UMEÅ UNIVERSITET
Institutionen för molekylärbiologi
Laborationshandledning
Diures
Biomedicinsk vetenskap II för receptarier, Vt-11
Laborationsassistenter:
Sofie Ekestubbe
Maria Liljeqvist
Christopher Andersson
Introduktion
-Njurarnas viktigaste uppgift är att producera urin. Urinproduktionen regleras fysiologiskt
främst av hormonet ADH (antidiuretiskt hormon). ADH, även kallat vasopressin,
syntetiseras i hypothalamus och transporteras därefter i granuler via axonerna till
nervterminaler i hypofysen. Insöndring av ADH regleras via osmo- och baroreceptorer.
-Om insöndringen av hormonet från hypofysen ökar resulterar detta i ökat vattenåtertag i
nefronen och urinproduktionen minskar.
-En minskad ADH-sekretion medför däremot ett minskat vattenåtertagande i nefronen och
urinproduktionen ökar.
-Olika substanser som intas av organismen påverkar ADH-sekretionen på skilda vis.
Exempelvis ökar nikotin, ADH-insöndringen. Även stress, smärta och känslosvallningar kan
ha denna effekt. Alkohol eller en stor volym vatten har dock motsatt effekt, dvs hämning av
ADH-sekretionen. Därutöver kan urinens volym och sammansättning påverkas av faktorer
oberoende av ADH.
-Ett annat viktigt hormon som reglerar urinproduktion är Aldosteron, som syntetiseras i
binjurebarken. Blodförlust eller sänkt blodtryck aktiverar syntesen av Aldosteron via reninangiotensinsystemet. Tips: Läs mer i kapitel 23-24 i er kursbok, Saladin: Anatomy and
Physiology.
Endocrinology an Integrated Approach.
Nussey and Whitehead
Material
10 ml-provrör med kork (ca 20 st/fp)
Bägare 1000 ml (1 st/fp)
Mätglas 500-1000 ml (1 st/fp)
Peleusbollar (1st/fp)
Engångspipetter i plast 10 ml (1 st/fp)
Flamfotometer
H20 (drygt 1 l/fp)
Saltlösning fys. 0,9% (drygt 1 l/fp)
Kaffe (drygt 1 l /fp)
Öl (drygt 1 l/fp)
Te (svart) (drygt 1 l/fp)
Syfte
I den här laborationen skall ni undersöka hur olika drycker påverkar urinmängden och
joninnehållet. Ni ska tolka data från alla försökspersoner och genom dessa beskriva
verkningsmekanismen för de olika dryckerna.
Utförande
Försöket genomförs vid en tidpunkt då njurfunktionen är nära basalnivå, i detta fall på
morgonen efter en lätt frukost utan vätskedrivande drycker. Utse en person i gruppen som
försöksperson.
För att beräkna mängden vätska som ska intas utgår ni från att en man som väger 75 kg och är
1,85 m lång dricker 1 liter vätska. Volymen vätska som ska intas korreleras till blodvolymen
och enligt nedanstående formel är blodvolymen för denna man 5,2 l.
Beräkna försökspersonens blodvolym mha nedanstående formel och därefter hur mkt vätska
som skall intas. I några fall skall annan volym intas , vilket anges i tabellen på nästa sida.
Man: V (l)= 0,3669 x L3 (m) + 0,03219 x vikt (kg) + 0,6041
Kvinna: V (l)= 0,3561 x L3 (m) + 0,03308 x vikt (kg) + 0,1833
Exempel:
Anna är 1.65 m och väger 50 kg
Kvinna: V (l)= 0,3561 x 1.653 (m) + 0,03308 x 50 (kg) + 0,1833
V(l)= 3.44 3.44/5.2=0.66 l
Följ intruktionerna i tabellen på nästa sida. Vid dagens slut skall ni alltså ha 9 prover som ni
mäter volymen och joninnehåll på. Ni behöver bara spara 10 ml prov till Na+ mätning men se
till att komma ihåg att mäta och anteckna volymen för varje provtillfälle.
Lycka till!
Anmärkn.
FP 1
FP 2
FP 3
FP 4
FP 5
FP 6
***
***
***
***
***
***
Inget intag av proteinrik kost efter kl. 20. Minst 3 glas H20 skall intas före sänggåendet
Kväll f.
försök
Morgonen Frukosten ska vara lätt, proteinfattig och ej inneh. kaffe/te. Intas minst 1,5 h före
försöket. Töm blåsan 30 min. innan vi träffas på morgonen.
FörsöksBlåstömn
Blåstömn. Blåstömn.
Blåstömn. Blåstömn. Blåstömn.
start
Direkt
Inget
H2 0
Fys.
Kaffe
Te (svart) Alkohol
8 cl för kvinnor
efter
saltlösning
12 cl för män
0,5 h
1h
1,5 h
2h
Blåstömn. +
H20§
Blåstömn. +
H20§
Blåstömn. +
H20§
-’’-
Blåstömn.
Blåstömn.
Blåstömn.
Blåstömn.
Blåstömn.
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
2,5 h
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
3h
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
3,5 h
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
4h
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
-’’-
*** Försökspersonen skall vara fullt frisk och ej gå på några mediciner.
§
Vätskeförlusten skall ersättas med samma volym H20
Vid dessa tidpunkter skall
följande göras:
1) Mät urinvolymen
2) Spara 10 ml urin
3) Mät Na- konc. mha
flamfotometern
Resultat och redovisning av data
Anteckna avgiven urinvolym samt Na-koncentration för varje angiven tidpunkt. Tänk på
att värdena som fås från flamfotometern är koncentrationer (mmol/L) och att de ska
räknas om till mmol. Då detta är gjort, plotta era data i ett samlat diagram, föreslagsvis
som i exemplet nedan.
Labrapport
Labrapporten skall innehålla följande, Introduktion, material och metod (beskrivning av
utförande) samt resultat och diskussion (diskutera era data och koppla ihop dem med
njurarnas fysiologi.
I varje rapport skall data från samtliga försökspersoner som genomfört laborationen ingå,
redovisade i diagram. Tips: När ni skall plotta era resultat i ett diagram så blir det tydligast om
ni har värdena för Na+ på en primär axel och volymen på en sekundär axel.
Vi inkluderar 2 teoretiska försökspersoner i denna laboration, en försöksperson som intar
preparatet Minirin och en annan som intar Furix, fundera över hur resultat för dessa
försökpersoner kan tänkas se ut.
Diskussionen i er rapport skall innehålla en jämförande diskussion mellan försökspersonerna
med avseende till såväl urinvolym samt de olika jonkoncentrationerna.
Är de erhållna resultaten förväntade? Fundera över vilka verkningsmekanismer de
olika preparaten/dryckerna har. Kan likartade resultat erhållas trots skilda
mekanismer? Kan flera olika mekanismer vara involverade i samma behandling?
Diksutera vilka resultat ni förväntar er av de teoretiska försökspersonerna som har
tagit preparaten minirin och furix?
Appendix
Handhavande av flamfotometer
-Flamfotometern startas av lab.handledaren. Uppvärmningstiden är därefter 15 min.
Uppvärmning och körning
1)
2)
3)
4)
5)
Slå på centralgasen.
Öppna gaskranen.
Öppna luftkranen.
Spänn fast de båda slangklämmorna på dilutorn.
Frigör klämman på slangen till dilutionslösningen. Kör först dH20 i ca 15 min. OBS!
Slangarna skall alltid vara i vätskan. Kontrollera att tillräckligt med diluent finns i
flaskan.
6) Efter uppvärmning justeras flamfotometern med dH20, dvs värdet ställs till 0,00 med
knappen 5.
7) Kalibrera apparaten med kalibreringslösning från Na/K-ampull, vilken sugs in via
dilutorn. Ampullösningen innehåller kända koncentrationer av Na (140 mM och K (5
mM).Vänta 20 sekunder och justera därefter uppmätt värde till ovanstående värde med
(6 och 7).
8) Kör därefter en blank (dvs dH20) som justeras till 0,00.
9) Kör därefter standardlösning en gg till och justera enligt ovan.
10) Kör blank och justera till 0,00
11) Na bestäms först och provet sugs då in direkt från provröret. Vid bestämning av K
måste provet först spädas 5 ggr i nytt provrör
12) Kör första provet
13) Kör blank
14) Kör nästa prov
15) Kör blank
Vid byte från Na till K (eller vice versa): byt filter och kalibrera med
kalibreringslösningen för den nya jonen
Flamfotometer
Dilutor till flamfotometer
