Protein Purifier
Datorrening av proteiner:
Laborationens målsättning är att med så få steg som möjligt erhålla ett rent protein. Det finns
20 olika enzym att välja på (undvik dock nr: 2,8,13,14 och 17). Oavsett vilket enzym ni väljer
är det fällningssteget ni börjar med. Jonbyteskromatografi och gelfiltrering är de
kromatografiska metoder som används i första hand.
Fällningssteget:
Initial saturation (1:a fällningssteget) De utfällda proteinerna kastas och de lösliga används
vidare.
Final saturation (2:a fällningssteget) På de tidigare lösliga proteinerna görs ett andra
fällningssteg. Välj den fraktion (olöst eller löst) som ser bäst ut för vidare upprening.
2D-SDS-PAGE:
Isoelektrisk fokusering i en dimension och SDS-PAGE i den andra. Detta ger information om
molvikt, pI och renhet.
Gelfiltrering:
Sephadex G-50, G-75 och G100 separerar proteiner med Mw upp till 30 kDa, 80 kDa
resåektive 100 kDa.
Sephacryl 200 HR, 300 HR (-250 kDa, -1500 kDa)
Jonbyteskromatografi:
Q-sepharos (anjonbytare)
S-sepharos (katjonbytare)
Chromatofocusing: Kromatografi som separerar map isoelektrisk punkt (i princip som
Isoelektrisk fokusering)
Hydrophobic interaction (H.I.C): Proteinet binds in vid hög jonstyrka
(löslighetsgränsen- ca 2 M) och elueras vid låg jonstyrka.
