Sida 1 av 2
CD5 FITC
Katalognummer: 9011-0058-120 (120 tester)
Fluorescensprofiler av normala perifera och ofärgade
blodlymfocyter (blått histogram) eller färgade med
CD5 FITC (lila histogram).
Produktinformation
Innehåll: CD5 FITC
Katalognummer: 9011-0058-120 (120 tester)
Klon: L17F12
Koncentration: 5 uL (0,125 mikrogram) per
prov (ett prov definieras som den mängd
som färgar 1 x 10e6-celler i 100 uL)
Värd/isotyp: Mus IgG2a, kappa
HLDA Workshop: II
Sammansättning: Vattenbuffert, 0,09 %
natriumazid, kan innehålla bärarprotein/
stabilisator.
Avsedd användning
Den fluorokromkonjugerade monoklonala
antikroppen L17F12 reagerar med mänsklig
CD5-antigen. CD5 kan detekteras i mänskliga
biologiska prover med hjälp av immunologiska
tekniker.
Testprinciper
Flödescytometri är ett användbart verktyg för
samtidig mätning av flera fysiska egenskaper hos
individuella partiklar (till exempel celler). Cellerna
passerar på ett led genom en laserstråle. Då varje cell
passerar genom laserstrålen registrerar cytometern
hur cellen eller partikeln sprider infallande laserljus
och avger fluorescens. Med hjälp av det här
Förvaringsförhållanden: Förvaras i 2-8 °C.
Får ej frysas.
Ljuskänsligt material.
Försiktigt! Innehåller azid.
Tillverkare: eBioscience, Inc., 10255 Science
Center Drive, San Diego, CA 92121, USA
Auktoriserad representant: Bender
MedSystems GmbH, ett eBioscience-företag,
Campus Vienna Biocenter 2 A-1030, Wien,
Österrike
flödescytometriska analysprotokollet är det möjligt att
utföra samtidig analys av ytmolekyler på individuell
cellnivå.
Beskrivning
Den monoklonala antikroppen L17F12 reagerar med
mänskligt CD5, ett 67 kDa-protein som uttrycks av de
flesta tymocyter, mogna T-celler och en undergrupp
av B-celler. Signalering genom CD5-molekylen
aktiverar T-celler och bindning av CD5 till dess ligand
på B-celler, CD72, och spelar en viktig roll i
T-B-interaktion och -proliferation.
Provtagning och förvaringsanvisningar
Ta venösa blodprover genom venpunktion i ett sterilt
blodprovtagningsrör med hjälp av en lämplig
Dokument # 31087_02_sv • Gäller från: 2011-03-15
Får ej distribueras vidare utan skriftlig tillåtelse. Copyright © 2000-2010 eBioscience, Inc.
www.eBioscience.com FRÅGOR OM BESTÄLLNINGAR • +43 1 796 40 40-120 TECH • +43 1 796 40 40-0
[email protected]
Sida 2 av 2
antikoagulant (EDTA rekommenderas). Förvara prover
i rumstemperatur (18-25 °C). Blanda proverna genom
att skaka försiktigt före användning.
Nödvändiga hjälpmedel som inte medföljer
• 12 x 75 mm provrör
• Buffertar (eBioscience Flow Cytometry Staining
Buffer, katalognummer 00-4222 rekommenderas)
• Lyseringsbuffert (eBioscience 1X RBC Lysis Buffer,
katalognummer 00-4333 eller eBioscience 1-step
Fix/Lyse Solution (10X), katalognummer 00-5333
rekommenderas)
• För intracellulär färgning, använd IC Fixation
Buffer and Permeabilization Buffer,
katalognummer 88-8823 (intracellulär cytokineller cytoplasmatisk proteinfärgning) eller Foxp3
Buffer Set, katalognummer 00-5523 (för färgning
av cellkärneproteiner). Se avsnittet ”Best
Protocols” (Bästa protokoll) på eBiosciences
webbplats för protokollen ”Staining Intracellular
Antigens for Flow Cytometry” (Färgning av
intracellulära antigener för flödescytometri).
• Viabilitetsfärgning (7-AAD Viability Staining
Solution, katalognummer 00-6993 eller Propidium
Iodide Staining Solution, katalognummer 00-6990
rekommenderas)
• Automatiserade pipetter
• Centrifug
• Vortexblandare
• Ishink eller kyl
• Flödescytometer
Testprotokoll
OBSERVERA: Vid intracellulär färgning, se
avsnittet ”Best Protocols” (Bästa protokoll) på
eBiosciences webbplats för protokollen ”Staining
Intracellular Antigens for Flow Cytometry” (Färgning
av intracellulära antigener för flödescytometri).
1. Alikvot 100 µL av provet i rör.
2. Lägg till 5 µL av lämplig antikropp i varje rör.
3. Inkubera 30-60 minuter i 2-8 °C. Proven kan även
inkuberas i 15-30 minuter i rumstemperatur och
mörker.
4. Tillsätt 2 mL av 1X RBC Lysis Buffer
(i rumstemperatur) per rör. Blanda försiktigt.
(Proven kan även inkuberas med 2 mL 1-step
Fix/Lyse Solution.)
5. Inkubera proverna i mörker och i rumstemperatur
i 10 minuter. Inkubera inte längre än
15 minuter med RBC Lysis Buffer.
6.
7.
8.
Centrifugera proverna vid 300-400 x g i 5 minuter
och rumstemperatur, dekantera/aspirera
supernatanten och tvätta en gång med 2 ml Flow
Cytometry Staining Buffer.
Centrifugera proverna vid 300-400 x g i 5 minuter
och rumstemperatur, dekantera/aspirera
supernatanten.
Resuspendera färgad cellpellet i 1 mL Flow
Cytometry Staining Buffer och analysera proven
med en flödescytometer.
Begränsningar
1. Fluorokromkonjugerade antikroppar i ampuller
bör förvaras i 2-8 °C i mörker för att fungera
optimalt. Får ej frysas.
2. Centrifugera antikroppsflaskan före öppning så
att största möjliga volym kan tas ut.
3. All färgning ska utföras på is eller i 2-8 °C, om
inget annat anges i protokollet, med minimal
exponering för ljus.
Prestandaegenskaper
Alla batcher med monoklonala antikroppar
kontrolleras så att de överensstämmer med
egenskaperna för ett standardreagens och får därmed
en konsekvent hög kvalitet. Representativa
flödescytometriska data inkluderas när så är lämpligt.
Tecken på nedbrytning
Kontakta eBiosciences tekniska support om du har
frågor eller funderingar rörande egenskaperna eller
kvaliteten för de levererade produkterna (se nedan).
Referenser
Procedures for the Collection of Diagnostic Blood
Specimens by Venipuncture (H3-A6), 3:e upplagan
publicerad av National Committee for Clinical
Laboratory Standards.
Knowles RW. Immunochemical analysis of the T-cell
specific antigens. I: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler LM,
Bernstein ID (Red.). Leukocyte Typing II: Human T
Lymphocytes. New York, NY: Springer-Verlag;
1986;1:259-288.
Engleman EG, Warnke R, Fox RI, Dilley J, Benike CJ,
Levy R. Studies of a human T lymphocyte antigen
recognized by a monoclonal antibody. Immunol. 1981
Mar.;78(3):1791-5.
Dokument # 31087_02_sv • Gäller från: 2011-03-15
Får ej distribueras vidare utan skriftlig tillåtelse. Copyright © 2000-2010 eBioscience, Inc.
www.eBioscience.com FRÅGOR OM BESTÄLLNINGAR • +43 1 796 40 40-120 TECH • +43 1 796 40 40-0
[email protected]
