Monoclonal Mouse
Anti-Human
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase/FITC
Clone HT-6
Kod nr. F7139
Avsedd användning
För diagnostisk användning in vitro.
F7139 är avsedd för användning i flödescytometri. Terminalt deoxynukleotidyltransferas (TdT) accepteras som
en intracellulär markör för omogna lymfocyter i det hematopoetiska systemet (1) och anses väsentlig för den
ursprungliga utvärderingen av akuta leukemier tillsammans med en panel av andra antikroppar (1, 2, 3).
Tolkning måste göras av kvalificerad specialist inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska
tester.
Sammanfattning
och förklaring
Ingående reagenser
TdT är ett 58 kDa protein (2) som katalyserar polymerisationen av deoxynukleotider på 3’ hydroxyländen av en
polydeoxynukleotid utan mallinstruktioner (3, 4). TdT finns närvarande i kärnan hos normala T och B
lymfocytföregångare och den neoplastiska ekvivalenten (5). Positiva celler finns närvarande i normal tymus och i få
normala benmärgsceller, motsvarande hemapoietiska föregångare (2). De flesta fall av ALL är TdT-positiva, 37%
av AML-fallen är TdT-positiva (3).
F7139 är en renad monoklonal musantikropp konjugerad med FITC (fluorescein isothiocyanate) isomer 1.
Konjugaten levereras i vätskeform i buffert innehållande 1% bovinserumalbumin (BSA) och 15 mmol/L NaN3,
pH 7,2. Varje vial innehåller 50 tester (10 µL konjugat för upp till 106 MOLT-4 celler).
Isotyp: IgG1, kappa. Konjugatkoncentration mg/L: Se etikett på flaskan.
Immunogen
Specificitet
Antikroppskod nr.
Fluorokrom
Negativ kontrollkod
nr.
F7139
FITC (Fluorescein isothiocyanate isomer 1)
X0927
Renad TdT isolerad från humana leukemiceller (CML-blastkris).
Celler märkta med antikroppen uppvisar en färgning begränsad till kärnan.
Anti-TdT, HT-6, märker MOLT-3 och MOLT-4 celler (båda omogna T-cellinjer härledda från ALL, kända för att
vara TdT-positiva) (6).
I flödescytometri visar Anti-TdT, HT-6 höga uttryck i akuta lymfoid- och lägre uttryck i myeloida leukemier. AntiTdT, HT-6 tillsammans med andra antikroppar möjliggör igenkännande av minimala leukemiska blaster under
klinisk remission i AML (7).
Anvisningar
och försiktighetsåtgärder
1. För professionella användare.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som i ren form är synnerligen toxisk. I
produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten när det slås bort för att
förhindra att metallazider byggs upp i avloppet.
3. Som med alla produkter som kommer från biologiska källor måste korrekta procedurer användas vid
hanteringen.
4. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
5. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaring
Förvaras mörkt vid 2-8 oC. Använd inte efter utgångsdatum som är angivet på flaskan. Om reagenserna
förvaras i annan miljö än de specificerade, måste förhållandena verifieras av användaren. Det finns inga tydliga
tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt
med patientprover. Kontakta vår tekniska support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med
variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara något problem med antikroppen.
Färgningsprocedur
1.
Överför 50 µL (upp till 106 celler) av cellsuspensionen som skall analyseras (helblod, benmärg eller
mononukleära celler) till ett provrör.
2.
Tillsätt 100 µL Dako IntraStain Reagent A (Fixation), kod nr. K2311. Blanda försiktigt med en
vortexblandare för att se till att cellerna är i suspension.
3.
Inkubera vid rumstemperatur i 15 minuter.
(104366-002)
4.
Tillsätt 2 mL PBS och blanda försiktigt med en vortexmixer.
5.
Centrifugera vid 300 x g i 5 minuter, aspirera sedan klarskiktet och lämna kvar cirka 50 µL vätska.
6.
Blanda ordentligt med en vortexblandare för att garantera att cellerna är i suspension och tillsätt 100 µL
Dako IntraStain, Reagent B (Permeabilisation), kod nr. K2311. Tillsätt 10 µL F7139. Blanda försiktigt med
vortexblandare för att se till att cellerna är i suspension.
7.
Använd en icke-reaktiv monoklonal antikropp av samma isotyp och konjugerad med samma fluorokrom
som negativ kontroll (se tabell).
8.
Inkubera i mörker vid rumstemperatur i 15 minuter.
F7139/SE/ROP/13.08.08 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
9.
Upprepa steg 4 och 5.
10.
Resuspendera cellerna i en lämplig vätska för flödescytometri, t.ex. 0,3 mL 1% paraformaldehyd (fixativ) i
0,01 mol/L PBS, pH 7,4.
11.
Analysera på en flödescytometer
Det rekommenderas att ta med ett lämpligt positivt och negativt kontrollprov i varje körning för kontroll av
reagensen och förberedelserna. Observera att fluorescenskonjugat är ljuskänsliga och att proven därför skall
skyddas från ljus under färgningsproceduren och fram till dess analysen körs.
Referenser
1.
Bollum FJ. Terminal deoxynucleotidyl transferase as a hematopoietic cell marker [Review]. Blood
1979;54:1203-15.
2.
Terminal Deoxynuclotidyl Transferase (TdT). In: Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M, editors. Manual
of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford University Press; 2003. p. 413-5.
3.
Erber WN, Mason DY. Immunoalkaline phosphatase labeling of terminal transferase in hematologic
samples. Am J Clin Pathol 1987;88:43-50.
4.
Bearman RM, Winberg CD, Maslow WC, Racklin B, Carlson F, Nathwani BN, et al. Terminal
deoxynucleotidyl transferase activity in neoplastic and nonneoplastic hematopoietic cells. Am J Clin
Pathol 1981;75:794-802.
5.
Adriaansen HJ, Hooijkaas H, Kappers-Klunne MC, Hählen K, van’t Veer MB, van Dongen JJM. Double
marker analysis for terminal deoxynucleotidyl transferase and myeloid antigens in acute nonlymphocytic
leukemia patients and healthy subjects. Hematol. Blod Transfus. 1990;33:41-9.
6.
T-cell leukemia and T-cell lymphoma cell lines. In: Drexler HG, editor. The leukemia-lymphoma cell line
factsbook. San Diego, San Francisco, New York, Boston, London, Sydney, Tokyo: Academic Press;
2001. p. 387-8.
7.
Paietta E, Meenan B, Heavey C, Thomas D. Detection of Terminal Transferase in Acute Myeloid
Leukemia by Flow Cytometry. Cytometry 1994;16:256-61.
Förklaring av symboler
(104366-002)
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Använd före
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Skydda från solljus
(se förvaringsavsnittet)
Tillverkare
Läs instruktionerna för
användning
Batchkod
F7139/SE/ROP/13.08.08 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
