QUANTA LiteTM CCP IgG ELISA
708790
För In Vitro Diagnostisk användning
CLIA Komplexity: Hög
Avsedd användning
QUANTA LiteTM CCP IgG ELISA är en semi-kvantitativ enzyme-länkad immunosorbent assay för
detektion av IgG anti-CCP IgG (Cyclic Citrullinated Peptide) antikroppar i patient sera. Förekomsten av
dessa antikroppar, i samband med kliniska fynd och laboratorieparametrar, är ett hjälpmedel i diagnosen
av rheumatoid artrit.
Sammanfattning och förklaring till testet
Reumatoid Artrit (RA) är en av de vanligaste systemiska autoimmun sjukdomarna. Etiologin för
sjukdomen är okänd. Ungefär 0.5 % av världens befolkning är drabbad, och dubbelt så många kvinnor
som män får sjukdomen.1 Diagnos för RA ställs primärt baserat på kliniska manifestationer hos
sjukdomen. Helt tills nyligen så var det enda serologiska rutintest som användes bestämning av
förekomsten av reumatoid faktor (RF) i serum. RF är antikroppar som riktar sig mot Fc regionen hos
immunoglobuliner av IgG klassen. RF kan finnas som IgM, IgG, och IgA immunoglobulin klasser.
Förekomsten av IgM RF är ett kännetecken för RA och hittas i ungefär 50%-90% av dessa patienter.1,2
IgM RF kan också förekomma hos individer med infektioner, andra autoimmuna sjukdomar, och hos
vissa friska individer.1,2 IgG RF är mindre känsligt men mer specifikt för RA än IgM RF.2
Det är viktigt för hanterandet av sjukdomen att diagnosticera och behandla människor med RA så tidigt
som möjligt.3 Det har varit känt under många år att anti-perinukleära autoantikroppar, också kallat antikeratin, hittas i människor med RA.4,5 Nyligen upptäcktes också att dessa autoantikroppar känner igen en
epitope som innehåller en form av arginine som kallas citrulline.6 En syntetisk cirkulär peptide
innehållande citrulline som kallas CCP IgG (Cyclic Citrullinated Peptide) bevisades ha en bättre förmåga
att särskilja RA patienter från andra patienter än både perinukleärt autoantikropps test eller testet för
reumatoid faktor.7-11 I publicerad litteratur, är ungefär 70% av patienter med RA positiva med anti-CCP
IgG, medan endast 2% av slumpmässigt utvalda blodgivare och kontroll individer med andra sjukdomar
var positiva. En nyligen utförd studie hittade citrullinerade proteiner i lederna hos patienter med RA, men
inte i lederna hos patienter med andra former av ledsjukdomar.12 Dessa resultat ger en teoretisk bas för
förekomsten av anti-CCP IgG i RA patienter och en möjlig patogen roll för dessa autoantikroppar.
Procedur
Antigenet som används i QUANTA LiteTM CCP IgG ELISA test är en syntetisk cyklisk citrullinerad peptid
som har funnits ha hög sensitivitet och specificitet för att upptäcka antikroppar ihos patienter med RA.
Detta antigen är bundet till ytan på en brunn i en mikroplatta. Förspädda kontroller och utspädda patient
serum tillsätts separate brunnar, vilket tillåter att förekommande CCP IgG antibodies binder till den
imobiliderade antigenet. Obundet serum tvättas bort och ett enzym märkt anti-humant IgG konjugat
tillsätts varje brunn. En andra inkubation tillåter den enzymmärkta anti-human IgG antikroppen att binda
förekommande patient antikroppar som har fast sig i mikrobrunnarna. Efter att obundet enzymmärkt antihuman IgG tvättats bort så mats den återstående enzyme aktiviteten genom tillsats av ett chromogent
substrat och mätning av den resulterande färgutvecklingen. Assayen kan utvärderas genom att jämföra
färgutvecklingen i patientbrunnarna med kontrollbrunnarna.
Reagens
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Polystyren ELISA microtiterplatta coatad med renat syntetiskt CCP IgG antigen (12-1x8 brunnar),
med hållare i folieförpackning med torktillsats
ELISA Negativ Kontroll, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant serum
utan antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2 mL
CCP IgG ELISA Låg Positiv, 1 flaska med buffer innehållande konserveringsmedel och humant
serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
CCP IgG ELISA Hög Positiv/Kalibrator A, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel
och humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
CCP IgG ELISA Kalibrator B, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant
serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
CCP IgG ELISA Kalibrator C, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och
humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
CCP IgG ELISA Kalibrator D, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och
humant serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
CCP IgG ELISA Kalibrator E, 1 flaska med buffer som innehåller konserveringsmedel och humant
serum med antikroppar mot CCP IgG, förspädd, 1.2mL
HRP Provdluent, 1 flaska – färgad rosa innehållande Tris-buffrad koksaltlösning, Tween 20,
protein stabiliserare och konserveringsmedel, 50mL
HRP Tvättlösningskoncentrat, 1 flaska med 40x koncentrat – färgad röd innehållande Tris-buffrad
koksaltlösning och Tween 20, 25mL. OBS, Se Metod delen för spädningsinstruktioner.
HRP IgG Konjugat, (get), anti-human IgG, 1 flaska – färgad blå innehållande Tris-buffrad
koksaltlösning, protein stabiliserare och konserveringsmedel, 10mL
TMB Cromogen, 1 flaska innehållande stabiliserare, 10mL
HRP Stop lösning, 0.344M Svavelsyra, 1 flaska – färglöst, 10mL
1
Varning
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
VARNING: Den här produkten innehåller kemikalier (0.02% chloramphenicol) i
provspädningsbufferten, kontrollerna och konjugatet, som av delstaten California är kända för att
orsaka cancer.
Allt humant material som använts till förberedning av kontroller för denna produkt har testats och
befunnits vara negativt avseende antikroppar mot HIV, HbsAg, och HCV med FDA registrerade
metoder. Ingen testmetod kan fullständigt garantera att HIV, HBV, HCV eller andra infektiösa
smittbärande substanser inte finns i materialet.Därför bör CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG
ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll hanteras på samma sätt som potentiellt infektiöst
material.13
Sodium Azide används som konserveringsmedel. Sodium Azide är ett gift och kan vara giftigt om
det inmundigas eller absorberas genom huden eller ögon. Sodium azide kan reagera med bly och
koppar i avloppsledningar och bilda potentiellt explosive metallazider. Spola ur avloppen med
stora mängder vatten för att förebygga bildandet av metallazider.
HRP konjugatet innehåller en utspädd giftig/korrosiv kemikalie, som kan vara giftig om den
inmundigas i stora mängder. För att förebygga kemikalie skador, undvik kontakt via hud och
ögon.
TMB Cromogenet innehåller en irritant, som kan vara skadlig om den inhaleras, inmundigas eller
absorberas via huden. För att undvika skada, undvik inhalation, inmundigande eller kontakt med
hud och ögon.
HRP Stopplösningen består av en utspädd svavelsyralösning. Undvik exponering för basiska
material, metaller eller andra ämnen som kan reagera med syror. Svavelsyra är giftigt och
korrosivt och kan vara giftigt om det inmundigas. För att undvika kemikalieskador, undvik kontakt
med hud och ögon.
Använd lämplig personlig skyddsutrustning när du arbetar med de inkluderade reagenserna.
Utspillt reagens bör torkas upp omedelbart. Var vänlig att respektera all applicerbar lagstiftning
när ni hanterar kemikalierester.
Försiktighetsåtgärder
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Denna produkt är avsedd för In Vitro Diagnostiskt Bruk.
Utbyte av komponenter i detta kit, mot andra än sådana som levererats med reagenskitet kan
leda till felaktiga resultat.
Ofullständig tvätt eller en ineffektiv tvätt samt otillräcklig aspiration av vätska från mikrobrunnarna
kommer att orsaka försämrad precision och/eller hög bakgrund.
Anpassning av detta test för användning med automatiserad provhanterare eller andra
vätskehanteringssystem kan resultera i skillnader i testresultat, jämfört med den manuella
proceduren. Det är varje labs ansvar att validera att deras instrument ger provsvar som är
acceptabla.
Många olika faktorer kan påverka testets prestanda. Dessa är bland andra start temperatur för
reagenserna,
omgivningstemperaturen,
noggrannheten
och
reproducerbarhet
i
pippeteringstekniken, noggrannheten i tvätt och aspiration av vätska från mikrobrunnarna,
fotometern som används för att mäta färgutvecklingen, och inkubationstidernas längd under
assay proceduren. Noggrann uppmärksamhet är nödvändig för att erhålla korrekta och
reproducerbara resultat.
Rekommendationen är att följa protokollet i detalj.
Dålig förslutning av den zip-lock försedda foliepåsen innehållande mikrobrunnremsor och
torkmedel kommer att resultera i antigen degradation och försämrad precision.
Oacceptabelt låga absorbanser kan erhållas efter två eller flera användningar av en flaska HRP
konjugat efter en tid. Det är viktigt att följa rekommendationer avseende hantering av HRP
konjugat för att undvika detta.
Kemisk kontamination av HRP konjugatet kan resultera från otillräcklig rengöring eller sköljning
av utrustning eller instrument. Rester av vanliga laboratoriekemikalier såsom formalin, blekmedel,
etanol eller tvättmedel orsakar nedbrytning av HRP konjugatet över tid. Skölj noggrant all
utrustning och alla instrument efter användning av kemiska rengöringsmedel/desinficeringsmedel.
Lagringsförhållanden
1.
2.
3.
Lagra alla kitreagenser i 2-8 °C. Frys inte ner. Reagenserna är stabila tills utgångsdatum om dom
lagras och hanteras enligt rekommendation.
Oanvända antigen coatade mikrobrunnremsor bör förvaras i den noggrant återförslutna
foliepåsen tillsammans med torkningsmedelet och lagras i 2-8 °C.
Färdigspädd tvättbuffer är stabil i 1 vecka vid lagring i 2-8 °C.
Provinsamling
Denna testprocedur bör utföras med ett serum prov. Tillsatser av azid eller andra konserveringsmedel
kan påverka resultaten negativt. Microbiologisk kontaminering, värmebehandling eller prover som
innehåller synliga partiklar bör inte användas. Prover med kraftig hemolys, lipemiska serum eller prover
bör undvikas. Efter insamling så skall provet separeras från koagel. NCCLS Document H18-A2
rekommenderar följande lagringsförhållanden för porover: 1) Lagra prover vid rumstemperatur i högst 8
timmar. 2) Om testproceduren inte kommer att vara utförd inom 8 timmar förvara provet i kyla vid 2-8 °C.
3) Om testproceduren inte kommer att utföras inom 48 timmar, eller om prover skall skickas, frys ner
provet och förvara det vid -20 °C eller lägre. Frusna prover måste mixas efter de är tinade.
2
Procedur, Inkluderat material
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
CCP IgG ELISA microbrunnplatta (12-1 x 8 brunnar), med hållare
1.2mL förspädd ELISA Negativ Kontroll
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Låg Positiv
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Hög Positiv/Kalibrator A
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator B
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator C
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator D
1.2mL förspädd CCP IgG ELISA Kalibrator E
50mL HRP Provdiluent
25mL HRP Tvätlösningskoncentrat, 40x koncentrat
10mL HRP IgG Konjugat, (get), anti-humant IgG
10mL TMB Cromogen
10mL HRP Stopplösning, 0.344M Svavelsyra
Rekommenderad utrustning som inte ingår
Mikropipetter för dispensering av 5, 100, 200-300 och 500µL
Engångsspetsar för mikropipett
Provrör för spädning av patientprover, 4mL volym
Destillerat eller avjoniserat vatten
1L behållare för utspädd HRP Tvättlösning
Plattläsare som kan läsa Absorbans vid 450nm (och 620nm för referensvåglängd)
Metod, Innan du startar
1.
2.
3.
4.
5.
Alla reagens och prover skall ha rumstemperatur (20-26 oC) och mixa dem noga.
Späd HRP Tvättkoncentratet 1:40 genom att addera innehållet till en behållare med 975mL
destillerat eller avjoniserat vatten. Om hela plattan inte används kan en mindre kvantitet
förberedas genom att addera 2.0mL av koncentratet till 78mL destillerat eller avjoniserat vatten
per två remsor av mikrobrunnar som används. Den utspädda bufferten är stabil i en vecka vid
2-8oC.
Förbered en 1:101 spädning av varje patientprov genom att addera 5µL patientprov till 500µL
HRP provdiluent. Utspädda prover måste användas inom 8 timmar.SPÄD INTE CCP IgG ELISA
Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ Kontroll.
Bestämning av förekomsten eller frånvaron av anti-CCP IgG antikroppar använder arbiträra
enheter och kräver två brunnar för varje av de tre kontrollerna och en eller två brunnar för varje
patient prov. Det är rekommenderat att analyserna utför i duplikat.
Om så önskas, kan resultaten kvantifieras genom att använda en 5 punkters standard kurva. För
punkt A til E i den 5 punkters standardkurven, anvend förspedd CCP IgG Kalibrator A til E direkt
från flaskan. Den 5 punkters standardkurven har följande värde:
Punkt
Units
A
Förspedd CCP IgG Kalibrator A
250.0
B
Förspedd CCP IgG Kalibrator B
125.0
C
Förspedd CCP IgG Kalibrator C
62.5
D
Förspedd CCP IgG Kalibrator D
31.25
E
Förspedd CCP IgG Kalibrator E
15.62
Assay procedur
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ALLA REAGENS MÅSTE HA RUMSTEMPERATUR (20-26°C) INNAN ASSAYEN PÅBÖRJAS.
Placera det erforderliga antalet mikrobrunnar/remsor i hållaren. Stoppa omedelbart in ej
använda remsor med mikrobrunnar i foliepåsen tillsammans med torkmedlet och
återförslut den för att minimera exponeringen för vattenångor.
Addera 100µL av den förspädda CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv (om
så önskas Kalibratorer B genom E), och ELISA Negativ Kontroll samt de spädda patientproverna
till brunnarna. Täck brunnarna och inkubera i 30 minuter vid rumstemperatur på en jämn yta.
Inkubationstiden börjar efter tillsatsen av det sista provet.
Tvättsteg: Aspirera noggrant innehållet i varje brunn. Addera 200-300µL av den utspädda HRP
Tvättbufferlösningen till alla brunnar, aspirera sedan. Repetera detta två gånger till, totalt tre
tvättcykler. Vänd upp och ner på plattan och knacka den mot ett absorberande material för att
avlägsna återstående vätska efter den sista tvättcykeln. Det är viktigt att helt tömma varje brunn
efter varje tvättsteg. Bibehåll samma sekvens för aspireringen av vätska som användes vid
tillsättningen av prover.
Addera 100 µL av HRP IgG Konjugatet till varje brunn. Konjugatet skall avlägsnas från flaskorna
under renliga förhållanden och enligt god laboratorieteknik. Avlägsna endast den mängd av
konjugat som behövs för att utföra assay proceduren. FÖR ATT UNDVIKA POTENTIELL
MIKROBIOLOGISK OCH/ELLER KEMISK KONTAMINATION, HÄLL ALDRIG TILLBAKA
OANVÄNT KONJUGAT I FLASKAN. Inkubera brunnarna i 30 minuter som i steg 2.
Tvätt steg: Repetera steg 3.
Addera 100µL av TMB Cromogen till varje brunn och inkubera i mörker i 30 minuter vid
rumstemperatur.
Addera 100µL av HRP Stopplösning till varje brunn. Upprätthåll samma sekvens och timing som
vid tillsättningen av TMB Cromogen. Knacka försiktigt med ett finger på plattan för att mixa
reagenserna i brunnarna noggrant.
Läs absorbansen (OD) för varje brunn vid 450nm inom en time från det att reaktionen stoppats.
3
Om bikromatiska mätningar önskas kan 620nm användas som referens våglängd.
Kvalitetskontroll
1.
2.
3.
4.
CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA Negativ kontroll bör
användas i varje batch av reagenser för att säkerställa att alla reagenser och procedurer har
fungerat korrekt.
Var uppmärksam på att CCP IgG ELISA Låg Positiv, CCP IgG ELISA Hög Positiv och ELISA
Negativ Kontroll alla är förspädda och att dom inte kan avslöja utförande fel vid spädning av
prover.
Ytterligare kontroller kan testas i enlighet med de krav eller guidelines som gäller för det enskilda
laboratoriet. Ytterligare lämpliga kontrollsera kan förberedas genom allikvotering av e pool med
humant serum som lagras vid <-20°C.
För att test resultaten skall anses vara giltiga, måste samtliga nedanstående kriterier uppfyllas.
Om något eller några av dessa inte är uppfyllt bör analyssvaret anses vara ogiltigt och analysen
bör upprepas.
a
Absorbansen hos CCP IgG ELISA Hög Positiv måste vara store än absorbansen hos
CCP IgG ELISA Låg Positiv, som måste vara större än absorbansen hos ELISA Negativ
Kontroll.
b.
CCP IgG ELISA Hög Positiv måste ha en absorbans högre än 1.0 OD och ELISA Negativ
Kontroll får inte ha en absorbans som överstiger 0.2. OD
c.
CCP IgG ELISA Låg Positiv måste ha en absorbans som är mer än två gånger högre än
absorbansen hos ELISA Negativ Kontroll eller överstiga 0.25 OD
d.
ELISA Negativ Kontroll och CCP IgG ELISA Hög Positiv är avsedda att monitorera risken
för substantiella reagens fel . CCP IgG ELISA Hög Positiv säkerställer inte precision vid
testets cutoff.
e.
Användaren bör följa NCCLS Document C24-A för ytterligare vägledning avseende
lämpliga QC procedurer.
Beräkning av Semikvantitativa resultat - Ratio Metoden
Den genomsnittliga absorbansen (OD) för varje set av duplikat bestämmes först. Reaktivoteten för varje
prov kan då beräknas genom att dela den genomsnittliga absorbansen med den genomsnittliga
absorbansen för CCP IgG ELISA Låg
Positiv. Result multipliceras med det antal units som tilldelats CCP IgG ELISA Låg Positiv och kan läsas
på etiketten.
Sample OD
Sample Value = ——————
———————— x CCP IgG ELISA Low Positive (units)
CCP IgG ELISA Low Positive OD (units)
Reaktiviteten är relaterad till kvantiteten av närvarande antikropp på ett icke-linjärt sätt. Även om
ökningar och minskningar kommer att reflekteras av en motsvarande ökning och minskning i reaktivitet
så är inte förändringen proportionell. (t.ex.en dubblering av antikroppskoncentrationen kommer inte att
dubblera reaktiviteten).
Alternativ metod för beräkning: Semi-kvantitativa Resultat med hjälp av en standardkurva
Beräkning av resultat med standard kurva:
1.
Bestäm medelvärdet för alla duplikat.
2.
Plotta den genomsnittliga absorbansen (O.D.) för punkterna i standardkurva mot deras värden i
Units. Använd Cubic Spline (tredje graden polynom) eller en punkt till punkt kurvanpassning för
att rita kurvan.
3.
Bestäm den okända CCP IgG koncentrationen i Units från “Y” axeln genom att läsa den
korrespondernade absorbansen på “X” axieln. Beräkna provets koncentration i Units.
4.
VAR VÄNLIG UPPMÄRKSAMMA: Värden som beräknas med “RATIO” metoden kommer att
skilja sig från dessa värden som beräknas från en standard kurva. Höga värden kommer att skilja
sig mer än låga värden. CCP IgG Hög Positiv kommer inte att få ett värde på 250 Units med
“RATIO” metoden.
Tolkning av Resultat
Ett ELISA test är en känslig teknik som kan mäta mycket små skillnader i patient populationer. Värdena
som visas här är endast förslag. Varje laboratorium bör etablera sina egna normalvärden som baserar
sig på sina egna tekniker, kontroller, utrustning och patientpopulation enligt deras egna etablerade
procedurer.
Proverna kan sedan klassificeras som negative, svagt positive, positive eller starkt positive i enlighet
med nedanstående tabell.
Units
Negativ
<20
Svagt Positiv
20 – 39
Positiv
40 – 59
Starkt Positiv
>60
1.
2.
Ett positivt resultat är en indikation på förekomsten av CCP IgG antikroppar och föreslår
möjligheten att patienten kan ha Reumatoid Artrit.
Ett negativt resultat indikerat att inga CCP IgG antikroppar finns i provet eller att förekomsten är
4
3.
vid en så låg koncentration att nivån understiger den negativa cut-off som testet har.
Det föreslås att följande ordalydelse följer provsvaret vid laboratoriets rapport:
“Resultaten har erhållits med INOVA QUANTA LiteTM CCP IgG ELISA. CCP IgG värden erhållna
med olika tillverkare assay metoder kan inte jämföras direkt. Storleken av de rapporterade IgG
nivåerna kan inte korreleras till en end-point titrering.”
Begränsningar i Proceduren
1.
2.
3.
4.
5.
Förekomsten av immunkomplex eller andra immunoglobulin aggregat i patient provet kan orsaka
en ökad nivå av icke-specifik bindning och producera falskt positiva svar i denna assay.
Alla RA patienter är inte positiva för CCP IgG antikroppar.
Resultaten av denna assay bör användas i kombination med kliniska fynd och andra serologiska
tester.
Testets prestanda har inte undersökts med andra matrix än serum.
Det diagnostiska värdet av anti-CCP IgG i Juvenil Reumatoid Artrit patienter har inte fastslagits.
Förväntade värden
Förmågan hos QUANTA LiteTM CCP IgG ELISA att detektera IgG CCP IgG antikroppar utvärderades
med en jämförelse med en ELISA som mäter IgG RF så väl som anti-CCP IgG i patienter med en klinisk
diagnos av RA eller andra systemiska autoimmuna sjukdomar i två externa kliniska utvärderingar och en
stor intern studie.
Normal värden
Total 216 prover (118 kvinnor och 98 män, medelålder 39) från slumpmässigt utvalda blodgivare
testades. Två (1%) av proverna var positive anti-CCP IgG. En var en hög titer anti-CCP IgG positiv och
var också starkt positiv för IgG RF, en specifik markör för RA. Den andra svagt positiv med en
koncentration av 21 Units.
Klinisk Sensitivitet och Specificitet
Den följande tabellen summerar fynden från alla våra kliniska studier. RA patienterna diagnostiserades i
enlighet med ARA kriterierna 13 och i enlighet med de behandlande reumatologerna bästa förmåga.
Summary of Clinical Findings
Patient Groups
No.
Random blood donors
Rheumatoid Arthritis
Rheumatoid Arthritis RF+
Rheumatoid Arthritis RFRheumatic disease
SLE
Scleroderma
Sjögren’s Syndrome
Other rheumatic diseases
Cryoglobulinemia
Infectious disease
Other patients
216
252
183
69
336
103
86
38
109
29
87
29
CCP IgG ELISA
No. > 20 Units (%)
2*
(1%)
193
(76%)
165
(90%)
28
(40%)
29
(9%)
10*
(10%)
10*
(12%)
0
(0%)
9*
(8%)
2
(7%)
2
(2%)
1
(3%)
CCP IgG ELISA
No. > 40 Units (%)
1
(0.5%)
158
(63%)
142
(78%)
16
(23%)
16
(5%)
3
(3%)
7
(8%)
0
(0%)
6
(6%)
1
(3%)
1
(1%)
0
(0%)
*Några av de prover som var positive för CCP IgG antikroppar var också positiva för IgG RF, en anan
antikropps markör för RA. Dessa inkluderade 1 blodgivare, 2 SLE patienter, 4 Scleroderma patienter,
och 3 av patienterna med andra reumatiska sjukdomar.
Korsreaktivitet
För att utvärdera den potentiella korsreaktiviteten hos CCP IgG antigenet med andra autoantikroppar, så
utvärderades QUANTA Lite™ CCP IgG ELISA med 22 prover som alla hade höga nivåer med olika
andra autoantikroppar. i denna grupp fanns 2 prover som var reagerade med SS-A, SS-B, Sm, RNP,
Scl-70, Jo-1, TPO, Ribo-P, M2, chromatin och DNA. Alla prover var negative för anti-CCP IgG. Ovan
nämnda studie visar ingen signifikant korsreaktivitet hos QUANTA Lite™ CCP IgG ELISA med ett stort
urval av andra autoantikroppar.
Precision och Reproducerbarhet
Mellan-assay spridningen mättes genom att analysera duplikat av negative, lågt positive, positive och
starkt positive prover i sex olika körningar på sex olika dagar. Inom-assay spridningen mättes genom att
köra 5 prover 9 gånger på samma mikrotiterplatta. Representativa resultat visas nedan.
Mellan-körnings spridning
Mean
SD
CV%
Neg.1
2.5 U
0.3
11%
Neg.2
2.1 U
0.1
7%
Low 1
21 U
1.2
6%
Low2
31 U
1.7
6%
5
Mod.1
42 U
2.6
6%
Mod.2
47 U
3.1
7%
High1
103 U
5.6
5%
High2
168 U
12
7%
Inom-körnings spridning
Neg.1
2U
25
11%
Mean
SD
CV%
Mod.1
52 U
4.5
9%
High1
107 U
5.4
5%
High2
109 U
4.2
4%
High3
175 U
4.9
3%
När ett lågt positivt prov kördes 45 gånger på en mikrotiterplatta var CV 6%.
Referenser
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
Wener MH: Rheumatoid Factors. Manual of Clinical Laboratory Immunology, Rose NR et al, eds,
American Society for Microbiology Press, 961-972 (2002).
Borretzen M, et al: Rheumatoid Factors. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds, Elsevier
Science B.V., 706-715 (1996).
Kim JK and MH Weisman: When does rheumatoid arthritis begin and why do we need to know?
Arthritis Rheum 43:473-484 (2000).
Vincent C, et al: Immunoblotting detection of autoantibodies to human epidermis filaggrin: a new
diagnostic test for rheumatoid arthritis. J Rheumatol 25:838-846 (1998).
Serre G, et al: Filaggrin (keratin) autoantibodies. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds,
Elsevier Science B.V., 271-276 (1996).
Van Venrooj WJ: Citrullination: a small change for a protein with great consequences for
rheumatoid arthritis. Arthritis Res 2:249-251 (2000).
Schellekens GA, et al: The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a
cyclic citrullinated peptide. Arthritis Rheum 43:155-163 (2000).
van Jaarsveld CHM, et al: The prognostic value of the antiperinuclear factor, anti-citrullinated
peptide antibodies and rheumatoid factor in early arthritis. Clin Exp Rheum 17: 1689-1697 (1999).
Bizzaro N, et al: Diagnostic accuracy of the anti-citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis.
Clin Chem 47:1089-1093 (2001).
Kroot E-JJA, et al: The prognostic value of anti-cyclic citrullinated peptide antibody in patients
with recent-onset rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 43:1831-1835 (2000).
Combe B, et al: Prognostic factors for radiographic damage in early rheumatoid arthritis: a
multiparameter prospective study. Arthritis Rheum 44:1736-1743 (2001).
Baeten D, et al: Specific presence of intracellular citrullinated proteins in rheumatoid arthritis
synovium. Arthritis Rheum 44:2255-2262 (2001).
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National
Institute of Health, 1999, Fourth Edition (HHS Pub. #(CDC 93-8395).
Arnett FC, et al: The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification
of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 31:315-324 (1988).
Tillverkad av:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Representant:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Germany
Tel.: +49-6894-581020
Fax.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
Technical Service
628790
888-545-9495
June 2005
Revision SWE9
6
