den producerar även Geosmin, ett ämne som
luktar starkt av mögel eller potatiskällare. Eftersom det är en jordbakterie hittar vi den ofta i krypgrunder och
på betongytor men den växer även på en lång rad andra ställen. Den bör absolut saneras vid luktproblem.
Hussvamp
När den mogna hussvampen sporulerar finns det ingen tvekan. Alla ytor i hela
huset beläggs med ett kanelliknande pulver. I det dammet kan man mäta upp
över 250 000 DNA-snuttar typiska för hussvamp per kvadratcentimeter.
Hussvampen ger ifrån sig celler så fort den etablerat sig huset och sporulerar i
liten skala redan efter ett par månader. Då kan man mäta upp halter mellan 50
2
och 5000 DNA / cm om provet är taget i rummen ovanpå skadan. Vid lägre
halter finns ett antal alternativ som kan behöva diskuteras med lab.
I det fall där man tagit provet genom att topsa en fruktkropp kan man antingen få mycket stora antal
indikerande att man träffat rätt och att det verkligen rör sig om Serpula lacrymans. Eller så får man lägre halter,
ungefär som vid dammprovtagning och då har man hussvamp i huset men inte just här.
Om DNA-mätnigen visar 0 så finns det med stor sannolikhet inte hussvamp i huset.
Sanering
Vi har en lite skrift om sanering som kan laddas ned på hemsidan www.anoZona.com
3
PROVSVARSFÖKLARING
ANOZONA
4
Referenser:
Quantitative PCR analysis of fungal DNA in Swedish day care centers and comparison with building
characteristics and allergen levels
GH Cai, K Bröms, B Mälarstig, ZH Zhao… - Indoor air, 2009
Fungal DNA and pet allergen levels in Swedish day care centers and associations with building characteristics
Gui-Hong Cai,*a Björn Mälarstig,b Anders Kumlin,c Ingrid Johansson,c Christer Jansond and Dan Norbäck
Journal of Environmental Monitoring
Fungal DNA, allergens, mycotoxins and associations with asthmatic symptoms among pupils in schools from
Johor Bahru, Malaysia.
Cai GH, Hashim JH, Hashim Z, Ali F, Bloom E, Larsson L, Lampa E, Norbäck D. Pediatr Allergy Immunol. 2011 May
High environmental relative moldiness index during infancy as a predictor of asthma at 7 years of age
Tiina Reponen, PhD*; Stephen Vesper, PhD†; Linda Levin, PhD*; Elisabet Johansson, PhD*;Patrick Ryan, PhD*;
Jeffery Burkle, MS*; Sergey A. Grinspun, PhD*; Shu Zheng, MS*;David I. Bernstein, MD*‡; James Lockey, MD,
MS*‡; Manuel Villareal, MD‡;Gurjit K. Khurana Hershey, MD, PhD•; and Grace LeMasters, PhD*, Ann Allergy
Asthma Immunol. 2011;
Detection and molecular characterization of filamentous actinobacteria and thermoactinomycetes present in
water-damaged building materials
1
1
1
2
3
4
5
M.-L. Suihko , O. Priha , H.-L. Alakomi , P. Thompson , B. Mälarstig , R. Stott , M. Richardson
There is more mould in mouldy houses
Björn Mälarstig1,* and Pär Håkansson. Proceedings from INDOOR AIR 2008, 17-21 August 2008, Copenhagen.
Microorganisms, MVOCs and the health complaints
B Wessén, J Honkanen and B Mälarstig Indoor Air 2002 Abstracts
Quantitative PCR analysis of house dust can reveal abnormal mold conditions.
Meklin T, Haugland RA, Reponen T, Varma M, Lummus Z, Bernstein D, Wymer LJ, Vesper SJ.
National Exposure Research Laboratory, US Environmental Protection Agency, Cincinnati, OH 45268, USA
