dormant spore lysis Desinfektionsmedel Joniserande IR UV Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 - Djupfilter - Membranfilter - Kemiskt: - Tryck - Strålning - Värme chemically resistant proteines activation 1 vegetative cell Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 sporulation outgrowth germinated spore germination 2 DNA, Ca-DPA, few ribosomes, key enzymes, no water high thermal resistance activated spore Core: Cortex: Negatively charged peptidoglucanes Coat: Endosporer (Bacillus, Clostridium, m.fl.) Avskiljning Inaktivering Ånga Torrvärme Sterilisering HOOC N COOH 5 4 3 2 1 0 0.1 10logN N0 t Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 D = decimal reduction time log N = log N0 - 1 t D Mikroorganismers värmekänslighet anges med D-värdet Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 4 3 Värmeavdödning av vegetativa celler orsakas främst av skador på cellmembranet, vars fluiditet ökar med temperaturen. Subletal dos ger osmotisk känsliga celler. Värmeavdödning av endosporer orsakas främst av DNA skador. DNAt är packat i stabil struktur genom associering med speciellt DNA-bindande protein. Vattenhalten är mycket låg i core vilket bidrar till värmestabiliteten. Vid initiering av groningen frigörs Ca2+ som är komplexbundet till DPA (dipicolinic acid) i core. DPA-halten korrelerar med sporens värmeresisten. DPA finns endast i endosporer. t ln(N0/N ) ∇ = =F k k FT Fref D121 Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 1 1-10 5-20 D60 Exempel på typiska D-värden (min) 1-10 <1 D50 6 5 FT = Fref exp(- ∆E ( 1 - 1 )) R Tref T Steriliseringstid vid annan temperatur: ∇ : "sterilkriterium" t= ln N = -kt N0 Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 1/T(°K) lutning = - ∆E/RT k = Ae RT -∆ E lutning = - k ln N = ln N0 -kt dN = -kN dt Endosporer (allmänt) 0.1 - 4 Cl. botulinum 0.2 Cl. thermosaccharolyticum 10-20 Micrococcus Streptococcus Svampsporer Mesofila bakterier (allm.) Virus Psykrotrofa bakterier Psykrofila bakterier ln k lnN lnN0 1a ordningens kinetik: Beräkning av steriliseringstiden F (min) D65 (min) 0.05 0.07 0.8 2.7 aw 0.995 0.98 0.94 0.9 -2 -1 0 1 2 log D 3 0 Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 0.5 Vattenaktivitet 1 G. Molin D-värdets variation med vattenaktiviteten för endosporer Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 Salmonella thyphimurium i sockerlösning Cl. botulinumsporer i tomatsås D115 (min) 0.13 0.26 0.49 0.52 pH 4 5 6 7 Värmeresistensen beror av pH och vattenaktivitet 8 7 0 0.2 0.4 0 T°C 40 120 A436 160 Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 80 A436 after continuous sterilisation 6.2 6.6 0.8 0.6 pH 7.0 A436 200 (h) 9 0 40 80 10 120 T°C Färg och pH ändring vid batch-sterilisering ( 3m3) Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 -∆E (kJ mol-1 ) B. subtilis sporer 318 B. stearothermophilus sporer 283 Cl. botulinum sporer 343 Folsyra 70 d-panthotenyl alkohol 88 Tiamine HCl 92 Cyanocobalamin 97 Riboflavin 98 Peroxidas 98 Maillard reaktioner ≈125 Exempel på aktiveringsenergier H - C - OH H H - C - OH H Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 O 11 N-glycosylamine H-C- H - C - OH Schiffs base H - C - OH H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH HO - C - H H-C- H-C-N-R HN - R Maillard products 2.1 2.2 2.3 Thiamine ∆E 92 kJ/mole 2.4 1/T 2.5 2.6 112 °C 2.7 2.8 96 °C spores ∆E 280 kJ/mole 2.9 Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 Den stora aktiveringsenergin för sterilisering utnyttjas för att minska oönskade kemiska reaktioner, genom kontinuerlig HTST sterilisering 0.01 0.1 1 12 Inactivation kinetics for thiamine and B. stearothermophilus spores D-glucose H H - C - OH H - C - OH H - C - OH HO - C - H H - C - OH H-C-O R-NH2 high T, low aw, high pH Maillard reactions A reducing sugar + -NH2 k (1/min) 0 10 20 30 120 F 130 Temperature (°C) C/Co 140 0 1 ∇(t) 0 = ∇ref A exp(-∆E/(RTref)) exp(-∆E(R/T)) dt Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 Relativ steriliseringsdos: A t Beräkningav relativ sterilitet och kemisk inaktivering vid batchsterilisering Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 F121 = 15 min ∆Esteril = 282 kJ/mole (≈ B. stearothermophilus) ∆Etiamin = 92 kJ/mole F (min) Steriliseringstid och inaktivering av tiamin vid kontinuerlig sterilisering Chemical reaction (C/Co) 14 13 E. coli Bioreactor steam system Air in Pastörisering: 1 10 60 100 1000 10 4 70 T (°C) 75 PerOx Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 Air out Enfors: Livsmedelsmikrobiologi -02 lågstandardhög- 65 AlkPho 85 16 Feed solutions 15 Analys av enzymaktiviteterna visar vilken pastörisering som utförts Harvest 80 10 100 1000 Analys av pastörisering av mjölk 15 sec pastörisering D (sec)