Analys av olika kolhydrater
Teori: Ordet ”socker” kan ha olika betydelser. Socker i kaffet eller te heter sackaros. Mjölk
innehåller socker som kallas mjölksocker eller laktos. Potatis, ris och pasta innehåller
sockerarten stärkelse. Diabetessjuka testar sitt blod för ”socker” som egentligen är glukos. Du
kommer lära dig hur man kan skilja på ”socker” men det kommer även i denna laboration att
finnas ett protein.
Material: 0,01% lösningar av stärkelse, protein, laktos, sackaros och glukos. Testa även
fruktjuicer, mjölk och mjölkprodukter.
Fehlings lösning I: 7 g CuSO4?. 5H2O i 100cm3 avjon.vatten
Fehlings lösning II: 35 g C4H4KNaO6.4H2O (K,Na-tartrat) och 10 g NaOH i 100cm3
avjon.vatten. Vid användning blanda lika mängder av Fehlings lösningarna I och II.
Lugol´s lösning: 1 g jod( I2) och 2 g KI i 50 cm3 avjon.vatten.
Coomassie Brilliant Blue från Biorad. (färdig lösning innehåller fosforsyra och metanol)
EnzyPlus EZS 962+ laktos/D-glukos från Biocontroll eller sockermätare som diabetiker
använder.
Vattenbad, provrör, pipetter
Risker vid experimentet: Kopparjoner är miljöfarligt, natriumhydroxid är frätande, jod
färgar huden. För Coomassie Brilliant Blue gäller att fara kan inte uteslutas - tillämpa
försiktighetsprincipen. En fullständig riskbedömning ges av undervisande lärare.
Utförande: Bestämning av socker, stärkelse och protein med Fehlings lösningar
1. Du får (eller hämtar) 5 provrör med olika sockerlösningar och ett med protein märka
med A till E.
2. Märk upp 5 nya rör och pipettera ca 1 cm3 från varje rör A – E.. Tillsätt 5 drp av en
blandning av Fehlings I och II.
3. Värm rören på ett vattenbad i ca 5 minuter eller tills en färgreaktion har skett. Röd färg
av koppar(I)oxid indikerat på reducerande sockerart tex. fruktos, glukos eller laktos.
Svagt violett lösning tyder på protein (Biuretreaktionen)
Bestämning av stärkelse med Lugols lösning
4. Pipettera ca 0,5 cm3 5 rör A-E i nya provrör. Tillsätt 50 μl Lugols lösning till varje rör.
Lugols lösning är en indikator på stärkelse. Jod ger med stärkelse en blå färg med
stärkelemolekylen då den dras till stärkelsens inre hydrofoba spiralform.
Monosackarider såsom glukos och fruktos eller disackarider som sackaros och laktos
påverkas ej jod.
Proteinbestämning med Coomassi blue.
5. Pipettera 50 μl av rör A-E i nya provrör. Tillsätt 800 μl vatten och 200 μl Coomassi
blue. Proteiner bildar en blå färg som bestämmas i en spektrofotometer vid 595 nm.
Enzymatisk bestämning av socker
Teori:
Innehåller i de provrör som visat sig vara reducerande socker arter går nu vidare för att
avgöra vilket som är glukos och laktos.
Laktos hydrolyseras av enzymet β-galaktosidas till D-galaktos och D-glukos.
I närvaro av ATP(adenosin-5-trifosfat); sätts en fosforgrupp på D-glukosen till glukos6-fosfat.
Samtidigt bildas ADP ((adenosin-5-difosfat).
Glukos-6-fosfat oxideras av glukos-6-NADP till NADPH. Mängden NADPH som
bildas är stökiometriskt mot den mängd laktos som fanns i provet.
Halten bildad NADPH mäts spektrofotometriskt med en ökad absorbans vid 340 nm.
6. Utförande: Du har två rör med socker som visat sig vara reducerande sockerarter.
Dessa kallas 1 och 2.
7. Märk 4 rör 1+, 1-, 2+ och 2-. Tillsätt 100 μl fosfatbuffert pH 6,6 (R4b) i alla 4 rören.
Tillsätt sedan 5 μl β-galaktosidas i rören märkt med (+) alltså 1+ och 2+. Men inte i 1och 2-.
8. Tillsätt 100 μl av socker 1 i rören märkta 1+ och 1-. Samt socker 2 i 2+ och 2-. Ställ
rören i vattenbad på 370C i 30 minuter. Lakotsen hydrolyseras
9. Efter inkubationen tillsätt 1 cm3 avjon.vatten, 200 μl reaktionsbuffert (R1) och 50 μl
reagens R2 (ATP och NADP) i alla 4 rören.
10. Överför 1 cm3 av lösningarna till kuvetter. Efter två minuter mäts absorbansen vid 340
nm.
11. Till varje kuvett tillsätt 7 μl enzymmix (R3) med hexokinas och glukos-6fosfatdehydrogenas. Inkubera i ytterligare 5 minuter och mät absorbansen en gång till
vid 340nm.
Tolkning av resultat. Den första mätningen bör vara låg.
Till Läraren:
Riskbedömningsunderlag:
”Risker vid experimentet” gäller endast de kemikalier som nämnts, under förutsättning att
beskrivna koncentrationer, mängder och metod används.
Som lärare förväntas du göra en fullständig riskbedömning för dig själv och din elevgrupp.
Fehlings lösning Lugols lösning
Proteinbestämning Ämne
A(
Röd fällning
brun
brun
Red. sockerart
B
Blå lösning
blå
brun
stärkelse
C
Röd fällning
brun
brun
Red. sockerart
D
Violet lösning
brun
blå
Protein
E
Blå lösning
brun
brun
Sackaros
Prov nr
Första mätningen
Anra mätningen
1+
12+
2Laborationen kommer från “Science in school” Issue 8 sid 22-27
8
Resultat
