Vad gömmer basofiler i sina granula?
Jenny Reimer
Basofila granulocyter är vita blodkroppar som förekommer i mycket liten mängd i blodet.
Deras funktion är inte helt känd men man tror att de deltar i allergiska reaktioner samt i det
medfödda immunförsvaret mot vissa parasiter. Vid dessa sjukdomar kan basofilerna släppa ut
inflammatoriska substanser som de har lagrat i blåsor, s.k. granula, inuti cellen. Flera av dessa
ämnen är idag väl kända både till funktion och till utseende t.ex. histamin. Basofiler lagrar
förutom histamin troligtvis även proteiner i sina granula. Exakt vilka proteiner är ej ännu känt.
Det övergripande syftet med min studie var att hitta och identifiera okända proteiner lagrade i
basofilers granula. Ett användbart redskap för detta ändamål är tvådimensionell gel
elektrofores (2D-gel analys), med vilken proteiner separeras med avseende på storlek och
laddning. En karta av proteiner erhålls, där en punkt representerar ett protein. Punkter kan
väljas ut och för att identifiera vilka proteiner de representerar kan man analysera dem med
s.k. masspektrometri.
För att kunna utföra en 2D-gel analys av basofiler krävs upp till 10 miljoner celler. Det
specifika syftet med mitt projekt blev därför att rena fram tillräckligt med celler från s.k. buffy
coat (blod koncentrerat på vita blodkroppar), för detta ändamål. En trestegsmetod har därför
komponerats bestående av densitetscentrifugeringar över Ficoll och Percoll (vätskor med hög
densitet). Under dessa centrifugeringar anrikas basofiler medan vita blodkroppar med hög
densitet samt röda blodkroppar separeras bort. Det avslutande steget består av magnetisk
sortering av celler med ett kommersiellt kit. Icke-basofiler märks upp med
antikroppskopplade magnetiska kulor som binds till en kolonn i ett magnetiskt fält. På detta
sätt har jag renat fram 13.5 miljoner orörda basofiler med en renhet mellan 95-99 %.
Två basofillika celltyper, cellinjen KU812 och basofiler från odlade navelsträngsceller, har
också samlats in för 2D-gel analys och masspektrometri. Då det är extremt svårt att rena fram
stora mängder ”vanliga” basofiler skulle man kunna använda dessa alternativa cellertyper i
experiment där stora mängder celler krävs.
Upptäckten och identifieringen av basofilspecifika granulaproteiner kan förhoppningsvis ge
oss en ökad förståelse för basofilens roll i allergiska reaktioner samt i det medfödda
immunförsvaret.
Examensarbete i biologi, 20p, Ht 2002
Institutionen för Cell och Molekylärbiologi, Uppsala Universitet
Handledare: Lars Hellman
