Examensarbete i kemi, naturvetenskapliga fakulteten, Lunds universitet
MYCN och trkB uttryck i neuroblastom tumörer
Helén Nilsson
Neuroblastom är en barntumör som drabbar ca fjorton barn under 15 år i Sverige årligen. Tumören
uppstår ofta under fosterstadiet i celler som senare i utvecklingen bildar det sympatiska nervsystemet,
som är en del av det autonoma nervsystemet vilket styr kroppens inre mekanismer och som inte är
viljestyrt. Tumören kan därför påträffas var som helst i kroppen där sympatiska nervceller finns.
Neuroblastom kan delas in i flera olika kliniska stadier med olika prognos. En del tumörer är mycket
aggressiva och barn med dessa tumörer har en överlevnadschans på 2 till 20 procent, medan andra
tumörer kan vara godartade med 90-95 procents överlevnad. En liten andel neuroblastomtumörer kan
till och med tillbakabildas helt spontant, ett fenomen som gör neuroblastom till en mycket intressant
tumör att studera.
Tumörer uppstår när de gener som kontrollerar cellcykeln, det vill säga hur ofta och fort cellen delar
sig, slutar fungera som de ska. De drabbade cellerna börjar då dela på sig okontrollerat och en tumör
bildas. Ofta har därför tumörceller variationer i sitt DNA jämfört med ”friska” celler, och dessa
skillnader kan studeras och användas som markörer för att upptäcka tumörer och avgöra hur
aggressiva de är.
I aggressiva neuroblastomtumörer är ofta MYCN-genen amplifierad, det vill säga den finns i flera
kopior än i en ”frisk” cell. MYCN-genen kodar för ett protein som är involverat i cellcykelkontroll. En
annan gen som normalt inte uttrycks i mogna nervceller men som kan hittas i aggressiva
neuroblastomtumörer är genen som kodar för ett protein som kallas TrkB. TrkB är ett protein som
sitter på cellens yta och fångar in signaler från omgivningen som talar om när cellen ska växa eller
dela på sig. Eftersom TrkB bara uttrycks i neuroblastomtumörer med MYCN-amplifiering ville vi
undersöka om det finns något direkt samband mellan dessa två gener, det vill säga om det är MYCNgenen som styr uttrycket av trkB. För att göra detta har jag undersökt uttrycket av dessa gener i
neuroblastomtumörer och i odlade tumörceller. Genuttrycken mättes med en teknik som kallas reverse
transcriptase PCR, eller RT-PCR. När en gen uttrycks i en cell omvandlas den sekvens av DNA som
kodar för genen till RNA med hjälp av enzymet transkriptas. Det RNA som bildas används sedan som
mall för det protein som genen kodar för. Vid RT-PCR utnyttjar man egenskaper hos ett protein som
heter ”reverse transcriptase” Detta protein katalyserar översättningen av RNA till DNA istället för
tvärtom som vanliga transkriptaser gör. På så sätt kan man omvandla RNA-prover från ex tumörceller
till DNA. Detta DNA kan sedan användas i en reaktion som kallas PCR: polymerase chain reaction. I
denna reaktion utnyttjas värmestabila DNA-polymeraser (enzym som gör kopior av DNA sekvenser)
från bakterier som lever i en extremt varm miljö. Med hjälp av dessa polymeraser kan man göra kopior
av specifika DNA sekvenser som man är intresserad av. Kopieringen sker i cykler där man kraftigt
höjer temperaturen så att DNA strängarna ”öppnar sig” och blir tillgängliga för kopiering. Varje kopia
som bildas används som mall för en ny kopia i nästa cykel. På så sätt kan man snabbt få en stor mängd
av en viss gen. Detta gör det möjligt att amplifiera små mängder DNA och upptäcka skillnader i
uttrycket av olika gener som annars skulle vara svåra att mäta. En stor fördel med denna metod är att
den kräver en mycket liten mängd utgångsmaterial jämfört med andra metoder. Denna metod
användes för att studera uttrycket av MYCN och trkB i neuroblastomtumörer och i odlade
neuroblastomceller. Slutsatsen blev att även om det finns ett samband mellan MYCN amplifiering och
trkB uttryck så är MYCN amplifiering i sig inte tillräckligt för att inducera uttrycket av trkB.
Swedish official title: MYCN och trkB uttryck i neuroblastom tumörer
Swedish credits: 20p
Supervisor: Anders Edsjö och prof Sven Påhlman, Molekylär medicin, MAS
Submission date/time: 2001-03-16
Examensarbete i kemi, naturvetenskapliga fakulteten, Lunds universitet
MYCN and trkB expression in neuroblastoma deremined by
semiquantitative RT-PCR
Helén Nilsson
Chemistry, Biochemistry
Autumn 2000
Abstract in English
Neuroblastoma is a childhood tumour that originates in the sympathetic nervous system. One
characteristic of high stage tumours is amplification of the MYCN gene. MYCN is involved in
the control of cell growth and differentiation, and is also known as an inducer of migration.
Amplification of this gene might be the reason for the aggressive behaviour of these tumours.
The neurotrophin receptor trkB is not normally expressed in sympathetic neuroblasts, but in
high stage tumours with MYCN amplification trkB expression can be found. In this study, a
semi-quantitative RT-PCR assay was established and used to evaluate the putative connection
between MYCN over-expression and trkB expression in neuroblastoma. Both neuroblastoma
tumour samples with and without MYCN amplification, and neuroblastoma cell lines with
different MYCN expression has been studied. We show that even if trkB expression is found
in MYCN amplified neuroblastoma tumours, MYCN over-expression itself is not enough to
induce trkB expression.
