En ny metod för att påvisa ett vanligt förekommande virus Mimmi Kjellin BK-virus är mycket vanliga i hela världen. Man uppskattar att ungefär 70 till 80 % av den vuxna befolkningen har blivit infekterade, vanligtvis i barnaåldern. Infektionen brukar dock inte ge några märkbara sjukdomssymptom varför den inte har uppmärksammats så mycket sedan upptäckten av BK-virus på sjuttiotalet. Försök har dock visat att om man injicerar detta virus i nyfödda gnagare utvecklar dessa hjärntumörer. På senare tid har man börjat misstänka att BK-virus också har en anknytning till tumörbildning hos människor. Neuroblastom är en ovanlig tumör i nervvävnaden hos barn där man starkt misstänker att BK virus spelar en viss roll. För att kunna utröna detta eventuella samband bättre måste man göra en epidemiologisk undersökning. Epidemiologiska undersökningar av sådana slag brukar innefatta ett tämligen stort antal prover som skall analyseras. Detta är den främsta anledningen till att en ny, effektiv och billig metod att påvisa BK virus har tagits fram. Olika typer av blodprov är troligtvis de vanligaste bland biologiska prover och lämpar sig därför bra i epidemiologiska studier av ovan nämnda slag. När man vill påvisa virus i blod- och andra biologiska prover är det i själva verket bara virusets arvsmassa man försöker hitta, virusets DNA. Om virus-DNA finns, finns där alltså virus eftersom de inte kan finnas utan sin arvsmassa. För att hitta DNA i prover använder man sig av en teknik som kallas PCR. PCR går förenklat till så att det kopierar det redan befintliga DNA:t i ett prov till ett större mängd så att det blir lättare att påvisa. Den nya metoden som nu har tagits fram grundar sig på den traditionella PCR-tekniken, men påvisar inte bara eventuell virusförekomst, utan räknar också samtidigt antalet viruspartiklar i en viss mängd blod. Detta kan nämligen vara en viktig parameter i sjukdomsbilden. Man kan t.ex. tänka sig att ju fler viruspartiklar desto högre risk för att man utvecklar sjukdom. Med den nya metoden, kallat ”kvantitativ PCR”, kan man enkelt och relativt billigt och snabbt analysera ett stort antal prover. Den traditionella PCR-tekniken tar mer än en dag att utföra jämfört med ca 3-4 timmar med den nya metoden. När man skall analysera DNA i blod däremot finns ofta mycket så kallade inhibitorer. Dessa är olika proteiner som naturligt finns i blod och som försvårar isoleringen av DNA i ett prov och därmed analysen av provet. Detta har varit den svåraste biten i metodutvecklingen. Det finns en uppsjö olika procedurer man kan tillgå för att isolera DNA ur biologiska prover. Med tanke på att det är ett stort antal prover man vill undersöka, måste man ta hänsyn till enkelheten i isoleringsproceduren. Fem olika protokoll har prövats, men inget har varit till fullt tillfredställande. En ny DNAisoleringsprocedur som för närvarande är under evaluering verkar dock lovande. När denna kvantitativa PCR fungerar optimalt kommer den vara ett oslagbart verktyg både för att påvisa och räkna BK-viruspartiklar i biologiska prover - både inom forskning och diagnostik. Examensarbete i biologi, 20 p, VT 2000 Mikrobiologiskt och Tumörbiologiskt Centrum, Karolinska Institutet Handledare: Dr. Joakim Dillner, Docent i Virologi