Susanne Jacobsson
Datum: 2016-03-15
Sidan 1 av 9
Neisseria meningitidis 2015
Årsrapport avseende
serogruppering, genosubtypning och antibiotikakänslighet
hos svenska Neisseria meningitidis isolat samt direkt
PCR diagnostik vid bakteriell meningit
Totalt har 99 N. meningitidis (MC)-isolat från 92 patienter eller bärare sänts in från de kliniska
mikrobiologiska laboratorierna i landet och undersökts i Örebro under 2015. Invasiva isolat har
karakteriserats från totalt 47 patienter. Den samlade bilden av invasiv meningokocksjukdom i
Sverige för år 2015 fås genom sammanslagning av aktuell rapport med de obligatoriska kliniska
anmälningarna som går till Folkhälsomyndigheten. En totalbild publiceras från Folkhälsomyndigheten, Solna i samarbete med vårt referenslaboratorium där även mortalitet och åldersfördelning m.m.
redovisas
(http://www.folkhalsomyndigheten.se/amnesomraden/statistik-ochundersokningar/sjukdomsstatistik/meningokockinfektion-invasiv/).
MC-isolat från likvor/blod, punktat/vävnad, svalg/luftvägar inklusive konjuktiva och urogenitalt
fördelade på serogrupp presenteras i Tabell I. Ett isolat redovisas per patient.
Tabell II visar resultatet av genosubtypningen för de 47 invasiva isolaten, Tabell III resultaten av
MIC bestämningen för de 47 invasiva isolaten.
Tabell IV är en sammanställning av samtliga N. meningitidis isolat som skickats till laboratoriet
för karakterisering från 2001 till 2015.
Genetisk subtypning, s.k. genosubtypning, utförs med sekvensering av porA-genens tre mest
variabla regioner VR1, VR2 och VR3 (1). Även uttrycket av PorA-proteinet påvisas med hjälp av
co-agglutination med en monoklonal antikropp (4BG4-E7) som binder till en relativt konservativ
del av PorA-proteinet. Alla de 47 invasiva MC-isolaten var genosubtypningsbara medan uttryck
av PorA-proteinet påvisades hos 40/47 (85 %). I övrigt rapporteras årligen till European Centre
for Disease Prevention and Control (ECDC); sekvenstyp och klonalt komplex, vilka bestäms med
hjälp av multilocus sequence typing (MLST) samt varianterna hos fetA-genen. Detta utförs sedan
2013 med helgenomsekvensering av meningokock DNA på MiSeq (Illumina) och analyseras med
hjälp av Bacterial Isolate Genome Sequence Database (BIGSdb)
(http://pubmlst.org/software/database/bigsdb/).
POSTADRESS
Laboratoriemedicinska länskliniken, Mikrobiologi
Universitetssjukhuset Örebro
701 85 Örebro
E-POST [email protected]
BESÖKSADRESS
Universitetssjukhuset
Gallerian, ingång F2
Örebro
TELEFON
019-602 20 38
TELEFAX
019-12 74 16
ORG.NR
232100-0164
INTERNET
INTERNET www.regionorebrolan.se/uso/labmed
Sidan 2 av 9
PCR-diagnostik på likvor, blod och punktat har genomförts med påvisning av artspecifikt
bakteriellt DNA, ctrA tillsammans med crgA för meningokocker, samt specifika gener för
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus agalactiae och Listeria
monocytogenes, och bakteriellt DNA generellt, genen för 16S rRNA (2, 3).
MC isolerade från likvor och blod (antal isolat = antal patienter)
De 47 invasiva MC-isolaten som karaktäriserades under 2015 bestod av:
13 serogrupp B MC-isolat (3 sulfaresistenta, d.v.s. MIC >10 mg/L) tillhörande
9 olika genosubtyper.
6 serogrupp C MC-isolat (5 sulfaresistenta) tillhörande 3 olika genosubtyper.
17 serogrupp Y MC-isolat (7 sulfaresistenta) tillhörande 6 olika genosubtyper,
där P1.5-2,10-1,36-2 dominerade (n=12).
10 serogrupp W MC-isolat (9 sulfaresistenta) tillhörande 3 olika genosubtyper,
där P1.5,2,36-2 dominerade (n=8).
1 serogrupp 29E MC-isolat (sulfakänslig) tillhörande P1.5,2,36-2.
Alla genosubtyper uppdelade efter serogrupp presenteras i Tabell II.
MC DNA påvisat från normalt steril lokal
Under 2015 analyserades 126 prover med PCR-teknik avseende bakteriellt DNA (2). MC DNA
påvisades i endast ett av dessa prover. Vidare genetisk karaktärisering, genogruppering samt genosubtypning (C:P1.18-1,3,38) utfördes direkt från detta prov där odlingsprov saknades (1).
De flesta proverna kom från andra laboratorier i landet. I dessa fall är det önskvärt att erhålla
likvor/blodprov i första hand och färdiga DNA-prepationer, minimivolym 50 µL, i andra hand då
reagens inte alltid är kompatibla med varandra och problem kan uppstå vid analysering av dessa
prover. Isolerade MC-isolat bör alltid bifogas om tillgängliga.
Antibiotikakänslighet
Alla MC-isolat testades med Etest (Biomerieux) avseende MIC för bensylpenicillin (PcG),
cefotaxim, kloramfenikol, ciprofloxacin, rifampicin och meropenem på Mueller-Hinton (BD) med
blod (MH-F), se tabell III. Behandlas patienten med annat antibiotikum görs alltid test även mot
detta. Dessutom testas sulfakänslighet (sulfametoxazol) med Etest (Biomerieux), vilket är en
epidemiologisk markör som kompletterar den övriga karakteriseringen, se ovan.
Av de invasiva isolaten uppvisade endast 4/47 (8,5 %) nedsatt känslighet för PcG (MIC >0,064
mg/L). Vilket är den lägsta andelen uppmätt från år 2001 och framåt, se Figur 1. Samtliga
invasiva isolat var känsliga för cefotaxim, kloramfenikol, ciprofloxacin, rifampicin och
meropenem (Tabell III).
Inget β-laktamas producerande MC-isolat har ännu identifierats i Sverige.
Sidan 3 av 9
40
35
30
25
20
15
10
5
0
2001
2003
2005
2007
2009
2011
2013
2015
Figur 1. Proportionen (%) MC med nedsatt känslighet för PcG från 2001 tom 2015 (MIC >0,064
mg/L).
Sammanfattningsvis
Under 2015 analyserades 47 invasiva MC-isolat i Sverige, Y:P1.5-2,10-1,36-2 dominerade med
12 isolat följt av W:P1.5,2,36-2 (n=8).
Dessutom diagnostiserades meningokocksjukdom i ytterligare ett fall (C:P1.18-1,3,38) via fynd av
meningokockspecifikt DNA med PCR teknik.
Den ökning vi såg från år 2010 av det totala antalet MC-isolat i Sverige avstannade 2013, därefter
minskade förekomsten igen 2014 till en nivå som håller i sig även 2015. Det totala antalet
MC-isolat ligger på en relativt låg nivå igen, se Tabell IV.
Gällande de olika serogrupperna så har antalet MC serogrupp B (n=13) ökat till tidigare års nivå
efter förra årets nedgång (n=6). MC serogrupp B har de sista åren legat på en låg nivå, i medeltal
13 likvor/blod isolat av MC serogrupp B per år, range 6-19, från år 2010 och framåt, jämfört med
22 fall/år, range 14-33, under 2000-talet och 40 fall/år, range 25-66, under 1990-talet.
MC serogrupp C identifierades från 6 patienter, vilket är lågt. MC serogrupp C isolat från
likvor/blod har de sista åren i medeltal legat på 15 isolat per år, range 6-22, från år 2010 och
framåt, jämfört med 13 fall/år, range 10-16, under 2000-talet och 19 fall/år, range 3-35, under
1990-talet.
MC serogrupp Y (n=17) ligger på en liknande om än lite lägre nivå än 2014 (n=20). McY är
fortfande den dominerande serogruppen och motsvarade 36 % av de invasiva isolaten i Sverige
under 2015 (2014, 44 %; 2013, 51 %; 2012, 49 %; respektive 2011, 51 %). Det är fortfarande den
tidigare identifierade stammen Y:P1.5-2,10-1,36-2:F4-1:ST23(cc23), som klart dominerar bland
de invasiva isolaten i Sverige (9). Av MC serogrupp Y-isolaten 2015 hade 71 % (12/17) genosubtyp P1.5-2,10-1,36-2 jämfört med 75% 2014, 68 % 2013, 52 % 2012, och 87 % 2011.
Den utveckling som vi sett hos det totala antalet MC-isolat i Sverige sammanfaller väldigt väl
med det mönster vi ser hos MC serogrupp Y under samma tidsperiod vilket visar att ökningen till
största delen var orsakad av serogruppY-isolat (P1.5-2,10-1,36-2).
Antalet MC serogrupp W (n=10) är det som är mest slående 2015. Från att endast orsaka invasiv
sjukdom i ett fåtal fall per år, range 0-5 sedan 1990 och framåt, till att nu plötsligt orsaka dubbelt
så många fall. Dessa MC serogrupp W domineras av en genosubtyp, P1.5,2,36-2 som motsvarar
80 % (8/10) av fallen. Detta är även samma genosubtyp som var orsaken till “Scout-utbrottet” i
Sidan 4 av 9
Japan. I augusti 2015 hade nästan 2000 svenska scouter deltagit vid ett internationellt scoutläger i
Japan, den 23:e Världsscoutsjamboreen som samlade cirka 30 000 deltagare från hela världen.
Direkt efter hemkomsten insjuknade tre scouter från Skottland och en anhörig med invasiv
meningokockinfektion. En svensk scout insjuknade också i samma sjukdom efter en vecka i
Sverige. I samtliga fall kunde man isolera meningokocker serogrupp W, genosubtyp P1.5,2,36-2.
En spridning av meningkocker i scoutgruppen misstänktes. De svenska scouterna erbjöds
ciprofloxacinprofylax och flera av dem provtogs med svalg/nasopharynxodling. Trettio befanns
vara bärare varav tio med samma serogrupp och genosubtyp som indexfallen. De 20 övriga bar på
andra serogrupper eller icke grupperbara meningokocker. Vi noterade således ett lågt bärarskap av
meningokocker i denna grupp men en ytterligare scout med en lindrigare sjukdomsbild kunde
sedermera serologiskt verifieras att ha genomgått en invasiv meningokockinfektion.
Trenden med en ökning av MC serogrupp W har även uppmärksammats i flera länder i Europa
såsom Storbrittanien, Frankrike och Finland och trenden kvarstår i Sverige även in på 2016, vilket
är något vi kommer att bevaka fortsättningsvis.
Inga invasiva meningokockfall inom Sverige har haft någon epidemiologisk koppling till varandra
under året.
Slutligen är det viktigt att fortsätta följa antibiotikakänsligheten men ännu krävs ingen ändring av
antibiotikapolicy utifrån laboratoriets horisont.
Liksom tidigare ges ett första svar (s.k. prelsvar) på misstänkta MC-isolat, oftast inom
2 arbetsdagar, med serogrupp och antibiogram. Den genetiska karaktäriseringen tar rutinmässigt
ca 1 månad om inte epidemiologi eller andra faktorer gör att den bör påskyndas.
Sidan 5 av 9
Publikationer
1.
Mölling P, Jacobsson S, Bäckman A, Olcén P.
Direct and rapid identification and genogrouping of meningococci and porA amplication by LightCycler PCR.
J Clin Microbiol 40:4531-4535, 2002.
2.
Thulin Hedberg S, Olcén P, Fredlund H, Mölling P.
Real-time PCR detection of five prevalent bacteria causing acute meningitis.
APMIS 117:856-860, 2009.
3.
Cavrini F, Liguori G, Andreoli A, Sambri V.
Multiple nucleotide substitutions in the Neisseria meningitidis serogroup C ctrA gene cause false-negative detection
by real-time PCR.
J Clin Microbiol 48:3016-3018, 2010.
4.
Susanne Jacobsson.
Doctoral dissertation. Characterization of Neisseria meningitidis from a virulence and immunogenic perspective that
includes variations in novel vaccine antigens.
Örebro Studies in Medicine 31, Örebro 2009.
5.
Sara Thulin Hedberg.
Doctoral dissertation. Antibiotic susceptibility and resistance in Neisseria meningitidis – phenotypic and genotypic
characteristics.
Örebro Studies in Medicine 38, Örebro 2009.
6.
Thulin Hedberg S, Olcén P, Fredlund H, Unemo M.
Antibiotic susceptibility of invasive Neisseria meningitidis isolates from 1995 to 2008 in Sweden – the meningococcal
population remains susceptible.
Scand J Infect Dis 42:61-64, 2010.
7.
Törös B, Hedberg ST, Jacobsson S, Fredlund H, Olcén P, Mölling P.
Evaluation of molecular typing methods for identification of outbreak-associated Neisseria meningitidis isolates.
APMIS 121:503-510, 2013.
8.
Bianca Törös.
Doctoral dissertation. Genome-based characterization of Neisseria meningitidis with focus on the emergent serogroup
Y disease.
Örebro Studies in Medicine 109, Örebro 2014.
9.
Törös B, Hedberg ST, Unemo M, Jacobsson S, Hill DM, Olcén P, Fredlund H, Bratcher HB, Jolley KA, Maiden MC,
Mölling P.
Genome-Based Characterization of Emergent Invasive Neisseria meningitidis Serogroup Y Isolates in Sweden from
1995 to 2012.
J Clin Microbiol 53:2154-62, 2015
10. Bröker M, Emonet S, Fazio C, Jacobsson S, Koliou M, Kuusi M, Pace D, Paragi M, Pysik A, Simões MJ, Skoczynska
A, Stefanelli P, Toropainen M, Taha MK, Tzanakaki G.
Meningococcal serogroup Y disease in Europe: Continuation of high importance in some European regions in 2013.
Hum Vaccin Immunother 11:2281-6, 2015.
Sidan 6 av 9
Tabell I. Serogruppmönster hos samtliga N. meningitidis isolat (n=92) insända under 2015.
Ett isolat per patient redovisas.
Serogrupp
likvor/blod
punktat/
vävnad
svalg/luftvägar
inkl. ögon
urogenitalt
Totalt
B
13
-
7
c
-
20
C
6
-
2
-
8
Y
15
2
d
2
27
W
9
-
21
X
a
8
1
b
11
-
-
1
29E
1
-
-
ej grupperbar
(ng)
-
-
14
Totalt
44
3
43
e
1
f
a) 1 acsites, 1 knä b) mjältvävnad c) 3 sputum d) 2 sputum e) 1 sputum f) 1 konjunktiva
1
14
2
92
Sidan 7 av 9
Tabell II. Genosubtypmönster för de tre variabla regionerna VR1, VR2 och VR3 av porA
genen hos samtliga invasiva N. meningitidis isolat (n=47) uppdelat i serogrupp.
Genosubtyp
MCY
P1.5,2,36-2
1
P1.5-2,10-1,36-2
12
MCB
MCW
MCC
MC29E
Totalt
8
3
1
13
12
3
P1.7,16-29,35
1
2
P1.7-2,4,37
3
3
P1.22,14,36
3
3
P1.5-1,10-4,36-2
1
1
P1.5-2,10-28,36-2
1
1
P1.5-2,10-62,36-2
1
1
P1.5-3,10-1,36-2
1
1
P1.7,16,35
1
1
P1.7-2,4-10,37
1
1
P1.7-36,14,35-1
1
1
P1.12-1,16,37-1
1
1
P1.17,9,35-1
1
1
P1.18-1,3,38
1
1
P1.19-1,15-11,36
1
1
P1.19-15-15,36
1
1
P1.21,16,37-1
1
1
Totalt
17
13
10
6
1
47
Sidan 8 av 9
Tabell III. MIC range för samtliga invasiva N. meningitidis isolat (n=47) för samtliga testade
antibiotikum, samt brytpunkter för meningokocker inom SIR-sytemet.
a)
Antibiotika
MIC range (mg/L)
S/R>
Penicillin G
0,016 – 0,25
0,06/0,25
Cefotaxim
<0,002 – 0,016
0,12/0,12
Kloramfenikol
0,25 – 1
2/4
Ciprofloxacin
0,002 – 0,006
0,03/0,03
Rifampicin
0,002 – 0,032
0,25/0,25
Meropenem
0,002 – 0,016
0,25/0,25
a) S – känslig, R – resistent. Brytpunkter för MC fastlagda av EUCAST/NordicAST
Susanne Jacobsson
Datum: 2016-03-15
Sidan 9 av 9
Tabell IV. Samtliga N. meningitidis isolat som skickats till laboratoriet för karakterisering från 2001 till 2015.
2001
2002
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2012
2013
2014
2015
Totalt antal MC-isolat
(ett per patient)
116
83
74
73
70
75
81
76
79
94
99
130
89
76
92
MC från CSF/blod
58
36
41
47
48
44
43
38
45
56
61
85
66
45
44
MC från luftvägar
55
43
27
24
19
28
34
35
24
35
33
35
22
26
43
MC från genitaltrakt
2
3
4
-
1
3
3
2
9
2
5
5
-
5
2
Andra invasiva MC
1
1
2
2
2
-
1
1
1
1
-
5
1
-
3
A
-
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
-
-
-
-
B
33
20
27
24
25
21
16
14
16
11
14
19
17
6
13
C
14
10
11
11
15
15
15
16
10
19
15
22
13
16
6
Y
8
4
2
6
4
5
9
7
16
22
31
39
33
20
15
W
2
1
1
5
1
2
2
1
2
2
1
5
3
2
9
annan
1
-
-
-
1
-
-
-
-
1
-
-
-
1
1
ng
-
1
-
1
2
1
1
-
1
-
-
-
-
-
-
MC från CSF/blod
serogrupp
Örebro 2016-03-15
Susanne Jacobsson, Hans Fredlund, Paula Mölling, Sara Thulin Hedberg, Bianca Törös, Martin Sundqvist, Magnus Unemo
