Snabb Resistensbestämning
med disk diffusion
Emma Jonasson
Samtalsämnen
• Varför snabb resistensbestämning
• Snabb res. enligt EUCAST-metoden
• Snabb res. från
– Urinprover
– Positiva blododlingar
• Möjligheter och begränsningar
Introduktion till snabb
resistensbestämning
•
•
•
•
Ökad antibiotikaresistens
Riktad istället för empirisk behandling
Snabbare svar – snabbare rätt behandling
Patienten blir bättre snabbare
Snabb resistensbestämning enligt
EUCAST-metoden
Eurostarprojektet, “Eurostar Rapid disk
projektet” har som mål att utveckla en
standardiserad metod för snabb automatiserad
resistensbestämning med EUCAST brytpunkts
tabell.
Eurostar
Metod
• Metod
– McFarland på 0,5-0,6
– Kort inkubation
– Plattor lästa från
framsidan
Enterococcus faecalis ATCC 29212 efter 6h inkubation.
• E. coli, E. feacalis 6
timmar
• S. aureus,
Ps. aerugionosa 8
timmar
Enterococcus faecalis ATCC 29212 efter 18h inkubation.
Eurostar
QC-stammar
Escherichia coli ATCC 25922
• Kvalitetskontroller
• Kort jfm standard
inkubation
– Målvärdena 0-8mm lägre
– Spridningen var ca 5mm
(n=44/48)
Eurostar (6h) EUCAST (18h)
Target Range Target Range
Cefotaxime 5
22
20-24
28
25-31
Ciprofloxacin 5
27
25-29
35
30-40
Meropenem 10
25
23-27
31
28-34
Ceftazidime 10
22
20-24
26
23-29
Piperacillin/tazobactam 30-6
20
18-22
24
21-27
Trimethoprim 5
22
20-24
25
21-28
Nitrofurantoin 100
20
17-22
20
17-23
Tobramycin 10
19
17-21
22
18-26
Gentamicin 10
19
17-21
23
19-26
Enterococcus faecalis ATCC 29212
(n=55/56)
Eurostar (6h) EUCAST (18h)
Target Range Target Range
Ampicillin 2
16
14-18
18
15-21
Vancomycin 5
14
13-15
13
10-16
Gentamicin 30*
16
14-18
15
12-18
Linezolid 10
22
20-24
22
19-25
Nitrofurantoin 100
20
18-22
21
18-24
* 39/48 tested isolates
Eurostar
kliniska isolat
• Mikrobiologiska laboratorium
– Hvidor, ImagA bänkmodell med manuell justering
– Amsterdam (AMC), Kiestra helautomatiska system
– Växjö, manuella avläsningar
• 93% av isolaten kunde läsas efter 6 el 8
timmar
Eurostar, kliniska isolat
EUROSTAR
Sammanfattning
• Metod för snabb resistensbestämning (6 eller 8h),
EUCAST disk diffusion metodik och kliniska
brytpunkter.
• Resistens:
– MRSA (8h)
– ESBL i E.coli och K.pneumoniae (6h)
• Entreobacteriase: ciprofloxacin, cefotaxim,
ceftazidim, meropenem och gentamicin
• S. aureus: cefoxitin, erytromycin och klindamycin
Långsamväxande bakterier
Haemophilus influenzae
•
•
•
•
•
70 isolat
>90% att läsa efter 8 timmar
Separerar känsliga och resistenta
Screening för β-laktam, 64/67
PBP-medierad resistens upptäcks
Haemophilus influenzae
8h
18h
Screening för β-laktam resistens med PcG, 64/67 isolat kunde läsas av korrekt
efter 8 timmar.
Långsamväxande bakterier
Streptococcus pneumoniae
•
•
•
•
•
75 isolat
8 timmar inkubering
5/75 kunde inte läsas (8/75 för klindamycin)
Separera känsliga och resistenta
Nära brytpunkten
Långsamväxande bakterier
Streptococcus pneumoniae
8h
18h
Norfloxacin och S. pneumoniae, 8 timmars inkubation.
Direkt från urinprov
• 72 prover, riklig Enterobacteriaceae
• Inkubering 6h
– MH
– Uriselect
Direkt från urinprover
Resultat
2/3 läsbara efter 6 timmar
29 st tydligt färgomslag
Mindre zoner jfm med standarsinkubation
Specifika brytpunker
Enterobacteriaceae med ceftazidim 10 µg
47 kliniska isolat
12
10
8
6
S
4
R
2
Zondiameter (mm)
32
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
0
6
Antal isolat
•
•
•
•
Direkt från Blododlingsflaskor
• 3 droppar till 1,5 mL NaCl
• Inkubering
– 6h för Enterobacter och Enterokock
– 8h för Staphylokocker
• 102 isolat
Direkt från Blododlingsflaskor
gramnegativer
• 49 isolat
• E. coli 31 st, (K. pneumoniae 8 st, P. mirabilis 6 st, P.
aeruginosa 2 st, R. ornitolytica 1 st och E. cloacae 1
st)
• 11 mindre fel (mE)
Direkt från Blododlingsflaskor
•
•
•
•
•
54 isolat
S. aureus 22 st, resterande KNS
15 ej läsbara efter 8 timmar (KNS)
4 st väldigt allvarliga fel (VME)
2 st allvarliga fel (ME)
Direkt från blod
Sammanfattning
• fungerar bra för Enterobacteriasae
• fungerar för S. aureus men mer data skulle
behövas
• inte användbart för KNS
Begränsningar
Tobramycin 10 µg, 6 hours incubation
E. coli, 56 clinical isolates
20
• Kortare inkubering
• Kromogena plattor
• Färga in kolonier
16
14
No of ioslates
– Ser inte kolonin
18
12
R
10
I
8
S
6
4
2
24
22
20
18
16
14
12
10
6
– Dålig separation
8
0
Inhibition zone diameter (mm)
Tobramycin 10 µg, 8 hours incubation
E. coli, 56 clinical isolates
25
15
R
I
10
S
5
Inhibition zone diamter (mm)
24
22
20
18
16
14
12
10
8
0
6
No of ioslates
• Alla ab/agen komb.
inte möjliga
20
Möjligheter
• Vad kan vi göra med resultatet
– Resbestämning på morgonen från koloni och läsa på
eftermiddagen
– Resbestämning från urin och blododlingar
• Vad vill klinikerna ha?
• Viktigt med ID
Sammanfattning
• Snabb resistensbestämning är möjligt på 6 och
8 timmar
• Fungerande metod på urinprover
– Enterobacteriaceae
• Fungerande metod på blododlingar
– Enterobacteriaceae
– S. aureus
• Vad ska vi gör med resultatet?!
Vad säger EUCAST om D-AST
•
•
•
•
EUCAST rekommenderar inte DAST
Ett icke standardiserat inokulat
Risk för Blandkultur och pH effekter
Om man gör det ska man
– Validera
– Upprepa från ren koloni
– Om tunn växt rapportera inte S
– Inget stöd för kort inkuberingstid
