DX CT/NG/MG ASSAY 96 tester 37005 Direkt detektion av Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae och Mycoplasma genitalium med Real-Time PCR 1- AVSEDD ANVÄNDNING Dx CT/NG/MG Assay är ett testpaket för kvalitativ multiplex in vitro-amplifiering för direkt detektion av Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae och Mycoplasma genitalium i samma provrör med kliniska prover från individer med eller utan symptom. Dx CT/NG/MG Assay används för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover1 (män och kvinnor) tagna av kliniker, vaginalsvabbprover1 tagna av patient samt urinprover från män och kvinnor. 1 Tagna med Bio-Rad Dx Collection System-F50 (kat. #37007). 2. ÖVERSIKT AV TEST Chlamydia trachomatis är en obligat intracellulär parasitbakterie som orsakar den mest spridda sexuellt överförda infektionen i industriländerna. Ca 89 miljoner smittas varje år enligt WHO (1). Chlamydia trachomatis-infektioner ger oftast inga symptom hos varken män och kvinnor och har allvarliga följder om de inte behandlas, t.ex. inflammationssjukdomar i bäckenet (PID), utomkvedshavandeskap, tubarinfertilitet (2) hos kvinnor eller icke-gonokock uretrit och epididymit hos män (3). Tester med molekylär diagnostik är att föredra för detektion av Chlamydia trachomatis-infektioner, eftersom de har högre känslighet och är mer exakta i förhållande till andra metoder (4). Neisseria gonorrhoeae är en icke-motil gramnegativ diplokockbakterie som orsakar ca 62 miljoner nya falla av gonorré varje år (1). Följderna liknar dem som orsakas av Chlamydia trachomatis, men ofta är symptomen allvarligare. Cellodling, som vanligtvis används för detektion av N. gonorrhoeae, är i hög grad beroende av korrekt provhantering och bakteriens förmåga att leva i provet. Tester med molekylär diagnostik i kombination med vanliga metoder för detektion av N. gonorrhoeae är att föredra. Mycoplasma genitalium är en liten bakterie som vanligen orsakar uretrit hos män och infektioner i de nedre genitalierna hos kvinnor. Symptom och mikroskopiska tecken liknar dem vid Chlamydia trachomatis. M. genitalium-infektioner antas även orsaka tubarinfertilitet hos kvinnor (5-13). Tester med molekylär diagnostik är en metod som med fördel används för detektion av Mycoplasma genitalium, eftersom den är extremt svår att odla. 3. TESTPRINCIPER Dx CT/NG/MG Assay innehåller två huvudsteg: provberedning och amplifiering/detektion av mål-DNA med PCR i realtid. Amplifieringssprodukterna detekteras med fluorescerande färger under PCR. För varje prov extraheras, amplifieras och detekteras en intern kontroll systematiskt på samma sätt som mål-DNA, vilket ger kontroll av extraktionen och detektion av PCR-inhibition. Paketet innehåller alla reagenser som behövs för provberedning och amplifiering/detektion och räcker till 96 tester. Provberedning DNA extraheras från alla provtyper som anges i kapitlet "Provtagning och hantering av prov", med hjälp av lyseringsbufferten (L1) i paketet (Bio-Rad Chelex-metod). En negativ konroll utförs under hela provberedningen samtidigt med proverna. Den interna kontrollen (C1) tillsätts i varje prov och i den negativa kontrollen i början när provet förbereds. PCR-amplifiering/-detektion i realtid Vid realtids-PCR används fluorescerande oligonukleotida prober för att detektera DNA under amplifieringen genom att hybridisera amplifieringsprodukterna. I Dx CT/NG/MG Assay används fyra olika oligonukleotida prober: • C. trachomatis-probe, söker en krypten-plasmidsekvens; målsekvensen finns utanför området som tagits bort i den nya stammen i C. trachomatis (nvCT) som nyligen karakteriserats (14). • N. gonorrhoeae-probe, söker en sekvens i pilE-genen; den här målsekvensen delas av en del N. meningitidis-stammar och kan i sällsynta fall ge felaktigt positiva NG-resultat. Detta är inget problem då N. meningitidis kan behandlas med samma medicin som N. gonorrhoeae. • M. genitalium-probe, söker en sekvens i MgPa-genen. • Detektionsprobe med intern kontroll Om inget mål-DNA finns för en viss oligonukleotidprobe, avges inget ljus och ingen signal detekteras. När det finns mål-DNA ökar ljuset vid varje amplifiering. Under varje PCR-cykel, i hybridiseringssteget, mäter Dx Real-Time Systemets optiska modul ljuset från varje fluorofor och Dx Real-Time Software jämför ljusintensiteten i flera cykler. Till sist analyserar Dx Real-Time Software automatiskt resultaten av alla prover och kontroller. 1 4. INNEHÅLL I DX CT/NG/MG ASSAY 4.1. Beskrivning Reagenserna och förbrukningsvarorna i paketet räcker till 96 tester. Alla reagenser är enbart avsedda för in vitro-diagnostiskt bruk. Märkning Reagenser Produktform Lysis Buffer Lyseringsbuffert: Chelex-harts i en lyseringsbuffert. Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300. Varje flaska innehåller en magnetisk omrörare. 2 x 21 ml färdig att använda R1 Amplification Mix Koncentrerad amplifieringssblandning, 10X: DNA-polymeras i en PCR-buffert som innehåller primer, fluorescerande oligonukleotida prober, dNTP, UDG och MgCl. 2 Konserveringsmedel: 0.05 % natriumazid. 2 x 150 µl Späds ut med R2 R2 Amplification Mix Diluent Utspädningsmedel för amplifieringsblandning: PCR-buffert med MgCl. 2 Konserveringsmedel: 0.05 % natriumazid. 2 x 900 µl färdig att använda C1 Internal Control Intern kontroll: Icke-infektiöst DNA i en buffertlösning. Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300. 2 x 1050 µl färdig att använda C3 Positive Control Positiv kontroll av CT, NG, MG: Icke-infektiöstDNA från CT, NG och MG i en buffertlösning. Gul färg. Konserveringsmedel: 0.03 % ProClin™ 300. 1 x 600 µl färdig att använda L1 Dx 24-Well PCR Strips Dx 8-Cap Strips Värmeplattor: Vita mikroplattor med 24 brunnar med streckkod för entydig identifiering. 4 Lock: 8 lock för värmeplattor. 12 OBS! negativ kontroll: den negativa kontrollen är en alikvot av L1 Lysis Buffer. Ett tomt 2 ml mikrorör med skruvkork märks "Negativ kontroll" och bearbetas från steg 5 av DNA-extraheringen (se kap. 8.1)…… 4.2. Förvaring och hantering Paketet måste förvaras vid en temperatur på 2-8 °C. Då kan reagenserna i Dx CT/NG/MG Assay användas till bäst föredatumet på etiketten. ID L1 C1 C3 R1+R2 (rekonstituerad blandning) Förvaring efter öppning 6 månader i 2-8 C. Kassera reagensen om den kontaminerats. 2-8 °C till bäst före-datumet. Kassera reagensen om den kontaminerats. 4 timmar i 18-30 °C eller 16 timmar i 2-8 °C eller 2 veckor i - 20 °C. Fryst blandning kan bara tinas en gång. 2 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Endast för in vitro-diagnostiskt bruk. 5.1.Hälso- och säkerhetsinformation • Använd engångshandskar, laboratorierock och skyddsglasögon när du hanterar reagenser och prover. • Tvätta händerna noga när du hanterat reagenser och prover. Det är inte tillåtet att äta, dricka eller röka i arbetsområdet. • Hantera alla prover som om de kan smitta enligt rutiner för god laboratoriesed. • Hantering och kassering av kemiska produkter ska genomföras enligt rutiner för god laboratoriesed. • Ett säkerhetsdatablad kan fås av din lokala Bio-Rad-försäljare. 5.2.Försiktighetsåtgärder i samband med bearbetningen • Det här paketet får endast användas tillsammans med Dx Real-Time System (Bio-Rad) och Dx Real-Time Software. • Använd endast Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover tagna av kliniker samt vaginalsvabbprover tagna av patient. Systemet får inte användas hemma. • Använd rena behållare av polypropylen utan konserveringsmedel för urinprover. • Använd inte Dx Collection System-F50 om förpackningen är skadad eller om det läckt från röret. Kassera oanvända eller läckande system enligt rutiner för god laboratoriesed. • Om laboratoriet tar emot ett svabbprov som inte tagits och transporterats med Dx Collection System-F50 eller ett provrör som inte innehåller något eller två svabbprover får inte provet användas. Använd inte utgångna reagenser. • Blanda inte reagenser från paket med olika partinummer. • Ändra inte analysförfarandet. • Undvik kontaminering när proverna hanteras: Se till att provbehållarna inte kommer i kontakt med varandra; om handskarna kommer i kontakt med prover ska de genast slängas. • Använd en ny filterspets för varje prov. • Använd DNase- och RNase-fria mikrorör och filterspetsar. • Rekonstituera noggrant amplifieringsblandningen och undvik all kontaminering. • Kontrollera noggrannheten för pipetterna och annan utrustning och att de fungerar korrekt. • Undvik att spilla prover eller lösningar som innehåller prover. Spill måste sköljas med blekmedel som spätts till 10 %. Materialet som används för rengöring måste kastas i en behållare för smittfarligt avfall. • Arbetsytor, pipetter och annan utrustning måste dekontamineras regelbundet med blekmedel som spätts till 1 %. • Arbetsområden: Det måste finnas två områden som används i en riktning för provberedning och amplifiering/detektion i laboratoriet: 1. Provberedningsområdet används för: (a) beredning av prover och kontroller och (b) PCR-setup (pipettering av amplifieringsblandning, kontroller och prover i Dx 24-Well PCR Strips). De här två stegen måste utföras i två separata zoner av provberedningsområdet. 2. Amplifieringsområdet används för PCR-reaktion i realtid. Alla reagenser, all utrustning och alla laboratorierockar som används i ett området får inte lämna detta området. För aldrig in amplifieringsprodukter eller amplifieringsutrustning i provberedningsområdet. 6. PROVTAGNING OCH HANTERING AV PROVER 6.1. Svabbprover tagna med Bio-Rad Dx Collection System-F50 Dx CT/NG/MG Assay används för endocervikal- vaginal- och analsvabbprover (män och kvinnor) tagna av kliniker, vaginalsvabbprover tagna av patient. Proverna får endast tas och transporteras med Dx Collection System-F50. Se bipacksedeln till Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) för mer information om provtagning och -transport. Ett transportrör som innehåller en pinne som inte kommer från Bio-Rad, flera pinnar eller ingen pinne kan inte användas med Dx CT/NG/MG Assay. Blod, sperma och vaginalbehandlingar kan påverka PCR-reaktionen. För mer information om störande substanser, se kapitlet "Testresultat". Svabbprover kan sparas i 28 dagar vid en temperatur på 18-30 °C eller 4 °C. 3 6.2. Urinprover Dx CT/NG/MG Assay kan användas för urinprover från män och kvinnor med eller utan symptom. OBS! Patienten får inte ha urinerat minst en timme innan provet tas. 1. Samla 10-20 ml av den första urinen i en ren behållare av polypropylen som inte innehåller konserveringsmedel. 2. Stäng behållaren och märk den med patientuppgifterna och datum/tid. 3. Transportera proverna till testplatsen i rumstemperatur (18-30 °C). Urinprover är stabila i 24 timmar vid rumstemperatur. Om provet inte kan analyseras inom 24 timmar ska det förvaras vid en temperatur på 2-8 °C och analyseras inom 7 dagar. 4. Urinprover som analyseras på externa testplatser måste transporteras dit inom 24 timmar. Om proverna ska transporteras i rumstemperatur ska de förvaras vid en temperatur på 2-8 °C innan de transporteras och när de kommer fram. De får inte förvaras i rumstemperatur längre än sammanlagt 24 timmar. 7. NÖDVÄNDIGT MATERIAL 7.1.Material som ingår • Dx CT/NG/MG Assay (Bio-Rad, kat. # 37005) 7.2.Material som säljs separat • Dx Real-Time System, Dx Real-Time Software, PC och tillbehör (Bio-Rad, kat.# 94000) • Dx Strip Cap Tool (ingår i paketet med Dx Real-Time System, Bio-Rad kat.#94000) • Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) för tagning och transport av svabbprover från kvinnor och anala svabbprover 7.3. Nödvändigt material som inte medföljer • Rena behållare av polypropylen utan konserveringsmedel för urin • Bänkcentrifug för PCR-värmeplattor • Bänkcentrifug för 1.5 ml och 2 ml mikrorör • Värmeblock som kan bli 105 °C varmt • Vortexblandare • Magnetomrörare • Kalibrerade pipetter för 10-1000 µl • Sterila pipettspetsar med filter • Doseringspipett med sterila, separat förpackade 1.25 ml-spetsar • 2 ml mikrorör med hermetisk skruvlock och rund botten (Simport kat.# T335-6S eller liknande) • Engångshandskar utan puder 8. ANVÄNDNING Följ dessa instruktioner noggrant och tillämpa rutiner för god laboratoriesed. 8.1. DNA-extraktion 1. Fastställ antalet prover som ska testas och använd ett mikrorör med skruvlock per prov plus ett till för den negativa kontrollen. Märk varje mikrorör. 2. Tillsätt 1 ml av varje prov (transportmedium eller urin) i mikroröret. Låt ett mikrorör vara tomt för den negativa kontrollen. 3. Centrifugera i 10 minuter vid 5000 g och kassera supernatanten genom att vända mikrorören upp och ned. 4. Skaka flaskan med lyseringsbuffert (L1) och placera den på magnetomröraren så att Chelex-hartset är suspenserat. 5. Tillsätt 400 µl lyseringsbuffert (L1) i varje mikrorör, även röret för den negativa kontrollen. 6. Tillsätt 10 µl intern kontroll (C1) i varje mikrorör. Skruva fast locken ordentligt. OBS! Det går även att blanda "L1+C1" i förväg och sedan tillsätta 410 µl av blandningen i varje mikrorör. Röret med blandningen måste vortexblandas före varje pipettering för att Chelex-hartset ska suspenseras. Blandningen är stabil i 5 dagar vid 2-8 °C. Exempel på blandning: 12 tester 24 tester L1 5 ml 10 ml C1 125 µl 250 µl 48 tester Tillsätt 525 µl C1 direkt i 1 flaska med L1 4 7. Vortexblanda i 15-20 sekunder. 8. Inkubera i 10 minuter ± 2 minuter vid 105 °C. 9. Låt svalna i 2 minuter i rumstemperatur (18-30 °C). 10. Centrifugera i 2 minuter vid 4000 g. Supernatanten innehåller extraherad DNA. Extraherad DNA kan förvaras i rumstemperatur i 2 timmar. Om amplifiering/detektion inte utförs inom 2 timmar kan extraherad DNA förvaras i 2-8 °C i upp till 4 dagar; för längre tids förvaring ska den förvaras i -20 °C i upp till 6 månader. 8.2. Rekonstituering av amplifieringsblandning Före rekonstitueringen ska vialerna R1 (koncentrerad amplifeieringsblandning, 10X) och R2 (utspädningsmedel för amplifieringsblandning) vortexblandas i 5 sekunder och sedan centrifugeras i 15 sekunder. Tillsätt exakt 850 µl utspädningsmedel för amplifieringsblandning (R2) i en vial med koncentrerad amplifieringsblandning (R1). Vortexblanda i 10 sekunder och centrifugera sedan kort. En vial med rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2) räcker till 48 PCR-reaktioner i realtid. Förbered så många vialer med rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2) som behövs (t.ex. 2 vialer om 96 tester ska bearbetas). Den rekonstituerade amplifieringsblandningen (R1+R2) kan användas genast eller delas upp i alikvoter och frysas i högst 2 veckor i -20 °C. 8.3. PCR-amplifiering/detektion i realtid Se bruksanvisningen till Dx Real-Time System för mer information. Varje analysomgång måste omfatta en negativ och en positiv kontroll. I provberedningsområdet: 1. Rekonstituera så många vialer med amplifieringsblandning som behövs enligt beskrivningen i kapitel 8-2 (testantal = n prover + 1 positiv kontroll + 1 negativ kontroll). 2. Placera så många Dx 24-Well PCR Strips på en hållare och fördela 20 µl rekonstituerad amplifieringsblandning (R1+R2) noggrant i varje brunn med doseringspipetten. 3. Tillsätt 5 µl extraherad DNA eller extraherad negativ kontroll eller icke-extraherad positiv kontroll (C3) i brunnarna, följ plattkartan. 4. Placera Dx 8-Cap Strips på Dx 24-Well PCR Strips. Fäst dem ordentligt med Dx Strip Cap Tool (medföljer Dx Real-Time System) så att proverna inte avdunstar under PCR-reaktionen. 5. Centrifugera Dx 24-Well PCR Strips i 30 sekunder vid 400 g så att alla bubblor försvinner i brunnarna. I amplifieringsområdet: 6. Sätt på datorn och sedan Dx Real-Time System. Öppna Dx Real-Time Software och välj "Dx CT/NG/MG" i fönstret "PCR kit". OBS! Använd "CT_NG_MG" som analysnamn när testbeställningar ska importeras till Dx Real-Time Software (valfritt). Se bruksanvisningen till Dx Real-Time Software för mer information. 7. Följ instruktionerna i Dx Real-Time Software för att skapa en plattkarta. 8. Placera Dx 24-Well PCR Strips i Dx Real-Time System enligt anvisningarna i Dx Real-Time Software, och utför PCRreaktionen. 9. När PCR-reaktionen är klar ska Dx 24-Well PCR Strips tas ut ur Dx Real-Time System, placeras i en förslutningsbar plastpåse och kasseras enligt rutiner för god laboratoriesed. 9. KALIBRERING Under varje PCR-cykel, i hybridiseringssteget, mäter Dx Real-Time Systemets optiska modul ljuset från varje fluorofor och Dx Real-Time Software jämför ljusintensiteten i flera cykler. Till sist analyserar programmet automatiskt resultaten av alla prover och kontroller. Dx Real-Time Software använder en matematisk algoritm för att fastställa värden av matematiska parametrar (bl.a. Ceep och F0) för varje PCR-kurva. Dessa visas i kalkylbladet med resultat. Beräkningen av de här parametrarna baseras på antagandet att PCR-reaktionens effektivitetskvot är som störst i början av reaktionen och minskar efter ett antal cykler, som varierar från ett prov till ett annat. Ceep-värdet (Ceep = cykel i slutet av exponeringsfasen) motsvarar cykeln då PCR börjar bli mindre effektiv. Ceep-värdet ligger normalt nära cykeln då fluorescenssignalen börjar stiga över bakgrunden. Under idealiska PCR-förhållanden (inga reaktionshämmare, hög effektivitet) har Ceep-värdet samband med kopieantalet för målsekvensen i provet före förstärkningen: Ju högre Ceep-värdet är desto lägre är det ursprungliga kopieantalet. F0-värdet motsvarar den (ej mätbara) målspecifika fluorescenssignalen före amplifieringen. F0-värdet står i proportion till kopieantalet för målsekvensen i provet före amplifieringen. Eftersom det uppskattade F10-värdet vanligtvis är <1 visar Dx RealTime Software värdet -log10 (F0). Ju högre -log10 (F0)-värdet är desto lägre är det ursprungliga kopieantalet. I Dx CT/NG/MG Assay baseras analysen av resultaten på Ceep-värden. 5 10. KVALITETSKONTROLL Positiva och negativa kontroller En negativ och en positiv kontroll måste finnas med i varje analysomgång för att eventuella fel i provbearbetningen, förstärkningen eller detektionen ska kunna upptäckas. Om Ceep-värdena för kontrollerna ligger utanför de förväntade värdena, ogiltigförklarar Dx Real-Time Software hela analysen och visar en av följande flaggor: * Negativ kontroll: Flagga Invalid_IC: CT_conta: NG_conta: MG_conta: CTNG_conta: CTMG_conta: NGMG_conta: CTNGMG_conta: Innebörd Ogiltig intern kontroll Kontaminering av CT DNA Kontaminering av NG DNA Kontaminering av MG DNA Kontaminering av CT och NG DNA Kontaminering av CT och MG DNA Kontaminering av NG och MG DNA Kontaminering av CT, NG och MG DNA * Positiv kontroll: Flagga CT_out: NG_out: MG_out: CTNG_out: CTMG_out: NGMG_out: CTNGMG_out: Innebörd CT-värde ej inom tillåtet intervall NG-värde ej inom tillåtet intervall MG-värde ej inom tillåtet intervall CT och NG-värde ej inom tillåtet intervall CT och MG-värde ej inom tillåtet intervall NG och MG-värde ej inom tillåtet intervall CT, NG och MG-värde ej inom tillåtet intervall Alla prover och kontroller i analysen måste köras om från DNA-extraheringen. Upptäckt av hämmare: Intern kontroll Den interna kontrollen läggs till varje prov och den negativa kontrollen i början av DNA-extraheringen och detekteras med en undersökningen under PCR-reaktionen. Prover vars interna kontrolls Ceep-värde ligger över det förväntade värdet (kan då vara hämmat) tolkas av Dx Real-Time Software enligt följande: • Prover med Ceep-värde 48 för ett mål (CT, NG eller MG) rapporteras som "positive" för målet. • Prover med inget Ceep-värde eller Ceep-värde > 48 för ett mål rapporteras som "invalid" för målet. Alla prover som har ett ogiltigt resultat för målet måste köras om från DNA-extraheringen. 11. UTVÄRDERING AV RESULTATEN 11.1. Testvalideringskriterier Analysen är giltig när: • Den positiva kontrollens Ceep-värde ligger inom det förväntade intervallet för de tre målen CT, NG och MG. • Den negativa kontrollen inte har något Ceep-värde eller ett Ceep-värde > 48 för de tre målen CT, NG och MG. Om analysen är giltig, anger Dx Real-Time Software bearbetningsstatusen som "Passed". Annars anger Dx Real-Time Software bearbetningsstatusen som "Failed". Om bearbetningsstatusen är "Failed" anges alla testresultat i bearbetningen som "Invalid" och alla prover och kontroller måste köras om från DNA-extraheringen. 11.2. Beräkning/utvärdering av resultat Dx Real-Time Software beräknar resultaten och Ceep-värdena för CT, NG och MG och för den interna kontrollen i prover och kontroller beräknas automatiskt. Om testet är godkänt anges prover (hämmade eller inte) med ett Ceep-värde 48 för ett mål (CT, NG eller MG) som "positive" av Dx Real-Time Software. Om till exempel ett prov är positivt för CT är den rapporterade statusen "CT_POS". Om testet är godkänt anges prover som inte är hämmade med inget eller ett Ceep-värde > 48 för ett mål (CT, NG eller MG) som "negative" av Dx Real-Time Software. Om till exempel ett prov är negativt för CT är den rapporterade statusen "CT_neg". Om testet är godkänt tolkas prover som är hämmade med inget eller ett Ceep-värde > 48 för ett mål (CT, NG eller MG) som "invalid" av Dx Real-Time Software, som sedan rapporterar statusen "Failed" med flaggan "Invalid_IC". Provet måste analyseras om från DNA-extraheringen. 6 OBS! Om ett hämmat prov är ett urinprov bör det frysas över natten i -20 °C innan det bearbetas igen eftersom eventuella hämmare då försvinner. Om provet fortfarande är hämmat ska ett nytt prov tas och testas. 12. TESTBEGRÄNSNINGAR • Hur bra testet lyckas beror på kvaliteten på proverna. Följ därför alla instruktioner i kapitlet "Provtagning och hantering av prov". • Analysera endast angivna provtyper. Andra typer av prover är inte godkända. • Blod, slem, sperma och vaginalbehandlingar kan påverka PCR-reaktionen. För mer information om störande substanser, se kapitlet "Testresultat". • Inverkan av andra faktorer som flytningar, användning av tamponger, vaginaldusch har inte fastställts. • Endast personal om utbildats för Dx CT/NG/MG Assay, Dx Real-Time System och Dx Real-Time Software får använda analysen. • Ett negativt resultat utesluter inte en eventuell infektion eftersom resultaten beror på flera variabler. Felaktig provtagning och provhantering, hämmare eller tekniska fel kan ge missvisande resultat. • Vaginal-, anal- eller urinprover ersätter inte cervikala undersökningar och endocervikalprover för att diagnostisera urogenitala infektioner hos kvinnor. Patienterna kan ha cervitit, uretrit, infektioner i urinvägarna eller vaginan av andra orsaker eller andra infektioner med andra patogener. • The Dx CT/NG/MG Assay är inte avsedd för bedömning av misstänkt sexuellt utnyttjande eller andra rättsmedicinska indikationer. • Om en behandling varit framgångsrik eller inte kan inte avgöras med Dx CT/NG/MG Assay eftersom patogen-DNA kan finnas även efter en antimikrobiell behandling. • Precis som vid andra diagnostiska tester ska resultaten av Dx CT/NG/MG Assay tolkas tillsammans med andra laboratoriska och kliniska fynd. 13. FÖRVÄNTADE RESULTAT Prevalens Förekomsten av positiva prover för C. trachomatis, N. gonorrhoeae och M. genitalium hos de som undersökts beror på klinisk bild, ålder, riskfaktorer, kön och testmetod. Förekomsten som observerats med Dx CT/NG/MG Assay i kliniska studier på de två olika platserna visas nedan: Plats Kön Antal patienter Inga symptom Med symptom ♂ ♂ 177 150 14 24 7.9% 16.0% 10 24 Inga symptom Med symptom ♀ ♀ 539 89 37 3 6.9% 3.0% 0 0 Inga symptom Med symptom ♂ ♂ 236 24 18 2 7.6% 8.3% 2 4 Inga symptom Med symptom ♀ ♂ 166 27 17 4 10.3% 15.4% 1 2 Befolkning Positiv förC. trachomatis Positiv förN. gonorrhoeae 1 1 2 2 Positiv för M. genitalium Inga symptom Med symptom Inga symptom Med symptom Inga symptom Med t Inga symptom Med t ♂ ♂ ♀ ♀ ♂ ♂ ♀ ♂ 7 Totalt för båda platser: Befolkning Kön Antal patienter Positiv förC. trachomatis Positiv förN. gonorrhoeae Inga symptom Med symptom ♂ ♂ 413 174 32 26 7.7% 14.9% 12 28 Inga symptom Med symptom ♀ ♂ 705 116 54 7 7.7% 6.0% 1 2 Inga symptom Med Inga symptom Med Positiv förM. genitalium ♂ ♂ 413 174 ♀ ♂ 705 116 14. PRODUKTEGENSKAPER 14.1. Analytiska egenskaper Analytisk känslighet/detektionsgräns Detektionsgränsen hos Dx CT/NG/MG Assay har fastställts för varje mål med: - för C. trachomatis: den internationella panelen QCMD06 CTDNA06B i urin och i transportmedium - för N. gonorrhoeae: den internationella panelen QCMD06 NgDNA06 i urin - för M. genitalium: ATCC-stammen 33530D vid en koncentration av 1 ng DNA/µL i urin En utspädningsserie bereddes för varje analyt och testades 24 till 36 gånger. Detektionsgränsen fastställdes med Probit-analys med en utspädning på en positiv nivå på 95 % eller mer: - Detektionsgränsen för C.trachomatis uppskattas ligga på: • 73 kopior av DNA/ml i transportmedium, med ett konfidensintervall på 95 % av 45 till 182 kopior av DNA/ml • 158 kopior av DNA/ml i urin, med ett konfidensintervall på 95 % av 106 till 315 kopior av DNA/ml - Detektionsgränsen för N. gonorrhoeae uppskattades vid 1559 CFU/ml i urin, med ett konfidensintervall på 95 % av 1066 till 3283 kopior av CFU/ml - Detektionsgränsen för M. genitalium uppskattades vid 450 motsvarighetsgenom/ml i urin, med ett konfidensintervall på 95 % av 250 till 1246 kopior av CFU/ml Detektionsgränserna har fastställts genom testning av 16 serologiska varianter av stammarna för C. trachomatis (A, B, Ba, C, D, E, F, G, H, I, J, K, LGV1, LGV2, LGV3, nv CT) och 19 N. gonorrhoeae isolerade från patienterna. Analytisk specifitet (korsreaktivitet) Den analytiska specifiteten hos Dx CT/NG/MG Assay har utvärderats med hjälp av 112 bakterie-, virus-, jäst- och mögelstammar. Den här panelen omfattar stammar som kan isoleras i urogenitaldelarna och stammar som representerar fylogenetiskt tvärsnitt med Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae eller Mycoplasma genitalium: Achromobacter xerosis Acinetobacter calcoaceticus Acinetobacter lwoffii Actinomyces isrealii Aerococcus viridans Agrobacterium radiobacter Alcaligenes faecalis Bacillus subtilis Bacteriodes fragilis Bacteroides ureolyticus Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium breve Brevibacterium linens Campylobacter jejuni Candida albicans Candida glabrata Candida tropicalis Chlamydia pneumoniae Chlamydia psittaci Chromobacterium violaceum Citrobacter freundii Clostridium perfringes Corynebacterium genitalium Corynebacterium xerosis Cryptococcus neoformans Haemophilus influenzae Hepatitis B virus (HBV) Herpes simplex virus 1 Herpes simplex virus 2 Human Immunodeficiency Virus (HIV) Human Papilloma Virus HPV 16 Human Papilloma Virus HPV 18 Kingella dentrificans Kingella kingae Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Lactobacillus acidophilus Lactobacillus brevis Lactobacillus jensenii Lactobacillus vaginalis Legionella pneumophila Leuconostoc mensenteroides Micrococcus luteus Moraxella (Branhamella) catarrhalis Moraxella lacunata Moraxella osloensis Morganella morganii Mycobacterium gordonae Mycobacterium smegmatis Mycoplasma fermentans Neisseria perflava Neisseria polysaccharea Neisseria sicca Neisseria subflava flava Neisseria subflava perflava Paracoccus denetrificans Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Propionibacterium acnes Proteus mirabilis Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Rahnella aquatilis Rhodospirillum rubrum Salmonella minnesota Salmonella typhimurium Serracia marscence Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus Streptococcus agalactiae Streptococcus bovis Streptococcus griseinus Streptococcus mitis 8 Cytomegalovirus Derxia gummosa Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter cloacae Enterococcus avium Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli Flavobacterium meningosepticum Fusobacterium nucleatum Gardnerella vaginalis Gemella haemolysans Mycoplasma hominis Mycoplasma orale Mycoplasma penetrans Mycoplasma pneumoniae Neisseria cinerea Neisseria elongata Neisseria flavescens Neisseria lactamina Neisseria meningitidis 135 Neisseria meningitidis serogroupe A Neisseria meningitidis serogroupe B Neisseria meningitidis serogroupe C Neisseria mucosa Streptococcus mutans Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Streptococcus salivarus Streptococcus sanguis Treponema pallidium Trichomonas vaginalis Ureaplasma urealyticum Veillonella parvula Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Alla stammar förutom 22 odlades, kalibrerades vid 108 CFU/ml i transportmedium, extraherades och testades med Dx CT/NG/MG Assay. För 22 stammar som inte odlades testades vanligt DNA vid 40 µg/ml till 200 µg/ml direkt med Dx CT/NG/MG Assay. En stam, Neisseria meningitidis serogroup B, gav positivt resultat med målet Neisseria gonorrhoeae. Den här korsaktiviteten har även observerats vid kliniska utvärderingar. Interferenser Möjliga interferenser på Dx CT/NG/MG Assay har utvärderats med endogena eller exogena substanser som kan finnas i svabboch/eller urinprover. Fjorton substanser späddes ut till olika koncentrationer och tillsattes svabblösning i transportmedium eller urinprov med de 3 målen CT, NG och MG med en koncentration av ca 3 gånger detektionsgränsen samt en svabblösning i transportmedium eller urinprov som inte innehöll något av de 3 målen. Varje förhållande testades 10 replikat. Följande substanser testades: Eventuellt störande substans Koncentration Matris Bilirubin 1 mg/ml Urin Blod 5 % v/v Urin 5 % v/v Pinne 1 mg/ml Urin Glukos pH 4 Urin pH 9 Urin Protein (humant serum albumin) 5% Urin Delfen (kontraceptivt skum) 5% Pinne Betadine 5% Pinne Miconazole (bakterie- och svampdödande medel) 5% Pinne Isoconazole (bakterie- och svampdödande medel) 5% Pinne Trophicrem (vaginalkräm) 5% Pinne Acyclovir (antiherpesmedel) 5% Pinne Lubricant KY Gel (glidmedel) 5% Pinne Progesterone 5% Pinne Substanserna ovan påverkade inte Dx CT/NG/MG Assay, förutom: - Delfen 5%: hämmande effekt på detektionen av Neisseria gonorrohoeae och Mycoplasma genitalium. - Blod vid 5%: hämmande effekt på detektionen av Neisseria gonorrohoeae. Jämförande studie mellan olika multiplex-analyter Validering av förekomsten av de 3 mikroorganismerna i samma prov ger ingen konkurrerande effekt mellan målen som skulle kunna leda till en detektionsdefekt i någon av dem. Urin- och transportmedieprover spetsades med låga och höga koncentrationer av varje mikroorganism för att förbereda alla kombinationer (1 låg/2 höga eller 2 låga/1 hög). Proverna testades med Dx CT/NG/MG Assay parallellt med prover spetsade med en låg koncentration av endast en av varje mikroorganism för att spåra eventuell inverkan på målen. Andelen positiva svar analyserades med tester i tre replikat under tre dagar. Oberoende av den undersökta mikroorganismen hade ingen av de tre kombinationerna någon inverkan på det förväntade resultatet. Det finns därför ingen konkurrens mellan målen och förekomsten av en av mikroorganismerna i hög koncentration ger ingen detektionsdefekt i någon av de andra två. Hög koncentration av de tre mikroorganismerna i samma prov hämmar dock den interna kontrollen. 9 Precisionsstudie En studie har gjorts för att fastställa precisionen hos analysen, från dag till dag, från instrument till och instrument och sats till sats. Tre urinprover (U2, U3, U4) och tre transportmedieprover (S2, S3, S4) spetsades med låg, medelhög och hög koncentration av C. trachomatis, N. gonorrohoeae eller M. genitalium. I enlighet med CLSIs instruktioner EP5A2, testades panelen i tre replikat per dag i 21 dagar på två olika Dx Real-Time Systeminstrument och med två olika satser av Dx CT/NG/MG Assay. Analysen av positiva prover gjordes med Ceep-värden. Funktionen Nested ANOVA användes för att mäta varianskomponenterna för varje villkor (sats - instrument - dag - replikat). Alla tester gav det förväntade resultatet. Resultat: Chlamydia trachomatis CT Inom analys Dag till dag Mellan instrument Mellan satser Total precision N Medel Standardavvikelse CV % Standardavvikelse CV % Standardavvikelse CV % Standardavvikelse CV % Standardavvikelse PANEL U2 (låg) 250 31,0 1,542 5,0% 0,674 2,2% 0* NA 1,151 3,7% 2,038 6,6% U3 (medel) 252 28,6 0,370 1,3% 1,246 4,4% 0* NA 0,872 3,0% 1,565 5,5% U4 (hög) 251 22,0 0,197 0,9% 0,888 4,0% 0* NA 0,076 0,3% 0,913 4,2% S2 (låg) 252 33,3 0,405 1,2% 0,484 1,5% 0* NA 0,354 1,1% 0,723 2,2% S3 (medel) 251 30,9 0,196 0,6% 0,582 1,9% 0* NA 0,246 0,8% 0,661 2,1% S4 (hög) 252 26,9 0,166 0,6% 0,176 0,7% 0* NA 0,177 0,7% 0,300 1,1% PANEL * Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0. Neisseria gonorrhoeae NG Inom analys Dag till dag Mellan instrument CV % PANEL N Medel Standardavvikelse Total precision N Medel U2 (låg) 243 31,1 1,487 4,8% 1,095 3,5% 0* NA 1,076 3,5% 2,137 6,9% U3 (medel) U4 (hög) 209 28,3 1,466 5,2% 0,866 3,1% 0* NA 0,148 0,5% 1,710 6,0% 242 20,2 0,693 3,4% 1,127 5,6% 0,25 1,2% 1,062 5,3% 1,715 8,5% S2 (låg) 252 33,1 0,221 0,7% 0,233 0,7% 0,133 0,4% 0* NA 0,348 1,1% S3 (medel) S4 (hög) 251 30,7 0,346 1,1% 0,429 1,4% 0,089 0,3% 0* NA 0,558 1,8% 252 27,1 0,382 1,4% 0,708 2,6% 0* NA 0* NA 0,805 3,0% PANEL Standardavvikelse Mellan satser Standardavvikelse CV % Standardavvikelse PANEL * Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0. Mycoplasma genitalium MG Inom analys Dag till dag Mellan instrument CV % Standardavvikelse PANEL N Mellan satser Medel Standardavvikelse Total precision PANEL N Medel Standardavvikelse CV % Standardavvikelse PANEL U2 (låg) 252 32,6 0,322 1,0% 0,344 1,1% 0* NA 0,257 0,8% 0,537 1,6% U3 (medel) 252 29,1 0,414 1,4% 1,216 4,2% 0* NA 0,220 0,8% 1,303 4,5% U4 (hög) 251 22,8 0,408 1,8% 0,851 3,7% 0* NA 0* NA 0,943 4,1% S2 (låg) 252 35,9 0,481 1,3% 0,630 1,8% 0* NA 0,427 1,2% 0,901 2,5% S3 (medel) 251 33,2 0,439 1,3% 0,658 2,0% 0* NA 0,252 0,8% 0,831 2,5% S4 (hög) 252 27,5 0,389 1,4% 0,213 0,8% 0* NA 0,162 0,6% 0,472 1,7% * Avvikelsevärdet är negativt och beräknas till 0. 10 14.2. Kliniska egenskaper Kliniska egenskaper hos Dx CT/NG/MG Assay undersöktes i en studie på två kliniska platser i Frankrike. 1420 patienter med och utan symptom som på mottagningar för STI-prevention och på anonyma testmottagningar har använts i den här studien. 12 patienter uppfyllde inte kriterierna ovan och har inte tagits med. De 1408 övriga patienterna är med i studien (821 kvinnor och 587 män). Totalt 2361 prover analyserades: • 430 vaginalprover tagna av patienten • 407 endocervikalprover • 386 vaginalprover tagna av kliniker • 540 urinprover (första urinen) från kvinnor • 532 urinprover (första urinen) från män • 57 analprover • 9 urinrörsprover Prover: • • • • 381 vaginal-, endocervikal- och urinprover kom från samma patienter 26 vaginal- och endocervikalprover togs från samma patienter 151 kvinnor lämnade urinprov och självtagna vaginalprov 6 män lämnade urinprov och urinrörsprov. Alla prover togs med Dx Collection System-F50 (Bio-Rad, kat.# 37007) och Dx Collection System-M15 (Bio-Rad, kat.# 37006). 60 frysta prover (10 urinprover, 22 analprover, 16 vaginalprover, 1 endocervikalprov och 11 urinrörsprover) i 2SP-medium och som först varit positiva för en av de tre mikroorganismerna (20 per mikroorganism) testades med Dx CT/NG/MG Assay. Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet C. trachomatis fastställdes genom att två EU-registrerade PCR-realtidstester jämfördes. Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet N. gonorrhoeae fastställdes genom att ett EU-registrerat PCR-test eller en odling jämfördes. Egenskaperna hos Dx CT/NG/MG Assay för målet M. genitalium fastställdes genom att ett internt PCR-test eller en odling jämfördes med hjälp av TaqMan-metoden enligt Jensen (15). På en av platserna testades endast de prover med det interna PCR-testet som visade sig vara positiva med Dx CT/NG/MG Assay. Chlamydia trachomatis: 1341 prover från två platser analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och PCR 1-testet: Plats 1 + 2 PCR 1-test negativt PCR 1-test positivt Dx CT negativt Dx CT positivt Dx CT negativt Inv IC Totalt Prover 8 0 0 0 0 8 ♀ endocervikalprov 387 2 0 19 0 408 ♀ vaginalprov 174 0 1 20 1 195 ♀ urinprov 158 1 0 18 4 177 ♀ analprov 4 0 0 0 0 4 ♂ urinprov 450 3 0 41 13 492 ♂ analprov 34 0 1 13 0 48 ♂ urinrörsprov 8 0 0 1 0 9 1223 6 2 112 18 1341 Prover ♀ självtaget vaginalprov Totalt Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 1-test är 1223/1229 = 99.5 % CI 95 [98.9 % – 99.8 %]. Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 1-test är 112/114 = 98.3 % CI 95 [93.8 % – 99.8 %]. 11 På en av platserna analyserades 1014 prover med Dx CT/NG/MG Assay och ett andra PCR realtidstest: Plats 1 PCR 2-test negativt PCR 2-test positivt Prover Dx CT negativt Dx CT negativt ♀ självtaget vaginalprov Dx CT positivt Dx CT positivt Inv IC Totalt 199 2 2 20 1 224 5 0 0 1 0 6 ♀ vaginalprov 365 2 1 16 0 384 ♀ urinprov 345 0 2 10 2 359 ♂ urinprov 31 0 1 4 0 36 ♂ analprov 5 0 0 0 0 5 950 4 6* 51 3 1014 ♀ endocervikalprov Totalt * Två av de här proverna (1 ♀ vaginalt och 1 ♀ urin) är sant negativa, från patienter med negativa prover med Dx CT/NG/MG Assay och PCR 2-test. Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 2-test är 950/954 = 99.6 % CI 95 [98.9 % – 99.9 %]. Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR 2-test är 51/57 = 89.5 % CI 95 [78.51 % – 96.0 %]. När de avvikande proverna analyserats togs två prover bort från beräkningarna. De kommer från de två patienterna vars prover var negativa med Dx CT/NG/MG Assay och PCR 2-testet. Den relativa känsligheten efter det är 51/55 = 92.7 % CI 95 [82.4 % – 98.0 %]. Neisseria gonorrhoeae: 1012 prover analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och ett PCR-realtidstest; 251 andra prover analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och odling. Resultat: Jämförelse med ett PCR-realtidstest Plats 1 PCR NG-test negativt PCR NG-test positivt Prover Dx NG negativt Dx NG positivt Dx NG negativt Dx NG positivt 223 0 0 4 0 ♀ vaginalprov 380 ♀ urinprov Inv IC Totalt 0 1 224 0 0 0 4 1 0 0 0 381 356 0 0 0 2 358 ♀ analprov 1 0 0 0 0 1 ♂ urinprov 30 0 0 1 0 31 ♂ analprov 3 0 1 9 0 14 997 1 1 10 3 1012 ♀ självtaget vaginalprov ♀ endocervikalprov Totalt Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR-testet är 997/998 = 99.9 % CI 95 [99.4 % – 100 %]. Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på PCR-testet är 10/11 = 90.9 %. 12 Jämförelse med odlingen Plats 1 NG-kultur negativt NG-kultur positivt Dx NG negativt Dx NG positivt Dx NG negativt Dx NG positivt Inv IC Totalt 8 0 0 0 0 8 390 0 0 0 0 390 ♀ vaginalprov 6 0 0 0 0 6 ♀ urinprov 6 0 0 0 0 6 ♀ analprov 3 0 0 0 0 3 ♂ urinprov 227 1 0 18 5 251 ♂ analprov 35 1 0 10 0 46 ♂ urinrörsprov 0 0 0 2 0 2 675 2 0 30 5 712 Prover ♀ självtaget vaginalprov ♀ endocervikalprov Totalt Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på kulturen är 675/677 = 99.8 % CI 95 [98.9 % – 100 %]. Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på kulturen är 30/30 = 100 %. Mycoplasma genitalium: 656 prover från plats två analyserades med Dx CT/NG/MG Assay och ett internt MG PCR-test med TaqMan-metoden: Plats 2 PCR MG-test negativt PCR MG-test positivt Prover Dx MG negativt Dx MG positivt Dx MG negativt Dx MG positivt Inv IC Totalt ♀ urinprov 170 0 0 1 8 171 ♀ endocervikalprov 21 0 0 0 0 21 ♀ vaginalprov 181 1 0 4 3 186 ♂ urinprov 236 0 1 5 17 242 ♂ analprov 1 0 0 0 0 1 ♂ urinrörsprov 7 0 0 0 0 7 616 1 1 10 28 656 Totalt Den relativa specificiteten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på det interna TaqMan PCR-testet är 616/617 = 99.8 % CI 95 [99.1 % – 100 %]. Den relativa känsligheten hos Dx CT/NG/MG Assay med avseende på det interna TaqMan PCR-testet är 10/11 = 90.9 %. 25 prover från 20 patienter som testats positiva för M. genitalium med Dx CT/NG/MG Assay på plats 1 skickades till plats 2 för analys med det interna TaqMan MG PCR-testet. 22/25 prover testades positiva med Dx CT/NG/MG Assay på plats 2, de återstående 3 proverna låg nära detektionsgränsen. Av de 22 proverna var 2 negativa med det interna TaqMan MG PCR-testet. Överensstämmelsen mellan Dx CT/NG/MG Assay och det interna TaqMan PCR-testet är 20/22 = 90.9 % för proverna från plats 1. Men minst ett av de avvikande proverna är sant positivt eftersom det kommer från en patient vars alla prover var positiva för M. genitalium med Dx CT/NG/MG Assay. Den slutgiltiga överensstämmelsen mellan Dx CT/NG/MG Assay och det interna TaqMan PCR-testet, när resultaten från plats 1 och plats 2 adderats, är 626/629 = 99.5 %. Retrospektiv studie (plats 2) 60 frysta prover (10 urinprover, 22 analprover, 16 vaginalprover, 1 endocervikalprov och 11 urinrörsprover) som förvarats i -80 °C i 2SP-medium och som först varit positiva för en av de tre mikroorganismerna med vanligt test (20 per mikroorganism) testades retrospektivt med Dx CT/NG/MG Assay. 19/19 prover var överensstämmande positiva för C. trachomatis, det tjugonde hade en ogiltig internkontroll. 19/20 prover var överensstämmande positiva för N. gonorrhoeae, det tjugonde hade tidigare varit positivt i en en odling med endast en odling. 16/20 prover var överensstämmande positiva för M. genitalium; av de fyra avvikande (urin) var två negativa efter kontroll med normalt test. 13 15. REFERENSER 1. WHO. Global prevalence and incidence of selected curable sexually transmitted infections. Overview and estimates. Geneva: WHO; 2001. 2. Cates W Jr, Rolfs RT Jr, Aral SO. Sexually transmitted diseases, pelvic inflammatory disease, and infertility: an epidemiologic update. Epidemiol Rev 1990; 12: 199–220 3. Stamm WE. Chlamydia trachomatis infections of the adult. In: Holmes KK, Sparling P F, Mardh PA, eds. Sexually Transmitted Diseases, 3rd ed. New York: McGraw-Hill, 1999. 4. Centers for Disease Control and Prevention. Screening tests to detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. MMWR 2002; 51 (No. RR-15) : 1-27. 5. Taylor-Robinson D. Mycoplasma genitalium: an update. Int J STD AIDS 2002; 13: 145-151 6. Simms I, Eastick K, Mallinson et al. Associations between Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, and pelvic inflammatory disease. Sex Transm Infect 2003; 79: 154-156 7. Cohen CR, Manhart LE, Bukusi EA et al. Associations between Mycoplasma genitalium and acute endometritis. Lancet 2002; 359: 765-766 8. Clausen H F, Fedder J, Drasbek M et al. Serological investigation of Mycoplasma genitalium in infertile women. Human Reprod 2001; 16: 1866-1874 9. Falk L, Fredlund H, Jensen JS. Symptomatic urethritis is more prevalent in men infected with Mycoplasma genitalium than with Chlamydia trachomatis. Sex Transm Infect 2004; 80: 289-293 10. Moi H, Reinton N, Moghaddam A. Mycoplasma genitalium in women with lower genital tract inflammation. Sex Transm Infect 2009; 85: 10-14 11. Moi H, Reinton N, Moghaddam A. Mycoplasma genitalium is associated with symptomatic and asymptomatic nongonococcal urethritis in men. Sex Transm Infect 2009; 85: 15-18 12. Haggerty CL, Totten PA, Astete SG, Lee S, Hoferka SL, Kelsey FL, Ness RB. Failure of cefoxitin and doxycycline to eradicate endometrial Mycoplasma genitalium and the consequence for clinical cure of pelvic inflammatory disease. Sex Transm Infect 2008; 84: 338-342 13. Falk L, Fredlund H, Jensen JS. Signs and symptoms of urethritis and cervicitis among women with or without Mycoplasma genitalium or Chlamydia trachomatis infection. Sex Transm Infect 2005; 81: 73-78 14. Ripa T, Nilsson PA. A Chlamydia trachomatis strain with a 377-bp deletion in the cryptic plasmid causing false-negative nucleic acid amplification tests. Sex Transm Dis 2007:34:255-56. 15. Jensen J S, Björnelius E, Dohn B, Lidbrink P. Use of TaqMan 5’ Nuclease Real-Time PCR for quantitative detection of Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a Sexually Transmitted Disease clinic. J.Clin. Microbiol. 2004 42: 683 – 692. Köparen av den här produkten får använda den för human in vitro-diagnos. Inget patent eller annan licens än rätten att använda produkten finns. ProClin™ är ett registrerat varumärke som ägs av Rohm and Haas Co. Andra varunamn som förekommer i det här dokumentet tillhör sina respektive ägare. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 www.bio-rad.com 09/2010 Kod: 881064 14