Urvalsprovet 19.05.2015
Personbeteckning _________________-______
Helsingfors universitets
Efternamn ________________________________________
utbildningsprogram för
Förnamn _________________________________________
molekylära biovetenskaper
Uppgift 3 Poäng ________/ 30
Uppgift 3. Kloning ( 30 p)
Hos petunior förekommer inte orangefärgade sorter. Man känner även till orsaken: Petunians eget DFRenzym skiljer sig från övriga växters enzym och kan inte katalysera biosyntesen för orangefärgat antocyan
(pelargonin). Din uppgift är att med hjälp av genöverföring tillverka en petunia med orangefärgade
blommor genom att använda genen för gerberans DFR-enzym. Du har två plasmider till ditt förfogande,
med vilka du skall utföra uppgiften:
3A (6 p)
I mitten av plasmidkartan har plasmidens storlek angivits som baspar. Utanför cirkeln har
restriktionsenzymens namn och nummer angivits. Innanför cirkeln finns genetiska element, som är viktiga
för utförandet av uppgiften. Fundera över vilka dessa kunde vara. Förklara enligt bästa förmåga delarna
som angivits på kartan. Man behöver inte känna till förkortningarnas exakta betydelse.
1)
2)
3)
4)
5)
6)
HindIII, PstI, EcoRV etc. och de nummer som hör till dessa
P-35S
T-nos
Gdfr
ampR, kanR
ori
Uppgift 3. Sida 2.
Namn______________________________
Uppgift 3A fortsätter
Modellsvar (à 1 poäng)
1) HindIII, PstI mm.: Restriktionsenzymens klyvningsställen (med dess koordinater)
2) P-35S: en promotor, behövs för att påbörja transkriptionen hos växten
3) T-nos: en terminator, behövs för att stoppa gentranskriptionen / polyadenylation av
transkriptet hos växten
4) Gdfr: Gerberans DFR-gen
5) ampR, kanR: gener för antibiotikaresistens verksamma hos kolibakterien /
selektionsmarkörer
6) ori: plasmidens startpunkt för replikation
3B. Efter att du isolerat plasmiderna har provrörens markeringar försvunnit. Hur utreder du vilket som
innehåller pRT101 och vilket pHTT371? (6 p)
Modellsvar:
Digestion med restriktionsenzym (2 p) och körning på agarosgel (2 p). Digestionen bör
skilja plasmiderna från varandra och fragmentens storlek bör beräknas (ungefär) rätt (2 p).
eller
Transformation av kolibakterien på två olika selektionsskålar (förklaring)
eller
med hjälp av PCR-specifika primrar.
Uppgift 3. Sida 3.
Namn______________________________
3C. Hur tillverkar du av dessa två plasmider en tredje plasmid för genöverföring? (12 p)
Modellsvar (à 2 poäng)
1) Klyv pRT101 med BamHI-enzymet
2) Klyv pHTT371 med BamHI-enzymet (möjligen: isolera 1286 bp fragmentet)
3) Bind samman delarna i ett provrör med hjälp av ligasenzym (ligasenzym 1 p)
4) Överför plasmiden i en kolibakterie, selektera för kanR-genen (enbart
antibiotikaselektion 1 p)
5) isolera plasmiden
6) Klyv med restriktionsenzym och analysera på agarosgel (kom ihåg insertets
orientering)
3D. Du vill överföra den rekombinantgen som du tillverkat i en vitblommig petunia för att få fram en ny
orangeblommig sort.
1) Beskriv i stora drag hur genöverföringen sker
2) Plasmiden som du tillverkat är inte helt klar att överföras till en växt. Vad saknar den? (6 p)
Modellsvar (à 1 poäng)
1) a) DNA skall föras in i växtcellen (Agro)bacterium-medierad transformation,
partikelbombning eller elektroporering
b) Växtcellen skall fås att dela sig och differentieras till en hel växt
c) De celler som erhållit den främmande genen skall selekteras (med resistensmarkör
eller annan metod)
d) verifiering (PCR, DNA gel blot eller Southern blot, ny färg på blommorna,
el.dyl.)
2) a) markören för selektion (eller annan lämplig egenskap) saknas
b) om agrobakterier används, T-DNA saknar randområden
