Sida 1 av 2 CD2 PE‐Cyanine7 Kallas även: LFA‐2 Katalognummer: 9025‐0029‐120 (120 tester) Fluorescensprofiler av normala perifera och ofärgade blodlymfocyter (blått histogram) eller färgade med CD2 PE‐Cyanine7 (lila histogram). Innehåll: CD2 PE‐Cyanine7 Förvaringsförhållanden: Förvaras i 2–8 °C. Katalognummer: 9025‐0029‐120 (120 tester) Får ej frysas. Klon: RPA‐2.10 Ljuskänsligt material. Koncentration: 5 uL (0,125 mikrogram) per Försiktigt! Innehåller azid. prov (ett prov definieras som den mängd Tillverkare: eBioscience, Inc., 10255 Science som färgar 1 x 10e6‐celler i 100 uL) Center Drive, San Diego, CA 92121, USA Värd/isotyp: Mus IgG1, kappa Auktoriserad representant: Bender HLDA Workshop: IV MedSystems GmbH, ett eBioscience‐företag, Sammansättning: Vattenbuffert, 0,09 % Campus Vienna Biocenter 2 A‐1030, Wien, natriumazid, kan innehålla Österrike Produktinformation bärarprotein/stabilisator. Avsedd användning Den fluorokromkonjugerade monoklonala antikroppen RPA‐2.10 reagerar med mänsklig CD2‐antigen. CD2 kan detekteras i mänskliga biologiska prover. Testprinciper Flödescytometri är ett användbart verktyg för samtidig mätning av flera fysiska egenskaper hos individuella partiklar (till exempel celler). Cellerna passerar på ett led genom en laserstråle. Då varje cell passerar genom laserstrålen registrerar cytometern hur cellen eller partikeln sprider infallande laserljus och avger fluorescens. Med hjälp av det här flödescytometriska analysprotokollet är det möjligt att utföra samtidig analys av ytmolekyler på individuell cellnivå. Beskrivning Den monoklonala antikroppen RPA‐2.10 reagerar med mänskligt CD2, en cellytereceptor på 50 kDa som uttrycks av de flesta tymocyter, samtliga mogna T‐celler och en undergrupp av NK‐celler. CD2 är en ligand för CD58 hos människor och ingår i vidhäftning och aktivering av T‐celler. Dokument 30949_02_sv • Gäller från: 2012‐02‐24 Får ej distribueras vidare utan skriftlig tillåtelse. Copyright © 2000‐2010 eBioscience, Inc. www.eBioscience.com FRÅGOR OM BESTÄLLNINGAR • +43 1 796 40 40‐120 TECH • +43 1 796 40 40‐0 [email protected] Provtagning och förvaringsanvisningar Ta venösa blodprover genom venpunktion i ett sterilt blodprovtagningsrör med hjälp av en lämplig antikoagulant (EDTA rekommenderas). Förvara prover i rumstemperatur (18–25 °C). Blanda proverna genom att skaka försiktigt före användning. Nödvändiga hjälpmedel som inte medföljer 12 x 75 mm provrör Buffertar (eBioscience Flow Cytometry Staining Buffer, katalognummer 00‐4222 rekommenderas) Lyseringsbuffert (eBioscience 1X RBC Lysis Buffer, katalognummer 00‐4333 eller eBioscience 1‐step Fix/Lyse Solution (10X), katalognummer 00‐5333 rekommenderas) För intracellulär färgning, använd IC Fixation Buffer and Permeabilization Buffer, katalognummer 88‐8823 (intracellulär cytokin‐ eller cytoplasmatisk proteinfärgning) eller Foxp3 Buffer Set, katalognummer 00‐5523 (för färgning av cellkärneproteiner). Se avsnittet ”Best Protocols” (Bästa protokoll) på eBiosciences webbplats för protokollen ”Staining Intracellular Antigens for Flow Cytometry” (Färgning av intracellulära antigener för flödescytometri). Viabilitetsfärgning (7‐AAD Viability Staining Solution, katalognummer 00‐6993 eller Propidium Iodide Staining Solution, katalognummer 00‐6990 rekommenderas) Automatiserade pipetter Centrifug Vortexblandare Ishink eller kyl Flödescytometer Testprotokoll OBSERVERA: Vid intracellulär färgning, se avsnittet ”Best Protocols” (Bästa protokoll) på eBiosciences webbplats för protokollen ”Staining Intracellular Antigens for Flow Cytometry” (Färgning av intracellulära antigener för flödescytometri). 1. Alikvot 100 µL av provet i rör. 2. Lägg till 5 µL av lämplig antikropp i varje rör. 3. Inkubera 30–60 minuter i 2–8 °C. Proven kan även inkuberas i 15–30 minuter i rumstemperatur och mörker. 4. Tillsätt 2 ml av 1X RBC Lysis Buffer (i rumstemperatur) per rör. Blanda försiktigt. (Proven kan även inkuberas med 2 mL 1‐step Fix/Lyse Solution.) Sida 2 av 2 5.
6.
7.
8.
Inkubera proverna i mörker och i rumstemperatur i 10 minuter. Inkubera inte längre än 15 minuter med RBC Lysis Buffer. Centrifugera proverna vid 300–400 x g i 5 minuter och rumstemperatur, dekantera/aspirera supernatanten och tvätta en gång med 2 ml Flow Cytometry Staining Buffer. Centrifugera proverna vid 300–400 x g i 5 minuter och rumstemperatur, dekantera/aspirera supernatanten. Resuspendera färgad cellpellet i 1 mL Flow Cytometry Staining Buffer och analysera proven med en flödescytometer. Begränsningar 1. Fluorokromkonjugerade antikroppar i ampuller bör förvaras i 2–8 °C i mörker för att fungera optimalt. Får ej frysas. 2. Centrifugera antikroppsflaskan före öppning så att största möjliga volym kan tas ut. 3. All färgning ska utföras på is eller i 2–8 °C, om inget annat anges i protokollet, med minimal exponering för ljus. Prestandaegenskaper Alla batcher med monoklonala antikroppar kontrolleras så att de överensstämmer med egenskaperna för en standardreagens och får därmed en konsekvent hög kvalitet. Representativa flödescytometriska data inkluderas när så är lämpligt. Tecken på nedbrytning Kontakta eBiosciences tekniska support om du har frågor eller funderingar rörande egenskaperna eller kvaliteten för de levererade produkterna (se nedan). Referenser Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture (H3‐A6), 3:e upplagan publicerad av National Committee for Clinical Laboratory Standards. Knapp W, Dorken B, et al, (Red.). Leucocyte Typing IV: White Cell Differentiation Antigens. Oxford University Press. New York. 1989. Juridiskt Dokument 30949_02_sv • Gäller från: 2012‐02‐24 Får ej distribueras vidare utan skriftlig tillåtelse. Copyright © 2000‐2010 eBioscience, Inc. www.eBioscience.com FRÅGOR OM BESTÄLLNINGAR • +43 1 796 40 40‐120 TECH • +43 1 796 40 40‐0 [email protected]
