Kunskapsbrev Har du koll på mikroorganismerna? Mikroorganismer är samlingsnamn för bakterier, mögel, jäst och virus. I en människokropp finns ca 1,5 kilo bakterier – de flesta utgör ingen hälsofara, utan är tvärtom nödvändiga för att immunförsvaret och matsmältningen ska fungera. MAJ 2015 Vilka bakterier är farliga för din verksamhet? Mikrobiologisk analys av råvaror, produkter och omgivning är något som alla livsmedelsproducenter måste utföra, i varierande utsträckning. Olika typer av livsmedel innebär olika risker, en bakterie som ställer till problem i en produkt är inte alls ett problem i en annan. Men alla mikroorganismer är inte ofarliga, vissa är sjukdomsalstrande medan andra skyndar på förruttnelse av livsmedel. Därför är det viktigt att som livsmedelsproducent kunna vara helt säker på att produkterna man levererar inte innehåller några risker. Mikrobiologisk kontroll av livsmedel handlar om att upptäcka oönskade mikroorganismer i råvaran eller på produktionsytor och utrustning. Med dagens lättanvända snabbmetoder gör du analyserna själv och behöver inte vänta på provsvar från externa lab. Samtidigt bygger du upp en värdefull kunskapsbank för ditt kvalitetsarbete. I detta kunskapsbrev hittar du exempel på lösningar som passar de flesta, från det lilla processlabbet till det stora kommersiella. Vi bidrar gärna med vår erfarenhet och kunskap om metodval, analysparametrar och lämplig utrustning. Tveka inte att höra av dig med dina frågor. Hanna Tidblom Produktchef, Food Diagnostics Livsmedel har olika egenskaper som främjar eller hämmar tillväxt, t ex salthalt, vattenhalt, vattenaktivitet, förvaring, lagringstid osv. Hur livsmedlet ska beredas innan det konsumeras spelar också in. Eftersom bakterier dör vid upphettning ställs högre mikrobiologiska krav på livsmedel som är avsedda för direkt konsumtion än på de som ska värmebehandlas innan. Det finns mycket litteratur i ämnet, Livsmedelsverket har viss information och i EU-direktiv finns kriterier för olika typer av livsmedel. Dessa kan vara vägledning för att sätta upp ett kontrollprogram för sin egen produktion. Eget eller externt lab? När du fastställt vilka parametrar som ska analyseras är det dags att bestämma hur analyserna ska göras. Ska de göras av externt lab eller inhouse? Fördelen med ett eget lab är att du kan agera snabbt om något händer. Resultaten kommer utan fördröjning och du behåller ovärderlig kompetens och förståelse för analyserna inom den egna organisationen. Nästa steg är val av metod. För de flesta mikrobiologiska analyser finns referensmetoder, antingen ISO-metoder eller NMKL-metoder. Dessa bygger generellt på odling av bakterier på ett oselektivt substrat, varifrån man sedan går vidare med olika typer av konfirmeringar för att få resultat för de parametrar som är intressanta. Dessa metoder är säkra men tidsödande och ställer krav på hög mikrobiologisk kompetens samt ett komplett utrustat laboratorium. Färdiga plattor förenklar Utöver referensmetoderna finns en mängd alternativa metoder, ofta baserade på odling av mikroorganismer, men på ett mer selektivt substrat. Bakterierna man letar efter blir lättare att identifiera utan konfirmeringssteg och analysen går ofta fortare. Den snabbare analystiden är viktig för många, då frisläppande av en produkt kan hänga på godkända analyser. Att underlätta labarbetet är en annan viktig anledning, då konfirmering ofta innebär att en mängd olika reagens ska köpas in och lagerhållas. De alternativa metoderna utgörs i regel av färdiga plattor med varierande hållbarhet. Oftast har de längre hållbarhet än en egentillverkad agarplatta, vilket gör att det är lättare att ha rätt mängd hemma. Tillverkar man sitt eget substrat, måste varje batch kvalitetskontrolleras. En ny ISO-standard för hur denna kontroll ska gå till är på gång, vilket kommer att medföra ännu mer arbete. Inköp av färdiga plattor innebär att tillverkaren redan utfört kvalitetskontrollen och certifikat medföljer. Det finns validerade snabbmetoder med färdiga agarplattor för såväl råvarukontroll (Compact Dry) som för desinfektionskontroll av produktionsytor (Hygicult). Hanna Tidblom 031-335 13 66 [email protected] Compact Dry för livsmedel och vatten Vår lösning för snabba, enkla mikrobiologiska analyser heter Compact Dry. Det är ett komplett sortiment av färdiga agarplattor för analys av hygienindikatorer på i första hand livsmedel och filtrerade vattenprover, men kan även användas för omgivningsprover. Compact Dry är en liten torkad agarplatta, som aktiveras genom att tillsätta 1 ml av provet. Agarn innehåller chromogena substrat, som bryts ner av den sökta bakterien. Kolonin som bildas får då en särskild färg, vilket underlättar avläsningen. Detta gör också metoderna specifika och kolonierna behöver därför inte konfirmeras. Kort om Compact Dry • Färdig att använda • Tar liten plats • Lång hållbarhet • Snabba resultat • Säkerhet • Flexibilitet • Validerad metod Det torkade substratet ger plattorna exceptionellt lång hållbarhet: ett till två år i rumstemperatur. Detta gör det möjligt att hålla lager för att vara beredd på eventuella analystoppar, utan risk för att plattorna blir för gamla. Det lilla behändiga formatet sparar dessutom plats vid förvaring, inkubering och avfallshantering. Metoderna är validerade av AOAC och/eller NMKL, vilket innebär att de bevisligen ger samma resultat som motsvarande referensmetod. Följande plattor finns: Compact Dry TCTotalantal Compact Dry EC E. coli Compact Dry CF Koliformer Compact Dry YM Jäst och mögel Compact Dry ETBEnterobacteriaceae Compact Dry ETCEnterokocker Compact Dry XSA Staphylococcus aureus Compact Dry XBC Bacillus cereus Avläsning Ansättning Homogenisering Spädning Uppvägning/mätning Vi synar ditt lab Kontakta Jan-Erik Carlsson, 031-335 13 61 eller [email protected] för en objektiv genomgång av ditt lab. Rätt utrustning är halva jobbet Det ideala labbet har ett rakt och enkelt flöde från provberedning till analys. Springet minimeras och med rätt hjälpmedel förbättras både ergonomi och kvalitet. • Uppvägning/mätning Eftersom man oftast är intresserad av halten mikroorganismer, är det noga att analysera exakt provmängd. Till detta behövs en våg och en behållare att väga upp provet i. Oftast används särskilda sterila påsar, så kallade stomacherpåsar, med eller utan filter. • Spädning 1 Fasta prover måste spädas för att kunna spridas på en platta, flytande prover kan ibland ansättas direkt. Oftast späds provet gånger tio för att underlätta beräkningen och spädvätska tillsätts manuellt eller med spädapparat. Denna innehåller en integrerad våg och en pump, som kopplas till en behållare med spädvätska. Detta ger exakt vägning och spädning samt sparar tid, samtidigt som labpersonalen slipper lyfta tunga vätskebehållare. • Homogenisering För att få loss mikroorganismerna från provet krävs någon typ av homogenisering, framför allt av fasta prover. Vanligtvis görs detta i en s k stomacher, som blandar provet med spädvätskan under tryck så att provet finfördelas. • Spädning 2 Ofta behöver provet spädas ytterligare för att få rätt antal kolonier på den platta som används. Är provet för koncentrerat kan det bli för många kolonier på plattan, då går de ofta inte att räkna. Är provet för utspätt blir det för få eller inga kolonier och resultatet blir inte tillförlitligt. För att späda provet finns flera olika lösningar. Antingen tillverkar man rör med steril spädvätska själv eller köper färdiga. Det finns också instrument som kan göra spädningen automatiskt. Vilket alternativ man väljer beror på förutsättningarna och antalet prover/spädningar. • Ansättning För att sätta provet till den valda agarplattan används oftast en automatpipett med engångsspetsar av plast för att vara säker på att få rätt volym. Används vanliga agarplattor behövs också en steril rackla i plast eller glas för att sprida provet på plattan. Används Compact Dry behövs inte detta, då sprider sig provet automatiskt. Man kan även använda en metod som kallas spiralplattspridning, som underlättar när flera spädningar sätts av samma prov. • Inkubering Mikroorganismer trivs och växer bäst under specifika temperaturförhållanden, som alltid är angivna i den valda analysmetoden. För att åstadkomma rätt temperatur behövs en inkubator/värmeskåp. Dessa finns i olika storlekar och med olika funktioner som t.ex. tidsstyrning och automatisk temperaturkontroll. • Avläsning När plattorna inkuberats enligt den tid och temperatur som metoden anger, är det dags att läsa av resultatet. Detta underlättas med en koloniräknare, som skapar bra kontrast med hjälp av ljus. Det finns både enkla manuella koloniräknare och automatiserade, som kopplas till en dator för att räkna kolonierna. Mikrobiologi - Maj 2015 Uppgradera dig! Boka en kurs. • Certifieringskurs ATP-mätning Heldagskurs som gör dig till certifierad användare av SystemSURE Plus. Snabb och säker salmonellaanalys • Webinars varje månad En timmas interaktiv utbildning, 450 kr/person. - Grunderna i ATP-mätning - ATP-mätning för livsmedelsinspektörer - ATP-mätning för vård & omsorg Kursprogram och anmälan www.food-diagnostics.se, menyval Tjänster/Utbildning eller 031-335 13 62, [email protected] Det började med potatisskivor Innan det fanns substrat och medier där bakterier kunde tillväxa, användes substrat från naturen, exempelvis mjölk, fruktsafter och skivor av växtdelar. Man tryckte till exempel en potatisskiva mot ytan som skulle kontrolleras och odlade sedan några dagar i rätt temperatur. På så vis utvecklades tryckplattan för mikrobiologisk kontroll. Jag kommer ihåg när jag på nittiotalet besökte en av mina första kunder som tillverkade sina egna tryckplattor på labbet. Det var viktigt att de hällde upp så mycket agar i plastskålen (petriskål) att ytan blev konvex (precis som när man plockade potatis och det skulle vara råge på korgen). Det var bara ett problem, företaget låg intill en stor väg och varje gång en lastbil körde förbi skakade labbänken, agarn rann ut och alla plattorna blev värdelösa. Det var då de började köpa Hygicult från oss istället. Jan-Erik Carlsson Frans Perssons väg 6 412 76 Göteborg Telefon: 031 335 13 62 Fax: 031 335 13 63 [email protected] www.food-diagnostics.se NYHET! Efter inkubation ger färgen besked om provet innehåller salmonella eller inte. Att analysera patogener som salmonella är ofta tidskrävande och kostsamt, framförallt om man inte har ett fullskaligt lab till sitt förfogande. Nu har vi glädjen att erbjuda svabben InSite Salmonella, som gör att du snabbt och säkert kan analysera omgivningsprover själv. Svar inom 24-48 timmar Metoden är enkel: svabba ytan och inkubera därefter svabben i 37°C i sex timmar. Tillsätt sedan substratet genom att knäcka behållaren i toppen av svabben och inkubera återigen i 37°C i 24-48 timmar. Läs därefter av resultatet genom att titta efter färgomslag. Skiftar vätskan från lila till gult är det indikation på salmonella. Svabben är ett slutet system, eftersom den aldrig behöver öpp- nas är det ingen risk att omgivningen kontamineras. Även listeria Sedan tidigare har vi två olika svabbar för listeriaanalys av omgivningsprover, InSite Listeria som detekterar Listeria spp. och SwabSURE Listeria P som detekterar Listeria monocytogenes. De fungerar på samma sätt som InSite Salmonella, inkubation och avläsning av färgomslag inom 24-48 timmar. Dessa metoder har på senare tid blivit väldigt populära hos livsmedelsindustrier som inte har eget lab men ändå vill kunna utföra dessa viktiga analyser. Kontakta oss för mer information! 50 % introduktionsrabatt Beställ före 30 maj, spara 2.225:-. 50 st InSite Salmonella svabbar. Hygicult för produktionsytor Det sägs att en halv miljon matförgiftas varje år i Sverige, men antagligen är det många fler, eftersom få anmäler till kommunen. Orsaken är ofta bristande hygien vid livsmedelshantering. ATP-mätning (med t.ex. SystemSURE Plus) är en mycket bra metod för att kontrollera rengöringen av produktionsytor. Men för mikrobiologisk desinfektionskontroll är agarplattor rätt metod. Hygicult är antagligen den äldsta och mest använda agarplattan i Skandinavien. Den är den enda för hygienkontroll som är godkänd och validerad av AOAC i USA samt NordVal i Norden. Följande Hygicult® plattor finns: • TPC, totalantal aeroba bakterier • E, Enterobacteriacae (tarmbakterier) • Y&F, jäst och mögel • E/ß-GUR, Enterobacteriacae och E. coli Tryck plattan mot ytan som ska kontrolleras. Sätt proverna i värmeskåp i 30°C och läs av resultatet mot en avläsningsmall efter två dygn.