Seminarium CMB vt 2014
Labseminarium: intracellulär transport/apoptos
Under laboration 6 har kursen delats in i två grupper där ena gruppen har elektroporerat COS
celler med en vektor innehållandes sekvens för antingen eGFP-NLS eller eGFP-MEM
(laboration om intracellulär transport) och den andra gruppen har elektroporerat sina celler
med vektor med sekvens för Bad (laboration om apoptos). I det här seminariet ska ni redogöra
för de olika experimentuppsättningarna för varandra så hela kursen blir bekant med bakgrund
(teori), syfte/mål, tillvägagångssätt, resultat och svar på frågor som hör till respektive
laboration.
Till seminariet som äger rum måndag 17/3 ska ni sammanställa resultaten av laborationerna
med vidhängande teori. På varje seminarium kommer 8 labgrupper närvara där hälften av
grupperna har utfört intracellulär transport laborationen och de övriga har utfört apoptos
laborationen. Första timmen av seminariet kommer behandla intracellulär transport och den
andra apoptos. Två av de fyra grupper som utfört intracellulär transport/apoptos laborationen
kommer redovisa bakgrunden till laborationen medan de två andra ansvarar för att samla in,
sammanställa och redovisa data från alla fyra grupper.
Presentationen skall vara totalt ca 35 min lång (teori och resultat) och får gärna vara gjord i
PowerPoint, dator och projektor kommer finnas på plats, eller på OH-bilder. Ni kan kopiera
upp OH-film på Institutionen för Neurovetenskap i A2:2. Efter presentationen finns 10 min
inplanerade för allmänna frågor på laborationerna.
De grupper som ansvarar för redovisning av bakgrund ska ta upp:
Teori om COS-celler
Teori om elektroporation
Teori om vektorerna; framförallt deras sekvensdelars betydelse
Teori bakom intracellulär transport/apoptos
De grupper som ansvarar för datasammanställning ska:
Samla in data från de grupper som ansvarar för bakgrund
Sammanställa all data i form av tabeller (beräkningar) och bilder
Svara på och presentera frågorna i kompendiet tillhörandes lab 6
Ge teoretisk bakgrund till fluorescencemikroskopi
Till er hjälp finns instuderingsfrågor på baksidan av detta blad.
Litteratur: Lodish et al. Kap 1, 9 samt laborationskompendiet för laboration 5-7.
Måndag 17/3
Presentatörer
Bakgrund
Datasammanställning
8.15 - 9.00
Redovisning intracell. transport 3:1, 3:2, 4:1, 4:2
3:1 och 3:2
4:1 och 4:2
9.15 - 10.00
Redovisning apoptos
10:1 och 10:2
9:1 och 9:2
10.15-11.00
Redovisning intracell. transport 1:1, 1:2, 2:1, 2:2
1:1 och 2:1
1:2 och 2:2
11.15-12.00
Redovisning apoptos
8:1 och 8:2
11:1 och 11:2
13.15-14.00
Redovisning intracell. transport 5:1, 5:2, 6:1, 6:2
5:2 och 6:2
5:1 och 6:1
14.15-15.00
Redovisning apoptos
12:1 och 12:2
7:1 och 7:2
9:1, 9:2, 10:1, 10:2
8:1, 8:2, 11:1, 11:2
7:1, 7:2, 12:1, 12:2
Seminarium CMB vt 2014
Instuderingsfrågor:
1. Vad innehåller ett tillväxt(kultur)medium?
2. Vad innebär torrsterilisering, autoklavering och sterilfiltrering?
3. Var har man sina saker placerade i sterilbänken?
4. Vad finns det för olika källor för infektion i cellkulturer?
5. Vad använder man trypsin och EDTA till i cellodlingssammanhang? Hur fungerar de?
6. Primärceller, stamceller och transformerade celler är vanliga att använda i cellkultur.
Vad karakteriserar dessa celltyper?
7. Vilka fördelar har ett faskontrastmikroskop mot ett vanligt ljusfältsmikroskop?
8. Vad är fluorescens? Ge några exempel på fluoreforer.
9. Hur går fluorescensmikroskopi till?
10. Vad är Flourescence-Activated Cell Sorting (FACS)? Vad används det till och
fungerar det?
11. Vad används EdU, BrdU och [3H]-thymidine till?
12. Redogör för några sätt att analysera apoptos?
13. Vad används Hoechst och DAPI till? Hur fungerar de?
14. Varför använde ni COS celler i lab 5-7? Varifrån kommer dessa?
15. Vilka delar av en uttrycksvektor är särskilt viktiga att tänka på vid val av vektor?
16. Vad innebär och hur fungerar elektroporation? Vilka andra metoder finns för att
överföra en vektor till eukaryota celler?
17. Vad innebär transient respektive stabilt uttryck av en vektor?
18. Hur kommer det sig att vissa elektroporerade celler ”lyste” starkt av GFP medan andra
”lyste” svagt i lab 6?
19. Vilka är de olika faserna i mitosen och hur känner man igen dem?
