ATP-mätningsmetoder
för kontroll av hygien
Dr. Arne Lundin
www.biothema.com
Tre ATP metoder
1. ATP+AMP mäter allmän biologisk förorening
(levande och döda celler av alla typer)
2. Total ATP mäter huvudsakligen levande celler
av alla typer
3. Bakteriell ATP mäter endast levande
bakterieceller (ny metod)
Bakteriell ATP
• Bakteriell ATP är proportionell mot antal
bakterier från 10 till 100.000 celler
• Kan mätas på ytor och i vätskor
• Varje test kalibreras med en känd ATP
standard så att mängden kan omräknas till
antal bakterieceller
• Inga pipetteringar
Reagens för mätning av bakteriell ATP
1. ATP Eliminating Reagent lyserar mänskliga
celler och bryter ned frigjord ATP. Påverkar
inte bakteriecellernas ATP.
2. Extractant B/S löser ut ATP ur cellerna i
vätskan eller på ytan (tränger in i ytan).
3. ATP Reagent HS sänder ut ljus proportionellt
mot ATP i provet.
4. ATP Standard för kalibrering av mätningen.
Steg 1:
Tillsätt en
droppe ATP
Eliminating
Reagent på
ytan, svabba
5x5 cm och
vänta 10 min
Steg 2:
Tillsätt en
droppe
Extractant
B/S och
svabba
ytan igen
Steg 3:
Rotera
svabben i
rör 1. Mät
signalen.
Step 4:
Rotera
svabben i
rör 2
Rör 1:
ATP Reagent HS
Swab
Rör 2:
ATP Standard
Swab
Rör 1:
ATP Reagent HS
B/S B/S
Extractant
Extractant
ATP Eliminating
Reagent
Mätning av bakteriell ATP på ytor
Steg 5:
Rotera
svabben i
rör 1. Mät
signalen.
Steg 1:
Låt svabben
suga upp
prov, placera
i rör 1 och
vänta 10
min.
Steg 2:
Rotera
svabben i
rör 2
Steg 3:
Rotera
svabben i rör
3. Mät
ljussignalen.
Step 4:
Rotera
svabben i
rör 4
Rör 3:
ATP Reagent HS
Rör 4:
ATP Standard
Rör 3:
ATP Reagent HS
Rör 2: Extractant B/S
Rör 1: ATP Eliminating
Reagent
Mätning av bakteriell ATP i vätskor
Steg 5:
Rotera
svabben i rör
3. Mät
ljussignalen.
Fördelar med nytt kit vid ytprovtagning
• Platta svabbar ger god anliggning mot yta och
överför vätska med tillräcklig precision.
• ATP frigörs ur cellerna direkt på ytan och sugs upp av
svabben medan vid konventionell svabbning
merparten av cellerna stannar kvar på ytan.
• Testresultatet kan uttryckas i antal bakterieceller
medan andra ATP-metoder uttrycks i relativa
ljusenheter som varierar med instrument, reagens
och analysbetingelser.
Jämförelse olika hygientest
Test
Egenskaper
• Odling
• Svar först efter flera dagar. Dålig
provtagningsmetod.
• Detektionsgräns (3 µg) motsvarar 107-108
bakterieceller. Dålig provtagningsmetod.
• Enkel och snabb test på biologisk förorening.
Dålig provtagningsmetod
• Snabbtest på huvudsakligen levande celler
oavsett typ.
• Snabbtest på levande bakterier från 10 till
100.000 celler.
• Proteinsticka
• ATP+AMP
• Total ATP
• Bakteriell ATP
Mätning av sköljvatten
1. Första sköljningen med kallvatten ger ett mått
på föroreningsgraden före disk
2. Eftersköljningen ger ett mått på vilken renhet
som uppnåtts
3. Kvoten mellan 1 och 2 är diskprocessens
effektivitet
4. Rent vatten krävs för tillförlitliga mätningar
5. Metoden valideras genom stickprover på diskat
material och sköljvatten
Sammanfattning
• Odling bra vid problem men för långsam för daglig
övervakning.
• Protein är inte tillräckligt känsligt. För detektion krävs
10-100 miljoner bakterieceller.
• ATP+AMP indikerar kvarvarande blod- och vävnadsrester.
Döda och levande celler. Daglig övervakning möjlig.
• ATP total mäter alla levande celler men även fri ATP från
död vävnad. Daglig övervakning möjlig.
• Bakteriell ATP ger ett mått på levande bakterieceller och
fungerar för daglig övervakning.
• Bakteriell ATP och ATP total kalibreras med certifierad
ATP standard. Tillförlitliga analyser.
