DX CT/NG/MG ASSAY 96 tester 37005 - Bio-Rad

DX CT/NG/MG ASSAY
96 tester
37005
Direkt detektion av Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae och Mycoplasma
genitalium med Real-Time PCR
1- AVSEDD ANVÄNDNING
Dx CT/NG/MG Assay är ett testpaket för kvalitativ multiplex in vitro-amplifiering för direkt detektion av Chlamydia trachomatis,
Neisseria gonorrhoeae och Mycoplasma genitalium i samma provrör med kliniska prover från individer med eller utan symptom.
Dx CT/NG/MG Assay används för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover1 (män och kvinnor) tagna av kliniker,
vaginalsvabbprover1 tagna av patient samt urinprover från män och kvinnor.
1
Tagna med Bio-Rad Dx Collection System-F50 (kat. #37007).
2. ÖVERSIKT AV TEST
Chlamydia trachomatis är en obligat intracellulär parasitbakterie som orsakar den mest spridda sexuellt överförda infektionen i
industriländerna. Ca 89 miljoner smittas varje år enligt WHO (1). Chlamydia trachomatis-infektioner ger oftast inga symptom hos
varken män och kvinnor och har allvarliga följder om de inte behandlas, t.ex. inflammationssjukdomar i bäckenet (PID),
utomkvedshavandeskap, tubarinfertilitet (2) hos kvinnor eller icke-gonokock uretrit och epididymit hos män (3).
Tester med molekylär diagnostik är att föredra för detektion av Chlamydia trachomatis-infektioner, eftersom de har högre
känslighet och är mer exakta i förhållande till andra metoder (4).
Neisseria gonorrhoeae är en icke-motil gramnegativ diplokockbakterie som orsakar ca 62 miljoner nya falla av gonorré varje år
(1). Följderna liknar dem som orsakas av Chlamydia trachomatis, men ofta är symptomen allvarligare.
Cellodling, som vanligtvis används för detektion av N. gonorrhoeae, är i hög grad beroende av korrekt provhantering och
bakteriens förmåga att leva i provet. Tester med molekylär diagnostik i kombination med vanliga metoder för detektion av N.
gonorrhoeae är att föredra.
Mycoplasma genitalium är en liten bakterie som vanligen orsakar uretrit hos män och infektioner i de nedre genitalierna hos
kvinnor. Symptom och mikroskopiska tecken liknar dem vid Chlamydia trachomatis. M. genitalium-infektioner antas även orsaka
tubarinfertilitet hos kvinnor (5-13).
Tester med molekylär diagnostik är en metod som med fördel används för detektion av Mycoplasma genitalium, eftersom den är
extremt svår att odla.
3. TESTPRINCIPER
Dx CT/NG/MG Assay innehåller två huvudsteg: provberedning och amplifiering/detektion av mål-DNA med PCR i realtid.
Amplifieringssprodukterna detekteras med fluorescerande färger under PCR.
För varje prov extraheras, amplifieras och detekteras en intern kontroll systematiskt på samma sätt som mål-DNA, vilket ger
kontroll av extraktionen och detektion av PCR-inhibition.
Paketet innehåller alla reagenser som behövs för provberedning och amplifiering/detektion och räcker till 96 tester.
Provberedning
DNA extraheras från alla provtyper som anges i kapitlet "Provtagning och hantering av prov", med hjälp av lyseringsbufferten
(L1) i paketet (Bio-Rad Chelex-metod).
En negativ konroll utförs under hela provberedningen samtidigt med proverna.
Den interna kontrollen (C1) tillsätts i varje prov och i den negativa kontrollen i början när provet förbereds.
PCR-amplifiering/-detektion i realtid
Vid realtids-PCR används fluorescerande oligonukleotida prober för att detektera DNA under amplifieringen genom att
hybridisera amplifieringsprodukterna. I Dx CT/NG/MG Assay används fyra olika oligonukleotida prober:
• C. trachomatis-probe, söker en krypten-plasmidsekvens; målsekvensen finns utanför området som tagits bort i den nya
stammen i C. trachomatis (nvCT) som nyligen karakteriserats (14).
• N. gonorrhoeae-probe, söker en sekvens i pilE-genen; den här målsekvensen delas av en del N. meningitidis-stammar och
kan i sällsynta fall ge felaktigt positiva NG-resultat. Detta är inget problem då N. meningitidis kan behandlas med samma
medicin som N. gonorrhoeae.
• M. genitalium-probe, söker en sekvens i MgPa-genen.
• Detektionsprobe med intern kontroll
Om inget mål-DNA finns för en viss oligonukleotidprobe, avges inget ljus och ingen signal detekteras. När det finns mål-DNA
ökar ljuset vid varje amplifiering. Under varje PCR-cykel, i hybridiseringssteget, mäter Dx Real-Time Systemets optiska modul
ljuset från varje fluorofor och Dx Real-Time Software jämför ljusintensiteten i flera cykler. Till sist analyserar Dx Real-Time
Software automatiskt resultaten av alla prover och kontroller.
1
4. INNEHÅLL I DX CT/NG/MG ASSAY
4.1. Beskrivning
Reagenserna och förbrukningsvarorna i paketet räcker till 96 tester. Alla reagenser är enbart avsedda för in vitro-diagnostiskt
bruk.
Märkning
Reagenser
Produktform
Lysis Buffer
Lyseringsbuffert:
Chelex-harts i en lyseringsbuffert. Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300. Varje
flaska innehåller en magnetisk omrörare.
2 x 21 ml
färdig att
använda
R1
Amplification
Mix
Koncentrerad amplifieringssblandning, 10X:
DNA-polymeras i en PCR-buffert som innehåller
primer, fluorescerande oligonukleotida
prober, dNTP, UDG och MgCl. 2
Konserveringsmedel: 0.05 % natriumazid.
2 x 150 µl
Späds ut
med R2
R2
Amplification
Mix Diluent
Utspädningsmedel för amplifieringsblandning:
PCR-buffert med MgCl. 2
Konserveringsmedel: 0.05 % natriumazid.
2 x 900 µl
färdig att
använda
C1
Internal
Control
Intern kontroll:
Icke-infektiöst DNA i en buffertlösning. Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300.
2 x 1050 µl
färdig att
använda
C3
Positive
Control
Positiv kontroll av CT, NG, MG:
Icke-infektiöstDNA från CT, NG och MG i en buffertlösning. Gul färg.
Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300.
1 x 600 µl
färdig att
använda
L1
Dx 24-Well
PCR Strips
Dx 8-Cap
Strips
Värmeplattor:
Vita mikroplattor med 24 brunnar med streckkod för entydig identifiering.
4
Lock:
8 lock för värmeplattor.
12
OBS! negativ kontroll: den negativa kontrollen är en alikvot av L1 Lysis Buffer. Ett tomt 2 ml mikrorör med skruvkork
märks "Negativ kontroll" och bearbetas från steg 5 av DNA-extraheringen (se kap. 8.1)……
4.2. Förvaring och hantering
Paketet måste förvaras vid en temperatur på 2-8 °C. Då kan reagenserna i Dx CT/NG/MG Assay användas till bäst föredatumet på etiketten.
ID
L1
C1
C3
R1+R2
(rekonstituerad blandning)
Förvaring efter öppning
6 månader i 2-8 C.
Kassera reagensen om den kontaminerats.
2-8 °C till bäst före-datumet.
Kassera reagensen om den kontaminerats.
4 timmar i 18-30 °C eller 16 timmar i 2-8 °C eller 2 veckor i - 20 °C. Fryst blandning
kan bara tinas en gång.
2
5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
Endast för in vitro-diagnostiskt bruk.
5.1.Hälso- och säkerhetsinformation
• Använd engångshandskar, laboratorierock och skyddsglasögon när du hanterar reagenser och prover.
• Tvätta händerna noga när du hanterat reagenser och prover. Det är inte tillåtet att äta, dricka eller röka i arbetsområdet.
• Hantera alla prover som om de kan smitta enligt rutiner för god laboratoriesed.
• Hantering och kassering av kemiska produkter ska genomföras enligt rutiner för god laboratoriesed.
• Ett säkerhetsdatablad kan fås av din lokala Bio-Rad-försäljare.
5.2.Försiktighetsåtgärder i samband med bearbetningen
• Det här paketet får endast användas tillsammans med Dx Real-Time System (Bio-Rad) och Dx Real-Time Software.
• Använd endast Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover tagna av
kliniker samt vaginalsvabbprover tagna av patient. Systemet får inte användas hemma.
• Använd rena behållare av polypropylen utan konserveringsmedel för urinprover.
• Använd inte Dx Collection System-F50 om förpackningen är skadad eller om det läckt från röret. Kassera oanvända eller
läckande system enligt rutiner för god laboratoriesed.
• Om laboratoriet tar emot ett svabbprov som inte tagits och transporterats med Dx Collection System-F50 eller ett provrör som
inte innehåller något eller två svabbprover får inte provet användas.
Använd inte utgångna reagenser.
• Blanda inte reagenser från paket med olika partinummer.
• Ändra inte analysförfarandet.
• Undvik kontaminering när proverna hanteras: Se till att provbehållarna inte kommer i kontakt med varandra; om handskarna
kommer i kontakt med prover ska de genast slängas.
• Använd en ny filterspets för varje prov.
• Använd DNase- och RNase-fria mikrorör och filterspetsar.
• Rekonstituera noggrant amplifieringsblandningen och undvik all kontaminering.
• Kontrollera noggrannheten för pipetterna och annan utrustning och att de fungerar korrekt.
• Undvik att spilla prover eller lösningar som innehåller prover. Spill måste sköljas med blekmedel som spätts till 10 %.
Materialet som används för rengöring måste kastas i en behållare för smittfarligt avfall.
• Arbetsytor, pipetter och annan utrustning måste dekontamineras regelbundet med blekmedel som spätts till 1 %.
• Arbetsområden: Det måste finnas två områden som används i en riktning för provberedning och amplifiering/detektion i
laboratoriet:
1. Provberedningsområdet används för: (a) beredning av prover och kontroller och (b) PCR-setup (pipettering av
amplifieringsblandning, kontroller och prover i Dx 24-Well PCR Strips). De här två stegen måste utföras i två separata zoner av
provberedningsområdet.
2. Amplifieringsområdet används för PCR-reaktion i realtid.
Alla reagenser, all utrustning och alla laboratorierockar som används i ett området får inte lämna detta området. För aldrig in
amplifieringsprodukter eller amplifieringsutrustning i provberedningsområdet.
6. PROVTAGNING OCH HANTERING AV PROVER
6.1. Svabbprover tagna med Bio-Rad Dx Collection System-F50
Dx CT/NG/MG Assay används för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover (män och kvinnor) tagna av kliniker,
vaginalsvabbprover tagna av patient.
Proverna får endast tas och transporteras med Dx Collection System-F50. Se bipacksedeln till Dx Collection System-F50
(Bio-Rad, kat.# 37007) för mer information om provtagning och -transport.
Ett transportrör som innehåller en pinne som inte kommer från Bio-Rad, flera pinnar eller ingen pinne kan inte användas med Dx
CT/NG/MG Assay.
Blod, sperma och vaginalbehandlingar kan påverka PCR-reaktionen. För mer information om störande substanser, se kapitlet
"Testresultat".
Svabbprover kan sparas i 28 dagar vid en temperatur på 18-30 °C eller 4 °C.
3
6.2. Urinprover
Dx CT/NG/MG Assay kan användas för urinprover från män och kvinnor med eller utan symptom.
OBS! Patienten får inte ha urinerat minst en timme innan provet tas.
1. Samla 10-20 ml av den första urinen i en ren behållare av polypropylen som inte innehåller konserveringsmedel.
2. Stäng behållaren och märk den med patientuppgifterna och datum/tid.
3. Transportera proverna till testplatsen i rumstemperatur (18-30 °C). Urinprover är stabila i 24 timmar vid rumstemperatur. Om
provet inte kan analyseras inom 24 timmar ska det förvaras vid en temperatur på 2-8 °C och analyseras inom 7 dagar.
4. Urinprover som analyseras på externa testplatser måste transporteras dit inom 24 timmar. Om proverna ska transporteras i
rumstemperatur ska de förvaras vid en temperatur på 2-8 °C innan de transporteras och när de kommer fram. De får inte
förvaras i rumstemperatur längre än sammanlagt 24 timmar.
7. NÖDVÄNDIGT MATERIAL
7.1.Material som ingår
• Dx CT/NG/MG Assay (Bio-Rad, kat. # 37005)
7.2.Material som säljs separat
• Dx Real-Time System, Dx Real-Time Software, PC och tillbehör (Bio-Rad, kat.# 94000)
• Dx Strip Cap Tool (ingår i paketet med Dx Real-Time System, Bio-Rad kat.#94000)
• Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) för tagning och transport av svabbprover från kvinnor och anala
svabbprover
7.3. Nödvändigt material som inte medföljer
• Rena behållare av polypropylen utan konserveringsmedel för urin
• Bänkcentrifug för PCR-värmeplattor
• Bänkcentrifug för 1.5 ml och 2 ml mikrorör
• Värmeblock som kan bli 105 °C varmt
• Vortexblandare
• Magnetomrörare
• Kalibrerade pipetter för 10-1000 µl
• Sterila pipettspetsar med filter
• Doseringspipett med sterila, separat förpackade 1.25 ml-spetsar
• 2 ml mikrorör med hermetisk skruvlock och rund botten (Simport kat.# T335-6S eller liknande)
• Engångshandskar utan puder
8. ANVÄNDNING
Följ dessa instruktioner noggrant och tillämpa rutiner för god laboratoriesed.
8.1. DNA-extraktion
1. Fastställ antalet prover som ska testas och använd ett mikrorör med skruvlock per prov plus ett till för den negativa
kontrollen. Märk varje mikrorör.
2. Tillsätt 1 ml av varje prov (transportmedium eller urin) i mikroröret. Låt ett mikrorör vara tomt för den negativa kontrollen.
3. Centrifugera i 10 minuter vid 5000 g och kassera supernatanten genom att vända mikrorören upp och ned.
4. Skaka flaskan med lyseringsbuffert (L1) och placera den på magnetomröraren så att Chelex-hartset är suspenserat.
5. Tillsätt 400 µl lyseringsbuffert (L1) i varje mikrorör, även röret för den negativa kontrollen.
6. Tillsätt 10 µl intern kontroll (C1) i varje mikrorör. Skruva fast locken ordentligt.
OBS! Det går även att blanda "L1+C1" i förväg och sedan tillsätta 410 µl av blandningen i varje mikrorör. Röret med
blandningen måste vortexblandas före varje pipettering för att Chelex-hartset ska suspenseras. Blandningen är stabil i
5 dagar vid 2-8 °C.
Exempel på blandning:
12 tester
24 tester
L1
5 ml
10 ml
C1
125 µl
250 µl
48 tester
Tillsätt 525 µl C1 direkt i 1 flaska med L1
4
7. Vortexblanda i 15-20 sekunder.
8. Inkubera i 10 minuter ± 2 minuter vid 105 °C.
9. Låt svalna i 2 minuter i rumstemperatur (18-30 °C).
10. Centrifugera i 2 minuter vid 4000 g.
Supernatanten innehåller extraherad DNA.
Extraherad DNA kan förvaras i rumstemperatur i 2 timmar. Om amplifiering/detektion inte utförs inom 2 timmar kan extraherad
DNA förvaras i 2-8 °C i upp till 4 dagar; för längre tids förvaring ska den förvaras i -20 °C i upp till 6 månader.
8.2. Rekonstituering av amplifieringsblandning
Före rekonstitueringen ska vialerna R1 (koncentrerad amplifeieringsblandning, 10X) och R2 (utspädningsmedel för
amplifieringsblandning) vortexblandas i 5 sekunder och sedan centrifugeras i 15 sekunder.
Tillsätt exakt 850 µl utspädningsmedel för amplifieringsblandning (R2) i en vial med koncentrerad amplifieringsblandning (R1).
Vortexblanda i 10 sekunder och centrifugera sedan kort.
En vial med rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2) räcker till 48 PCR-reaktioner i realtid. Förbered så många vialer med
rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2) som behövs (t.ex. 2 vialer om 96 tester ska bearbetas).
Den rekonstituerade amplifieringsblandningen (R1+R2) kan användas genast eller delas upp i alikvoter och frysas i högst 2
veckor i -20 °C.
8.3. PCR-amplifiering/detektion i realtid
Se bruksanvisningen till Dx Real-Time System för mer information.
Varje analysomgång måste omfatta en negativ och en positiv kontroll.
I provberedningsområdet:
1. Rekonstituera så många vialer med amplifieringsblandning som behövs enligt beskrivningen i kapitel 8-2 (testantal = n
prover + 1 positiv kontroll + 1 negativ kontroll).
2. Placera så många Dx 24-Well PCR Strips på en hållare och fördela 20 µl rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2)
noggrant i varje brunn med doseringspipetten.
3. Tillsätt 5 µl extraherad DNA eller extraherad negativ kontroll eller icke-extraherad positiv kontroll (C3) i brunnarna, följ
plattkartan.
4. Placera Dx 8-Cap Strips på Dx 24-Well PCR Strips. Fäst dem ordentligt med Dx Strip Cap Tool (medföljer Dx Real-Time
System) så att proverna inte avdunstar under PCR-reaktionen.
5. Centrifugera Dx 24-Well PCR Strips i 30 sekunder vid 400 g så att alla bubblor försvinner i brunnarna.
I amplifieringsområdet:
6. Sätt på datorn och sedan Dx Real-Time System.
Öppna Dx Real-Time Software och välj "Dx CT/NG/MG" i fönstret "PCR kit".
OBS! Använd "CT_NG_MG" som analysnamn när testbeställningar ska importeras till Dx Real-Time Software (valfritt).
Se bruksanvisningen till Dx Real-Time Software för mer information.
7. Följ instruktionerna i Dx Real-Time Software för att skapa en plattkarta.
8. Placera Dx 24-Well PCR Strips i Dx Real-Time System enligt anvisningarna i Dx Real-Time Software, och utför PCRreaktionen.
9. När PCR-reaktionen är klar ska Dx 24-Well PCR Strips tas ut ur Dx Real-Time System, placeras i en förslutningsbar
plastpåse och kasseras enligt rutiner för god laboratoriesed.
9. KALIBRERING
Under varje PCR-cykel, i hybridiseringssteget, mäter Dx Real-Time Systemets optiska modul ljuset från varje fluorofor och Dx
Real-Time Software jämför ljusintensiteten i flera cykler. Till sist analyserar programmet automatiskt resultaten av alla prover
och kontroller.
Dx Real-Time Software använder en matematisk algoritm för att fastställa värden av matematiska parametrar (bl.a. Ceep och
F0) för varje PCR-kurva. Dessa visas i kalkylbladet med resultat. Beräkningen av de här parametrarna baseras på antagandet
att PCR-reaktionens effektivitetskvot är som störst i början av reaktionen och minskar efter ett antal cykler, som varierar från ett
prov till ett annat. Ceep-värdet (Ceep = cykel i slutet av exponeringsfasen) motsvarar cykeln då PCR börjar bli mindre effektiv.
Ceep-värdet ligger normalt nära cykeln då fluorescenssignalen börjar stiga över bakgrunden. Under idealiska PCR-förhållanden
(inga reaktionshämmare, hög effektivitet) har Ceep-värdet samband med kopieantalet för målsekvensen i provet före
förstärkningen: Ju högre Ceep-värdet är desto lägre är det ursprungliga kopieantalet.
F0-värdet motsvarar den (ej mätbara) målspecifika fluorescenssignalen före amplifieringen. F0-värdet står i proportion till
kopieantalet för målsekvensen i provet före amplifieringen. Eftersom det uppskattade F10-värdet vanligtvis är <1 visar Dx RealTime Software värdet -log10 (F0). Ju högre -log10 (F0)-värdet är desto lägre är det ursprungliga kopieantalet.
I Dx CT/NG/MG Assay baseras analysen av resultaten på Ceep-värden.
5
10. KVALITETSKONTROLL
Positiva och negativa kontroller
En negativ och en positiv kontroll måste finnas med i varje analysomgång för att eventuella fel i provbearbetningen,
förstärkningen eller detektionen ska kunna upptäckas.
Om Ceep-värdena för kontrollerna ligger utanför de förväntade värdena, ogiltigförklarar Dx Real-Time Software hela analysen
och visar en av följande flaggor:
* Negativ kontroll:
Flagga
Invalid_IC:
CT_conta:
NG_conta:
MG_conta:
CTNG_conta:
CTMG_conta:
NGMG_conta:
CTNGMG_conta:
Innebörd
Ogiltig intern kontroll
Kontaminering av CT DNA
Kontaminering av NG DNA
Kontaminering av MG DNA
Kontaminering av CT och NG DNA
Kontaminering av CT och MG DNA
Kontaminering av NG och MG DNA
Kontaminering av CT, NG och MG DNA
* Positiv kontroll:
Flagga
CT_out:
NG_out:
MG_out:
CTNG_out:
CTMG_out:
NGMG_out:
CTNGMG_out:
Innebörd
CT-värde ej inom tillåtet intervall
NG-värde ej inom tillåtet intervall
MG-värde ej inom tillåtet intervall
CT och NG-värde ej inom tillåtet intervall
CT och MG-värde ej inom tillåtet intervall
NG och MG-värde ej inom tillåtet intervall
CT, NG och MG-värde ej inom tillåtet intervall
Alla prover och kontroller i analysen måste köras om från DNA-extraheringen.
Upptäckt av hämmare: Intern kontroll
Den interna kontrollen läggs till varje prov och den negativa kontrollen i början av DNA-extraheringen och detekteras med en
undersökningen under PCR-reaktionen.
Prover vars interna kontrolls Ceep-värde ligger över det förväntade värdet (kan då vara hämmat) tolkas av Dx Real-Time
Software enligt följande:
• Prover med Ceep-värde  48 för ett mål (CT, NG eller MG) rapporteras som "positive" för målet.
• Prover med inget Ceep-värde eller Ceep-värde > 48 för ett mål rapporteras som "invalid" för målet.
Alla prover som har ett ogiltigt resultat för målet måste köras om från DNA-extraheringen.
11. UTVÄRDERING AV RESULTATEN
11.1. Testvalideringskriterier
Analysen är giltig när:
• Den positiva kontrollens Ceep-värde ligger inom det förväntade intervallet för de tre målen CT, NG och MG.
• Den negativa kontrollen inte har något Ceep-värde eller ett Ceep-värde > 48 för de tre målen CT, NG och MG.
Om analysen är giltig, anger Dx Real-Time Software bearbetningsstatusen som "Passed". Annars anger Dx Real-Time Software
bearbetningsstatusen som "Failed". Om bearbetningsstatusen är "Failed" anges alla testresultat i bearbetningen som "Invalid"
och alla prover och kontroller måste köras om från DNA-extraheringen.
11.2. Beräkning/utvärdering av resultat
Dx Real-Time Software beräknar resultaten och Ceep-värdena för CT, NG och MG och för den interna kontrollen i prover och
kontroller beräknas automatiskt.
Om testet är godkänt anges prover (hämmade eller inte) med ett Ceep-värde  48 för ett mål (CT, NG eller MG) som "positive"
av Dx Real-Time Software. Om till exempel ett prov är positivt för CT är den rapporterade statusen "CT_POS".
Om testet är godkänt anges prover som inte är hämmade med inget eller ett Ceep-värde > 48 för ett mål (CT, NG eller MG) som
"negative" av Dx Real-Time Software. Om till exempel ett prov är negativt för CT är den rapporterade statusen "CT_neg".
Om testet är godkänt tolkas prover som är hämmade med inget eller ett Ceep-värde > 48 för ett mål (CT, NG eller MG) som
"invalid" av Dx Real-Time Software, som sedan rapporterar statusen "Failed" med flaggan "Invalid_IC". Provet måste
analyseras om från DNA-extraheringen.
6
OBS! Om ett hämmat prov är ett urinprov bör det frysas över natten i -20 °C innan det bearbetas igen eftersom
eventuella hämmare då försvinner.
Om provet fortfarande är hämmat ska ett nytt prov tas och testas.
12. TESTBEGRÄNSNINGAR
• Hur bra testet lyckas beror på kvaliteten på proverna. Följ därför alla instruktioner i kapitlet "Provtagning och hantering av
prov".
• Analysera endast angivna provtyper. Andra typer av prover är inte godkända.
• Blod, slem, sperma och vaginalbehandlingar kan påverka PCR-reaktionen. För mer information om störande substanser, se
kapitlet "Testresultat".
• Inverkan av andra faktorer som flytningar, användning av tamponger, vaginaldusch har inte fastställts.
• Endast personal om utbildats för Dx CT/NG/MG Assay, Dx Real-Time System och Dx Real-Time Software får använda
analysen.
• Ett negativt resultat utesluter inte en eventuell infektion eftersom resultaten beror på flera variabler. Felaktig provtagning och
provhantering, hämmare eller tekniska fel kan ge missvisande resultat.
• Vaginal-, anal- eller urinprover ersätter inte cervikala undersökningar och endocervikalprover för att diagnostisera
urogenitala infektioner hos kvinnor. Patienterna kan ha cervitit, uretrit, infektioner i urinvägarna eller vaginan av andra
orsaker eller andra infektioner med andra patogener.
• The Dx CT/NG/MG Assay är inte avsedd för bedömning av misstänkt sexuellt utnyttjande eller andra rättsmedicinska
indikationer.
• Om en behandling varit framgångsrik eller inte kan inte avgöras med Dx CT/NG/MG Assay eftersom patogen-DNA kan
finnas även efter en antimikrobiell behandling.
• Precis som vid andra diagnostiska tester ska resultaten av Dx CT/NG/MG Assay tolkas tillsammans med andra
laboratoriska och kliniska fynd.
13. FÖRVÄNTADE RESULTAT
Prevalens
Förekomsten av positiva prover för C. trachomatis, N. gonorrhoeae och M. genitalium hos de som undersökts beror på klinisk
bild, ålder, riskfaktorer, kön och testmetod.
Förekomsten som observerats med Dx CT/NG/MG Assay i kliniska studier på de två olika platserna visas nedan:
Plats
Kön
Antal
patienter
Inga symptom Med
symptom
♂
♂
177
150
14
24
7.9%
16.0%
10
24
Inga symptom Med
symptom
♀
♀
539
89
37
3
6.9%
3.0%
0
0
Inga symptom Med
symptom
♂
♂
236
24
18
2
7.6%
8.3%
2
4
Inga symptom Med
symptom
♀
♂
166
27
17
4
10.3%
15.4%
1
2
Befolkning
Positiv förC.
trachomatis
Positiv förN.
gonorrhoeae
1
1
2
2
Positiv för
M. genitalium
Inga
symptom
Med
symptom
Inga
symptom
Med
symptom
Inga
symptom
Med
t
Inga
symptom
Med
t
♂
♂
♀
♀
♂
♂
♀
♂
7
Totalt för båda platser:
Befolkning
Kön
Antal
patienter
Positiv förC.
trachomatis
Positiv förN.
gonorrhoeae
Inga symptom
Med symptom
♂
♂
413
174
32
26
7.7% 14.9%
12
28
Inga symptom
Med symptom
♀
♂
705
116
54
7
7.7% 6.0%
1
2
Inga
symptom
Med
Inga
symptom
Med
Positiv förM.
genitalium
♂
♂
413
174
♀
♂
705
116
14. PRODUKTEGENSKAPER
14.1. Analytiska egenskaper
Analytisk känslighet/detektionsgräns
Detektionsgränsen hos Dx CT/NG/MG Assay har fastställts för varje mål med:
- för C. trachomatis: den internationella panelen QCMD06 CTDNA06B i urin och i transportmedium
- för N. gonorrhoeae: den internationella panelen QCMD06 NgDNA06 i urin
- för M. genitalium: ATCC-stammen 33530D vid en koncentration av 1 ng DNA/µL i urin
En utspädningsserie bereddes för varje analyt och testades 24 till 36 gånger. Detektionsgränsen fastställdes med Probit-analys
med en utspädning på en positiv nivå på 95 % eller mer:
- Detektionsgränsen för C.trachomatis uppskattas ligga på:
• 73 kopior av DNA/ml i transportmedium, med ett konfidensintervall på 95 % av 45 till 182 kopior av DNA/ml
• 158 kopior av DNA/ml i urin, med ett konfidensintervall på 95 % av 106 till 315 kopior av DNA/ml
-
Detektionsgränsen för N. gonorrhoeae uppskattades vid 1559 CFU/ml i urin, med ett konfidensintervall på 95 % av 1066
till 3283 kopior av CFU/ml
- Detektionsgränsen för M. genitalium uppskattades vid 450 motsvarighetsgenom/ml i urin, med ett konfidensintervall på
95 % av 250 till 1246 kopior av CFU/ml
Detektionsgränserna har fastställts genom testning av 16 serologiska varianter av stammarna för C. trachomatis (A, B, Ba, C, D,
E, F, G, H, I, J, K, LGV1, LGV2, LGV3, nv CT) och 19 N. gonorrhoeae isolerade från patienterna.
Analytisk specifitet (korsreaktivitet)
Den analytiska specifiteten hos Dx CT/NG/MG Assay har utvärderats med hjälp av 112 bakterie-, virus-, jäst- och
mögelstammar. Den här panelen omfattar stammar som kan isoleras i urogenitaldelarna och stammar som representerar
fylogenetiskt tvärsnitt med Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae eller Mycoplasma genitalium:
Achromobacter xerosis
Acinetobacter calcoaceticus
Acinetobacter lwoffii
Actinomyces isrealii
Aerococcus viridans
Agrobacterium radiobacter
Alcaligenes faecalis
Bacillus subtilis
Bacteriodes fragilis
Bacteroides ureolyticus
Bifidobacterium adolescentis
Bifidobacterium breve
Brevibacterium linens
Campylobacter jejuni
Candida albicans
Candida glabrata
Candida tropicalis
Chlamydia pneumoniae
Chlamydia psittaci
Chromobacterium violaceum
Citrobacter freundii
Clostridium perfringes
Corynebacterium genitalium
Corynebacterium xerosis
Cryptococcus neoformans
Haemophilus influenzae
Hepatitis B virus (HBV)
Herpes simplex virus 1
Herpes simplex virus 2
Human Immunodeficiency
Virus (HIV)
Human Papilloma Virus HPV
16
Human Papilloma Virus HPV
18
Kingella dentrificans
Kingella kingae
Klebsiella oxytoca
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus acidophilus
Lactobacillus brevis
Lactobacillus jensenii
Lactobacillus vaginalis
Legionella pneumophila
Leuconostoc mensenteroides
Micrococcus luteus
Moraxella (Branhamella)
catarrhalis
Moraxella lacunata
Moraxella osloensis
Morganella morganii
Mycobacterium gordonae
Mycobacterium smegmatis
Mycoplasma fermentans
Neisseria perflava
Neisseria polysaccharea
Neisseria sicca
Neisseria subflava flava
Neisseria subflava perflava
Paracoccus denetrificans
Peptostreptococcus anaerobius
Plesiomonas shigelloides
Propionibacterium acnes
Proteus mirabilis
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas putida
Rahnella aquatilis
Rhodospirillum rubrum
Salmonella minnesota
Salmonella typhimurium
Serracia marscence
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus bovis
Streptococcus griseinus
Streptococcus mitis
8
Cytomegalovirus
Derxia gummosa
Edwardsiella tarda
Eikenella corrodens
Enterobacter cloacae
Enterococcus avium
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium
Escherichia coli
Flavobacterium meningosepticum
Fusobacterium nucleatum
Gardnerella vaginalis
Gemella haemolysans
Mycoplasma hominis
Mycoplasma orale
Mycoplasma penetrans
Mycoplasma pneumoniae
Neisseria cinerea
Neisseria elongata
Neisseria flavescens
Neisseria lactamina
Neisseria meningitidis 135
Neisseria meningitidis
serogroupe A
Neisseria meningitidis
serogroupe B
Neisseria meningitidis
serogroupe C
Neisseria mucosa
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes
Streptococcus salivarus
Streptococcus sanguis
Treponema pallidium
Trichomonas vaginalis
Ureaplasma urealyticum
Veillonella parvula
Vibrio parahaemolyticus
Yersinia enterocolitica
Alla stammar förutom 22 odlades, kalibrerades vid 108 CFU/ml i transportmedium, extraherades och testades med Dx
CT/NG/MG Assay. För 22 stammar som inte odlades testades vanligt DNA vid 40 µg/ml till 200 µg/ml direkt med Dx CT/NG/MG
Assay.
En stam, Neisseria meningitidis serogroup B, gav positivt resultat med målet Neisseria gonorrhoeae. Den här korsaktiviteten har
även observerats vid kliniska utvärderingar.
Interferenser
Möjliga interferenser på Dx CT/NG/MG Assay har utvärderats med endogena eller exogena substanser som kan finnas i svabboch/eller urinprover. Fjorton substanser späddes ut till olika koncentrationer och tillsattes svabblösning i transportmedium eller
urinprov med de 3 målen CT, NG och MG med en koncentration av ca 3 gånger detektionsgränsen samt en svabblösning i
transportmedium eller urinprov som inte innehöll något av de 3 målen. Varje förhållande testades 10 replikat.
Följande substanser testades:
Eventuellt störande substans
Koncentration
Matris
Bilirubin
1 mg/ml
Urin
Blod
5 % v/v
Urin
5 % v/v
Pinne
1 mg/ml
Urin
Glukos
pH 4
Urin
pH 9
Urin
Protein (humant serum albumin)
5%
Urin
Delfen (kontraceptivt skum)
5%
Pinne
Betadine
5%
Pinne
Miconazole (bakterie- och svampdödande medel)
5%
Pinne
Isoconazole (bakterie- och svampdödande medel)
5%
Pinne
Trophicrem (vaginalkräm)
5%
Pinne
Acyclovir (antiherpesmedel)
5%
Pinne
Lubricant KY Gel (glidmedel)
5%
Pinne
Progesterone
5%
Pinne
Substanserna ovan påverkade inte Dx CT/NG/MG Assay, förutom:
- Delfen 5%: hämmande effekt på detektionen av Neisseria gonorrohoeae och Mycoplasma genitalium.
- Blod vid 5%: hämmande effekt på detektionen av Neisseria gonorrohoeae.
Jämförande studie mellan olika multiplex-analyter
Validering av förekomsten av de 3 mikroorganismerna i samma prov ger ingen konkurrerande effekt mellan målen som skulle
kunna leda till en detektionsdefekt i någon av dem. Urin- och transportmedieprover spetsades med låga och höga
koncentrationer av varje mikroorganism för att förbereda alla kombinationer (1 låg/2 höga eller 2 låga/1 hög). Proverna testades
med Dx CT/NG/MG Assay parallellt med prover spetsade med en låg koncentration av endast en av varje mikroorganism för att
spåra eventuell inverkan på målen. Andelen positiva svar analyserades med tester i tre replikat under tre dagar.
Oberoende av den undersökta mikroorganismen hade ingen av de tre kombinationerna någon inverkan på det förväntade
resultatet. Det finns därför ingen konkurrens mellan målen och förekomsten av en av mikroorganismerna i hög koncentration ger
ingen detektionsdefekt i någon av de andra två.
Hög koncentration av de tre mikroorganismerna i samma prov hämmar dock den interna kontrollen.
9
Precisionsstudie
En studie har gjorts för att fastställa precisionen hos analysen, från dag till dag, från instrument till och instrument och sats till
sats. Tre urinprover (U2, U3, U4) och tre transportmedieprover (S2, S3, S4) spetsades med låg, medelhög och hög
koncentration av C. trachomatis, N. gonorrohoeae eller M. genitalium.
I enlighet med CLSIs instruktioner EP5A2, testades panelen i tre replikat per dag i 21 dagar på två olika Dx Real-Time Systeminstrument och med två olika satser av Dx CT/NG/MG Assay. Analysen av positiva prover gjordes med Ceep-värden.
Funktionen Nested ANOVA användes för att mäta varianskomponenterna för varje villkor (sats - instrument - dag - replikat). Alla
tester gav det förväntade resultatet.
Resultat:
Chlamydia trachomatis
CT
Inom analys
Dag till dag
Mellan
instrument
Mellan satser
Total precision
N
Medel
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
PANEL
U2 (låg)
250
31,0
1,542
5,0%
0,674
2,2%
0*
NA
1,151
3,7%
2,038
6,6%
U3 (medel)
252
28,6
0,370
1,3%
1,246
4,4%
0*
NA
0,872
3,0%
1,565
5,5%
U4 (hög)
251
22,0
0,197
0,9%
0,888
4,0%
0*
NA
0,076
0,3%
0,913
4,2%
S2 (låg)
252
33,3
0,405
1,2%
0,484
1,5%
0*
NA
0,354
1,1%
0,723
2,2%
S3 (medel)
251
30,9
0,196
0,6%
0,582
1,9%
0*
NA
0,246
0,8%
0,661
2,1%
S4 (hög)
252
26,9
0,166
0,6%
0,176
0,7%
0*
NA
0,177
0,7%
0,300
1,1%
PANEL
* Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0.
Neisseria gonorrhoeae
NG
Inom analys
Dag till dag
Mellan
instrument
CV %
PANEL
N
Medel
Standardavvikelse
Total precision
N
Medel
U2 (låg)
243
31,1
1,487
4,8%
1,095
3,5%
0*
NA
1,076
3,5%
2,137
6,9%
U3
(medel)
U4 (hög)
209
28,3
1,466
5,2%
0,866
3,1%
0*
NA
0,148
0,5%
1,710
6,0%
242
20,2
0,693
3,4%
1,127
5,6%
0,25
1,2%
1,062
5,3%
1,715
8,5%
S2 (låg)
252
33,1
0,221
0,7%
0,233
0,7%
0,133
0,4%
0*
NA
0,348
1,1%
S3
(medel)
S4 (hög)
251
30,7
0,346
1,1%
0,429
1,4%
0,089
0,3%
0*
NA
0,558
1,8%
252
27,1
0,382
1,4%
0,708
2,6%
0*
NA
0*
NA
0,805
3,0%
PANEL
Standardavvikelse
Mellan satser
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
PANEL
* Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0.
Mycoplasma genitalium
MG
Inom analys
Dag till dag
Mellan
instrument
CV %
Standardavvikelse
PANEL
N
Mellan satser
Medel
Standardavvikelse
Total precision
PANEL
N
Medel
Standardavvikelse
CV %
Standardavvikelse
PANEL
U2 (låg)
252
32,6
0,322
1,0%
0,344
1,1%
0*
NA
0,257
0,8%
0,537
1,6%
U3
(medel)
252
29,1
0,414
1,4%
1,216
4,2%
0*
NA
0,220
0,8%
1,303
4,5%
U4 (hög)
251
22,8
0,408
1,8%
0,851
3,7%
0*
NA
0*
NA
0,943
4,1%
S2 (låg)
252
35,9
0,481
1,3%
0,630
1,8%
0*
NA
0,427
1,2%
0,901
2,5%
S3
(medel)
251
33,2
0,439
1,3%
0,658
2,0%
0*
NA
0,252
0,8%
0,831
2,5%
S4 (hög)
252
27,5
0,389
1,4%
0,213
0,8%
0*
NA
0,162
0,6%
0,472
1,7%
* Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0.
10
14.2. Kliniska egenskaper
Kliniska egenskaper hos Dx CT/NG/MG Assay undersöktes i en studie på två kliniska platser i Frankrike.
1420 patienter med och utan symptom som på mottagningar för STI-prevention och på anonyma testmottagningar har använts i
den här studien. 12 patienter uppfyllde inte kriterierna ovan och har inte tagits med. De 1408 övriga patienterna är med i studien
(821 kvinnor och 587 män).
Totalt 2361 prover analyserades:
•
430 vaginalprover tagna av patienten
•
407 endocervikalprover
•
386 vaginalprover tagna av kliniker
•
540 urinprover (första urinen) från kvinnor
•
532 urinprover (första urinen) från män
•
57 analprover
•
9 urinrörsprover
Prover:
•
•
•
•
381 vaginal-, endocervikal- och urinprover kom från samma patienter
26 vaginal- och endocervikalprover togs från samma patienter
151 kvinnor lämnade urinprov och självtagna vaginalprov
6 män lämnade urinprov och urinrörsprov.
Alla prover togs med Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) och Dx Collection System-M15 (Bio-Rad, kat.# 37006).
60 frysta prover (10 urinprover, 22 analprover, 16 vaginalprover, 1 endocervikalprov och 11 urinrörsprover) i 2SP-medium och
som först varit positiva för en av de tre mikroorganismerna (20 per mikroorganism) testades med Dx CT/NG/MG Assay.
Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet C. trachomatis fastställdes genom att två EU-registrerade PCR-realtidstester
jämfördes. Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet N. gonorrhoeae fastställdes genom att ett EU-registrerat PCR-test
eller en odling jämfördes. Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet M. genitalium fastställdes genom att ett internt
PCR-test eller en odling jämfördes med hjälp av TaqMan-metoden enligt Jensen (15). På en av platserna testades endast de
prover med det interna PCR-testet som visade sig vara positiva med Dx CT/NG/MG Assay.
Chlamydia trachomatis:
1341 prover från två platser analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och PCR 1-testet:
Plats 1 + 2
PCR 1-test negativt
PCR 1-test positivt
Dx CT
negativt
Dx CT
positivt
Dx CT
negativt
Inv IC
Totalt
Prover
8
0
0
0
0
8
♀ endocervikalprov
387
2
0
19
0
408
♀ vaginalprov
174
0
1
20
1
195
♀ urinprov
158
1
0
18
4
177
♀ analprov
4
0
0
0
0
4
♂ urinprov
450
3
0
41
13
492
♂ analprov
34
0
1
13
0
48
♂ urinrörsprov
8
0
0
1
0
9
1223
6
2
112
18
1341
Prover
♀ självtaget vaginalprov
Totalt
Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 1-test är 1223/1229 = 99.5 % CI 95
[98.9 % – 99.8 %].
Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 1-test är 112/114 = 98.3 % CI 95
[93.8 % – 99.8 %].
11
På en av platserna analyserades 1014 prover med Dx CT/NG/MG Assay och ett andra PCR realtidstest:
Plats 1
PCR 2-test negativt
PCR 2-test positivt
Prover
Dx CT
negativt
Dx CT
negativt
♀ självtaget vaginalprov
Dx CT
positivt
Dx CT
positivt
Inv IC
Totalt
199
2
2
20
1
224
5
0
0
1
0
6
♀ vaginalprov
365
2
1
16
0
384
♀ urinprov
345
0
2
10
2
359
♂ urinprov
31
0
1
4
0
36
♂ analprov
5
0
0
0
0
5
950
4
6*
51
3
1014
♀ endocervikalprov
Totalt
* Två av de här proverna (1 ♀ vaginalt och 1 ♀ urin) är sant negativa, från patienter med negativa prover med Dx CT/NG/MG
Assay och PCR 2-test.
Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 2-test
är 950/954 = 99.6 % CI 95 [98.9 % – 99.9 %].
Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 2-test
är 51/57 = 89.5 % CI 95 [78.51 % – 96.0 %].
När de avvikande proverna analyserats togs två prover bort från
beräkningarna. De kommer från de två patienterna vars
prover var negativa med Dx CT/NG/MG Assay och PCR 2-testet.
Den relativa känsligheten efter det är 51/55 = 92.7 % CI 95 [82.4 % – 98.0 %].
Neisseria gonorrhoeae:
1012 prover analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och ett PCR-realtidstest; 251 andra prover analyserades med Dx
CT/NG/MG Assay och odling. Resultat:
Jämförelse med ett PCR-realtidstest
Plats 1
PCR NG-test negativt
PCR NG-test positivt
Prover
Dx NG
negativt
Dx NG
positivt
Dx NG
negativt
Dx NG
positivt
223
0
0
4
0
♀ vaginalprov
380
♀ urinprov
Inv IC
Totalt
0
1
224
0
0
0
4
1
0
0
0
381
356
0
0
0
2
358
♀ analprov
1
0
0
0
0
1
♂ urinprov
30
0
0
1
0
31
♂ analprov
3
0
1
9
0
14
997
1
1
10
3
1012
♀ självtaget vaginalprov
♀ endocervikalprov
Totalt
Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR-testet är 997/998 = 99.9 % CI 95 [99.4 % – 100 %].
Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR-testet är 10/11 = 90.9 %.
12
Jämförelse med odlingen
Plats 1
NG-kultur negativt
NG-kultur positivt
Dx NG
negativt
Dx NG
positivt
Dx NG
negativt
Dx NG
positivt
Inv IC
Totalt
8
0
0
0
0
8
390
0
0
0
0
390
♀ vaginalprov
6
0
0
0
0
6
♀ urinprov
6
0
0
0
0
6
♀ analprov
3
0
0
0
0
3
♂ urinprov
227
1
0
18
5
251
♂ analprov
35
1
0
10
0
46
♂ urinrörsprov
0
0
0
2
0
2
675
2
0
30
5
712
Prover
♀ självtaget vaginalprov
♀ endocervikalprov
Totalt
Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på kulturen är 675/677 = 99.8 % CI 95 [98.9 % – 100 %].
Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på kulturen är 30/30 = 100 %.
Mycoplasma genitalium:
656 prover från plats två analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och ett internt MG PCR-test med TaqMan-metoden:
Plats 2
PCR MG-test negativt
PCR MG-test positivt
Prover
Dx MG
negativt
Dx MG
positivt
Dx MG
negativt
Dx MG
positivt
Inv IC
Totalt
♀ urinprov
170
0
0
1
8
171
♀ endocervikalprov
21
0
0
0
0
21
♀ vaginalprov
181
1
0
4
3
186
♂ urinprov
236
0
1
5
17
242
♂ analprov
1
0
0
0
0
1
♂ urinrörsprov
7
0
0
0
0
7
616
1
1
10
28
656
Totalt
Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på det interna TaqMan PCR-testet är 616/617 = 99.8 % CI
95 [99.1 % – 100 %].
Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på det interna TaqMan PCR-testet är 10/11 = 90.9 %.
25 prover från 20 patienter som testats positiva för M. genitalium med Dx CT/NG/MG Assay på plats 1 skickades till plats 2 för
analys med det interna
TaqMan MG PCR-testet. 22/25 prover testades positiva med Dx CT/NG/MG Assay på plats 2, de återstående 3 proverna låg
nära detektionsgränsen. Av de 22 proverna var 2 negativa med det interna TaqMan MG PCR-testet. Överensstämmelsen
mellan Dx CT/NG/MG Assay och det interna TaqMan PCR-testet är 20/22 = 90.9 % för proverna från plats 1. Men minst ett av
de avvikande proverna är sant positivt eftersom det kommer från en patient vars alla prover var positiva för M. genitalium med
Dx CT/NG/MG Assay. Den slutgiltiga överensstämmelsen mellan Dx CT/NG/MG Assay och det interna TaqMan PCR-testet, när
resultaten från plats 1 och plats 2 adderats, är 626/629 = 99.5 %.
Retrospektiv studie (plats 2)
60 frysta prover (10 urinprover, 22 analprover, 16 vaginalprover, 1 endocervikalprov och 11 urinrörsprover) som förvarats i -80
°C i 2SP-medium och som först varit positiva för en av de tre mikroorganismerna med vanligt test (20 per mikroorganism)
testades retrospektivt med Dx CT/NG/MG Assay.
19/19 prover var överensstämmande positiva för C. trachomatis, det tjugonde hade en ogiltig internkontroll.
19/20 prover var överensstämmande positiva för N. gonorrhoeae, det tjugonde hade tidigare varit positivt i en en odling med
endast en odling.
16/20 prover var överensstämmande positiva för M. genitalium; av de fyra avvikande (urin) var två negativa efter kontroll med
normalt test.
13
15. REFERENSER
1. WHO. Global prevalence and incidence of selected curable sexually transmitted infections. Overview and estimates.
Geneva: WHO; 2001.
2. Cates W Jr, Rolfs RT Jr, Aral SO. Sexually transmitted diseases, pelvic inflammatory disease, and infertility: an
epidemiologic update. Epidemiol Rev 1990; 12: 199–220
3. Stamm WE. Chlamydia trachomatis infections of the adult. In: Holmes KK, Sparling P F, Mardh PA, eds. Sexually
Transmitted Diseases, 3rd ed. New York: McGraw-Hill, 1999.
4. Centers for Disease Control and Prevention. Screening tests to detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae
infections. MMWR 2002; 51 (No. RR-15) : 1-27.
5. Taylor-Robinson D. Mycoplasma genitalium: an update. Int J STD AIDS 2002; 13: 145-151
6. Simms I, Eastick K, Mallinson et al. Associations between Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, and pelvic
inflammatory disease. Sex Transm Infect 2003; 79: 154-156
7. Cohen CR, Manhart LE, Bukusi EA et al. Associations between Mycoplasma genitalium and acute endometritis. Lancet
2002; 359: 765-766
8. Clausen H F, Fedder J, Drasbek M et al. Serological investigation of Mycoplasma genitalium in infertile women. Human
Reprod 2001; 16: 1866-1874
9. Falk L, Fredlund H, Jensen JS. Symptomatic urethritis is more prevalent in men infected with Mycoplasma genitalium than
with Chlamydia trachomatis. Sex Transm Infect 2004; 80: 289-293
10. Moi H, Reinton N, Moghaddam A. Mycoplasma genitalium in women with lower genital tract inflammation. Sex Transm Infect
2009; 85: 10-14
11. Moi H, Reinton N, Moghaddam A. Mycoplasma genitalium is associated with symptomatic and asymptomatic nongonococcal urethritis in men. Sex Transm Infect 2009; 85: 15-18
12. Haggerty CL, Totten PA, Astete SG, Lee S, Hoferka SL, Kelsey FL, Ness RB. Failure of cefoxitin and doxycycline to
eradicate endometrial Mycoplasma genitalium and the consequence for clinical cure of pelvic inflammatory disease. Sex
Transm Infect 2008; 84: 338-342
13. Falk L, Fredlund H, Jensen JS. Signs and symptoms of urethritis and cervicitis among women with or without Mycoplasma
genitalium or Chlamydia trachomatis infection. Sex Transm Infect 2005; 81: 73-78
14. Ripa T, Nilsson PA. A Chlamydia trachomatis strain with a 377-bp deletion in the cryptic plasmid causing false-negative
nucleic acid amplification tests. Sex Transm Dis 2007:34:255-56.
15. Jensen J S, Björnelius E, Dohn B, Lidbrink P. Use of TaqMan 5’ Nuclease Real-Time PCR for quantitative detection of
Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a Sexually Transmitted Disease
clinic. J.Clin. Microbiol. 2004 42: 683 – 692.
Köparen av den här produkten får använda den för human in vitro-diagnos. Inget patent eller annan licens än rätten att använda
produkten finns.
ProClin™ är ett registrerat varumärke som ägs av Rohm and Haas Co.
Andra varunamn som förekommer i det här dokumentet tillhör sina respektive ägare.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
www.bio-rad.com
09/2010
Kod: 881064
14