KriminaltekniskDNA-analys(nivå1)
NiskamedhjälpavDNA-analystaredapåvemsDNAsomhittadespåbrottsplatsen.
A)Byggihopelektroforeskammaren:
1. Byggihopelektroforeskammarenenligtnedanståendebilder.
2. Placeradenblå”kammen”ielektroforeskammaren.Placera”kammen”vidnollstrecket.
B)Tillverkaelektroforesgelen:
1. Användenvåg,en250mlE-kolv,ett25mlmätglas,en3mlplastpipettochenmikropipett
förattblandatillgelen.
2. BlandatillgeleniE-kolvenenligtnedanståendetabell.Obs.Omengruppskagöraengelsom
är7*14cmsåmåstenedanstående”recept”fördubblas.
Tabell1:Tillverkningavelektroforesgel(koncentration;0,8%)
Agarospulver
(g)
0,24
Koncentrerad
buffert50x(ml)
Destilleratvatten
(ml)
0,6(600mikroliter)
29,4
Totalvolym
(ml)
30
Tipsnärniskablandatillgelen:
• Väguppagarospulvretpåettfiltrerpappersomniharplaceratpåvågen.
• Mätuppmängdenkoncentreradbuffertmedenmikropipett(obs.mikropipettenmäteri
mikroliteriställetföriml).
• Mätuppmängdendestilleratvattenmedhjälpavett25mlmätglasochenplastpipett.Mät
förstupp25mlochtillsätttillE-kolven.Mätsedanuppytterligare4,4mlochtillsätttillEkolven.
3. RöromochskakaE-kolvenförsiktigtsåattingaklumparärkvar.
4. TaenmärkpennaochritaettstreckpåutsidanavE-kolvendärvätskenivånbefinnersig.
5. Täcköppningenpåbägarenmedplastfolie.Pådettasättavdunstarinteförmycketvätska.
6. VärmE-kolvenienmikrovågsugnica45-60sekunderpåhögeffekt.Blandningenskalösasig
fullständigt.Värmlängreomblandningeninteharlöstsig.
7. Obs.TautbägarenmedvärmehandskarochhållintehuvudetovanförE-kolven!
8. Omvätskevolymenharsjunkitp.g.a.avdunstningsåfyllernipåmeddestilleratvattenupptill
detutritadestrecket.
9. Obs.Mättemperaturenmedentermometerochväntatillstemperaturenärlägreän60
graderinnannigörnågotmer!
10. Nästastegäratttömmagelenielektroforeskammaren.Obs.gelenfårintevaravarmareän
60gradernärdettasker!
11. Väntasedanica20minutersåattgelenhinnerstelnatillräckligt.
C)Tillverkabuffertlösningen:
1. Medangelenstelnarblandarnitillbuffertlösningen.OmtvågrupperkörsinaDNA-proveri
sammaelektroforeskärlsåfårgruppernablandatillhälftenvar.
2. Buffertlösningenblandastillienvarsin500mlE-kolv,enligtnedanståendetabell:
Tabell2:Tillverkningavbuffertlösningförettelektroforeskärl
Grupp1:
Grupp2:
Totalmängd:
Koncentrerad
buffert(ml)
4
4
8
Destilleratvatten
(ml)
196
196
392
Tipsnärniblandarbufferten:
• Mätuppbuffertenmedhjälpavett10mlmätglas.
• Mätuppdestilleratvattenmedhjälpavett250mlmätglas.
3. Skakaflaskansåattingaklumparfinnskvar.
Totalvolym
200
200
400
D)Förberedelektroforesen:
1. Närgelenharstelnattarnibort”gummiväggarna”runtelektroforeskammaren.Obs.
Väggarnagårlättsöndersåettbratipsärattförstskäralossgelenmedenvasskniv.
2. Tasedanförsiktigtbort”mittfåran”.Dradenförsiktigtraktupp.
3. Nästastegäratt”ladda”gelenmedDNA-proverna.
4. Föröver38mikroliterDNAfrånvarjetubtilldeolikaspårenigelen.Användenmikropipett
förattgöradetta.Ommanvilltränapåpipetteringkanmanbörjamedattpipetteraned2
övningsprovibrunn1och2(blåfärg).Obs.Bytpipettspetsmellanvarjeprov!
Tipsvidpipetteringen:
• Stoppaintenedpipettenibottenavgelen,dåärdetsvårtattfåutDNA:tochrisken
ärstorattdetblirhålibottenpågelen.
• Sticknedpipettenprecisnedanförkantenpåbrunnen.Förpipettenåtsidanochse
omgelenförflyttarsiglitegrann.Omdengördetsåvetduattduäribrunnenochdå
tryckerduförsiktigtutDNA:tibrunnen!
5. FöröverochplaceraDNA:tisammaordningsominedanståendetabell:
Tabell3:DNA-provernasplaceringigelen
Spår:
1
2
3
4
5
6
Tub:
B
D
E
F
DNA-prov:
Övningsprov(färgprov)
Övningsprov(färgprov)
DNAfrånhårstråetfrånbrottsplatsen
DNAfrånmisstänkt1
DNAfrånmisstänkt2
DNAfrånmisstänkt3
6. Placeragelenielektroforeskärlet.
7. Fyllelektroforeskärletmedbuffertlösningen.Setillsåattgelernaärhelttäcktav
buffertlösningen!
E)Körelektroforesen:
1. Näralltärfärdigtsätternipålockettillelektroforeskärletochkopplarinkablarnai
spänningsaggregatet.
2. Slåsedanpåströmmenochsedanärdetbaraattvänta.
3. Dettarca40minuterinnanelektroforesenärklar.
4. Knäppavströmmenochlyftavlocketnärelektroforesenärklar.
F)Analyseraresultatet
1. Tittapågelenförattseomnikansenågrafärgadeband.Jämförbandmönstretfrån
fyndplatsenmedbandmönstrenfråndemisstänktapersonerna.
2. VemsDNAfannspåbrottsplatsen?
