Chagas’ sjukdom:
Aktuell serologisk diagnostik
Användarmöte för Transfusionsmedicin
Equalis, oktober 23 2013
Silvia Botero-Kleiven
Leg. Läkare, Med. Dr.
Parasitologisk Diagnostik (DV-D)
PAHO: kontroll av smitta via skinnbaggar (2011)
WHO 2010:
~ 10 miljoner
smittade människor
Smittöverföring via vektorn fortfarande finns
Smittöverföring via vektorn avbruten
Ingen vektorburen smitta
Inget program finns
Huvudvektorn har eliminerats
Barona-Vilar C, et al. Prevalence of Trypanosoma cruzi infection in pregnant Latin American women and
congenital transmission rate in a non-endemic area: the experience of the Valencian Health Programme
(Spain). Epidemiol Infect. 2011 Dec 1:1-8.
Antikroppssvar och parasitemi i den akuta fasen
Coura et al., Acta Tropica, 115, 2010
Parasitologisk diagnostik av Chagas sjukdom (akutfas,
reaktivering)
Mikroskopisk påvisning
-Direkt mikroskopi, tjockdroppe plus tunt utstryk
-Mikrohematokrit (undersökning av buffy coat efter centrifugering)
-Centrifugering av serum efter koagulering (Strout)
Tidsutveckling av Chagas sjukdom
4v
Fas
8v
Akut
10 - 30 år
Kronisk (obestämd)
Symptom
1 - 5%
~0%
Parasitemi
+++ ++
+/-
Antikroppar
IgM/IgG
IgG
Dödlighet
≤1%
0%?
?
Kronisk Sx
30%
(5 -10% GI
85 - 90% ♥)
+/IgG
10 - 60% ♥
Diagnostik med PCR
•Vid fall av kongenital infektionsmisstanke i nyfött barn
•För monitorering av reaktivering (organtransplanterade,
HIV)
•För detektion i biopsimaterial
•För uppföljning av behandlingseffekt (kanske)
•Vid misstanke om laboratorieinfektion
PCR-metoderna fortfarande ej standardiserade (in house)
Serologisk diagnostik (obestämd och kronisk fas)
•Baseras på detektion av specifika IgG antikroppar
(≥ 2 - 4 veckor)
•Påvisbar IgG korrelerar med kronisk infektion (Ag+)
•Minst 2 olika testformat rekommenderas för diagnostik
•Känsligare än PCR i den kroniska fasen
•Användbarhet för uppföljning efter behandling:
- akut/tidig kronisk (= i unga patienter, bra)
- kronisk: inte bra
Serologiska metoder som används för Chagas
diagnostik:
Indirekthemaglutination (äldre) (lysat)
ELISA-baserade, olika generationer:
Parasitlysat --- > Rekombinant/peptidantigen
Chemoluminescense-linked immuno-assay (CLIA) (rekombinant
antigen/peptid)
Immunkromatografisk test (ICT) (rekombinant antigen/peptid)
Westernblot, Immunoblot, (WB, IB) (lysat eller rekombinant antigen)
Immunfluorescens (IF) (fixerade parasiter)
Radioimmunoprecipitation (RIPA) (radioaktivt inmärktparasitlysat)
Jämförelse
av
serologiska
metoder
WHO, 2009
Otani MM et al.
Transfusion
Complications
49, 2009
Chagatest ELISA recombinante v.4.0 (Wiener Lab
group): Recombinant antigens
Ag1 Ag2 Ag30
Ag13 Ag36
Ag2 Ag13
SAPA
Ag13 Ag 36
SAPA
Chronic
Congenital
Acute
• Olika antigen kombinationer ger sensitiviteter och specificiteter 96,6 - 100 %
• Måste täcka de olika kända genetiska linjer av T. cruzi (I till VI)
www.who.int/bloodproducts/ref.../Capriottis.ppt
Motivering för serologisk testning för Chagas vid
SMI? (patienter, potentiella blodgivare, barn…)
• Uppvisar T. cruzi-relaterade symptom
• Är född/uppväxt i Latinamerika (stad vs landsbyg)
eller har bott (> 5 år) i endemiskt område
• Rest i endemiskt område
• Har en Latinamerikansk mor med kronisk infektion
• Har andra anhöriga med T. cruzi infektion
• Har fått en blodtransfusion i Latinamerika
• Turister med akuta symptom
Förekomst av T. cruzi-infektion
i icke-endemiska länder:
•Importerat fall (akut/kronisk) eller reaktivering i
immunsupprimerad patient
•Kongenital infektion
•Efter blodtransfusion eller transplantation
•Laboratorieinfektion
•Via infekterad mat (sockerrörjuice, fruktjuice)(Europa?)
Chagatest ELISA recombinante v.4.0 (Wiener Lab
group)
Crossreactivity with other pathologies
Leishmaniasis
Amebiasis
Toxocariasis
Toxoplasmosis
Teniasis
Hydatidosis
Hepatitis B
Hepatitis C
Syphilis
HIV
1/10
0/7
0/6
0/5
0/5
0/2
Other pathologies
Lymphoma
Myeloma
Lung tuberculosis
Autoimmune
disorders
0/22
0/28
0/19
0/25
www.who.int/bloodproducts/ref.../Capriottis.ppt
0/1
0/1
0/4
1/4
Föreslagen sekvens för serologisk testning:
•Positiv med 2/2 tester T. cruzi infektion
•Negativ med 2/2 tester Ingen T. cruzi infektion
•Positiv med 1/2 tester avvikande resultat (”inconclusive”)
Testa ett nytt prov
efter 3-4 mån med samma
metod(er)
Testa samma prov
med tredje metod
(annan Elisa, immunoblot)
PCR ? (dock begränsad
sensitivitet)
Lapa et al., European Journal of Clinical Microbiology & Infectious
Diseases© Springer-Verlag 201110.1007/s10096-011-1393-9
Diagnostik hos nyfött barn från mamma med Chagas:
• Vid födseln: navelsträngsblod eller perifert blod:
- Mikroskopi, direkt och efter koncentration (TD, mikrohematokrit)
- PCR
- Serologi (för jämförelse ?)
• PCR upprepas efter 1-3 månader
Vid symptomatisk infektion: ny mikroskopisk undersökning av blod
(ev. CSV) + PCR
• Kontroll serologi: test för specifik IgG efter 7-9 månader
Sosa-Estani S, Colantonio L, Segura EL. Therapy of chagas disease:
implications for levels of prevention. J Trop Med. 2012;2012:292138.
Antibody levels correlate with detection of Trypanosoma cruzi DNA by sensitive
polymerase chain reaction assays in seropositive blood donors and possible resolution
of infection over time
Transfusion
Volume 53, Issue 6, pages 1257-1265, 25 SEP 2012 DOI: 10.1111/j.1537-2995.2012.03902.x
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1537-2995.2012.03902.x/full#f2
