Monoclonal
Mouse Anti-Human
COX-2 (Cyclooxygenase-2)
1,2
Clone CX-294
Kod M3617
Avsedd användning
För diagnostisk användning in vitro.
Denna antikropp är avsedd för laboratorieanvändning för att kvalitativt identifiera med ljusmikroskopiCOX-2- uttryckande celler i normala och
neoplastiska vävnader med immunhistokemiska (IHC) testmetoder. Den kliniska tolkningen av närvaro eller frånvaro av positiv färgning ska
kompletteras med morfologiska och histologiska studier med ordentliga kontroller. Tolkning måste göras av kvalificerad specialist inom
ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Synonym
Cyklooxygenas-2
Sammanfattning och förklaring
Cyklooxygenas (COX) enzymerna, COX-1 och COX-2, är kritiska vid biosyntesen av prostaglandiner från arakidonsyra. Det humana COX-1
proteinet uttrycks konstitutivt i de flesta vävnader och funktioner i underhållet av vävnadshomeostas. Icke-steroida anti-inflammatoriska
medel (NSAIDs) är effektiva vid minskning av det inflammatoriska svaret genom blockering av båda COX-enzymerna. COX-2 är ett 70 kD
inducerbart enzym som ansvarar för prostaglandinsyntesen på inflammationsplatsen.3 COX-2-uttrycket har också länkats till carcinogenes,
och specifikt har COX-2-hämmare visats ha antitumöreffekter.4,5
Uttrycket av COX-2, enligt bestämning genom immunohistokemi, har rapporterats i en rad olika normala och neoplastiska vävnader. Bland
neoplastiska vävnader påvisades heterogent cytoplasmiskt uttryck av COX-2 i kolorektala adenocarcinom, medan normal kringliggande
vävnad visade svag färgning och normal kolon var negativ.6,7 COX-2-protein befanns uttryckt i ett subset av bröstadenocarcinom och
närliggande duktala carcinom in situ. Med användning av RT-PCR, uppvisade COX-2 mRNA från brösttumörer en ökning över mRNAuttrycket i parade normala prov.8 Ökat COX-2-uttryck observerades i lungadenocarcinom vid jämförelse med normalt bronkialt
epitelcellsuttryck.9,10 En majoritet av skvamösa esofaguscellcarcinom och skvamösa adenocarcinom uppvisade heterogent cytoplasmiskt
COX-2-uttryck, medan svagt eller inget uttryck hittades i normalt skvamöst epitel i esofagus respektive Barretts slemhinna.11 COX-2
proteinuttryck har detekterats i både normala neuroner och astrocytiska gliom.12 Majoriteten av primärt maligna melanom befanns uttrycka
COX-2, medan benigna nevi och närliggande normalt epitel var negativt.13 COX-2 har också påvisats i: gastriska adenocarcinom,14
skivepitelcancer i huvud och hals,15 carcinom i bukspottskörteln,16,17 maligna feokromocytom,18 testikelcancer,19 och skivepitelcancer i
urinblåsan.20 COX-2 påvisades också i subset av: äggstockscarcinom,21 prostatacarcinom,22 invasiva övergångscellcarcinom i urinblåsan,23
njurcellscarcinom,24 och hepatocellulära carcinom.25
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer för:
(1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning, (5) Färgningsprocedur,
(6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Ingående reagenser
Monoklonal mus-antikropp levererad i flytande form som vävnadskultursupernatant i 0,05 mol/L Tris-HCl, pH 7,2, och 0,015 mol/L
natriumazid. Denna produkt innehåller stabiliserande protein.
Klon: CX-2941,2
Isotyp: IgG1, kappa
Mus IgG koncentration mg/L: Se etikett på flaskan.
M3617 kan användas vid en spädning på 1:100 vid utförande av IHC med EnVision+™ detektionssystem. Detta är endast riktlinjer.
Optimala antikroppskoncentrationer kan variera beroende på preparat och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium.
Immunogen
Syntetisk peptid motsvarande humana COX-2 aminosyror 580-5981,2
Specificitet
Klon CX-294 är specifik för peptiden som används för immunisering. I Western blotting och immunoprecipitationsexperiment har CX-294
visat sig identifiera den inducerbara humana COX-2 med hjälp av IL-1α eller PMA-stimulerade humana endotelceller från navelsträngen
(HUVEC); peptidblockering av antikroppen med COX-2-immunogen eliminerade all reaktivitet.1,2
Material som behövs, men inte ingår
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning och/eller detektionssystemets instruktioner. Föreslagna spädningsvätskor
för IHC-procedurer:
Antibody Diluent (kod S0809)
Följande negativa kontroll rekommenderas för IHC-procedurer:
Mouse IgG1 (kod X0931)
(109230-002)
305834SE_001 s. 1/3
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan NaN3, trots att
det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten
vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala och nationella föreskrifter.
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C. Får ej användas efter det utgå ngsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden
som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och
negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna. Kontakta Dako teknisk service om du observerar oväntad färgning som inte
kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det finns något problem med antikroppen.
Provpreparation
Paraffinsnitt:
Anti-COX-2 kan användas på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Förbehandling av vävnad med proteolytiska enzymer
rekommenderas inte.
De avparaffinerade vävnadssnitten måste värmebehandlas innan IHC-färgningsproceduren. Värmeinducerad epitopåtervinning (HIER)
innebär nedsänkning av vävnadssnitt i föruppvärmd buffertlösning som bibehåller temperaturen i ett vattenbad eller ånglåda (95–99 ºC).
Använd ett 20-minuters uppvärmningsprotokoll för HIER utförd vid 95–99 ºC; efter värmebehandlingen, låt kärlet med buffert och objektglas
svalna i 20 minuter vid rumstemperatur. Skölj ordentligt med buffert eller avjoniserat vatten. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till
objektglasen rekommenderas användning av Silanized Slides (silaniserade objektglas) (kod S3003).
Target Retrieval Solution
(Målåterfinningslösning) pH 9,0 (kod S2367 koncentrerad 10x) rekommenderas.
Kryostatsnitt och cellutstryk
Anti-COX-2 kan användas för märkning av acetonfixerade kryostatsnitt eller fixerade cellutstryk.
Färgningsprocedur
Följ den rekommenderade proceduren för det valda detektionssystemet.
Tolkning av färgningen
Det cellulära färgningsmönstret för anti-COX-2 är cytoplasmiskt.
Resultat-karakteristika
Normala vävnader 26
Vävnadstyp (# testade)
Binjure (3)
Benmärg (3)
Hjärna, cerebellum (3)
Hjärna, cerebrum (3)
Bröst (3)
Cervix (3)
Kolon (2)
Endometrium (3)
Esofagus (3)
Hjärta (3)
Njure (3)
Lever (3)
Lunga (3)
Mesotelceller (3)
Nerv, perifera (3)
Äggstock (3)
Bukspottkörtel (3)
Bisköldkörtel (3)
Hypofysen (3)
Prostata (3)
Spottkörtel (3)
Skelettmuskel (3)
Hud (3)
Tunntarm (3)
Mjälte (3)
Mage (3)
(109230-002)
Positivt färgade vävnadselement
3/3 cytoplasma hos binjurebarkceller
1/3 cytoplasma hos granulocytföregångare
0/3
3/3 svagt cytoplasmisk färgning av neuroner
3/3 cytoplasma hos bröstepitelceller
0/3
1/2 cytoplasma hos sällsynta glandulära celler
3/3 cytoplasma hos endometriala glandulära epitelceller
3/3 cytoplasma hos skelettmuskel
3/3 svag cytoplasmisk färgning av myocyter
3/3 cytoplasma hos njurtubuliceller
2/3 svag färgning av glomerulär mesangium
1/3 svag cytoplasmisk färgning av glomeruli
3/3 cytoplasma hos hepatocyter och epitelceller i gallgången
1/3 cytoplasma hos Kupfferceller
3/3 membran och cytoplasma hos det intra-alveolära membranet
2/3 cytoplasma hos bronkiala epitelceller
0/3
0/3
1/3 cytoplasma hos celler i inneslutna cystor
3/3 cytoplasma hos akinarceller och gångar
2/3 cytoplasma hos öceller
3/3 cytoplasma hos chief-celler
3/3 cytoplasma hos pituicyter i adenohypofys
3/3 cytoplasma och vissa membran hos prostatiska glandulära
epitelceller
3/3 cytoplasma och vissa membran hos duktala epitelceller
2/3 cytoplasma hos acini
1/3 cytoplasma i perimysium
3/3 cytoplasma hos fettkörtel
0/3
0/3
3/3 cytoplasma hos chief- och parietalceller
305834SE_001 s. 2/3
Testis (3)
Tymus (3)
Sköldkörtel (3)
Tonsill (3)
0/3
3/3 cytoplasma hos epitelceller
1/3 cytoplasma hos follikulära epitelceller
0/3
Referenser
1. Creminon C, Habib A, Maclouf J, Pradelles P, Grassi J, Frobert Y. Differential measurement of constitutive (COX-1) and inducible
(COX-2) cyclooxygenase expression in human umbilical vein endothelial cells using specific immunometric enzyme immunoassays.
Biochim Biophys Acta 1995;1254(3):341-8
2. Habib A, Creminon C, Frobert Y, Grassi J, Pradelles P, Maclouf J. Demonstration of an inducible cyclooxygenase in human endothelial
cells using antibodies raised against the carboxyl-terminal region of the cyclooxygenase-2. J Biol Chem 1993;268(31):23448-54
3. Hla T, Neilson K. Human cyclooxygenase-2 cDNA. Proc Natl Acad Sci USA 1992;89(16):7384-8
4. Stratton MS, Alberts DS. Current application of selective COX-2 inhibitors in cancer prevention and treatment. Oncology (Williston
Park). 2002;16(5 Suppl 4):37-51
5. Masferrer JL, Leahy KM, Koki AT, Zweifel BS, Settle SL, Woerner BM, Edwards DA, Flickinger AG, Moore RJ, Seibert K.
Antiangiogenic and antitumor activities of cyclooxygenase-2 inhibitors. Cancer Res 2000;60(5):1306-11
6. Sano H, Kawahito Y, Wilder RL, Hashiramoto A, Mukai S, Asai K, Kimura S, Kato H, Kondo M, Hla T. Expression of cyclooxygenase-1
and -2 in human colorectal cancer. Cancer Res 1995;55(17):3785-9
7. Sheehan KM, Sheahan K, O'Donoghue DP, MacSweeney F, Conroy RM, Fitzgerald DJ, Murray FE. The relationship between
cyclooxygenase-2 expression and colorectal cancer. JAMA 1999;282(13):1254-7
8. Half E, Tang XM, Gwyn K, Sahin A, Wathen K, Sinicrope FA. Cyclooxygenase-2 expression in human breast cancers and adjacent
ductal carcinoma in situ. Cancer Res 2002;62(6):1676-81
9. Achiwa H, Yatabe Y, Hida T, Kuroishi T, Kozaki K, Nakamura S, Ogawa M, Sugiura T, Mitsudomi T, Takahashi T. Prognostic
significance of elevated cyclooxygenase 2 expression in primary, resected lung adenocarcinomas. Clin Cancer Res 1999
May;5(5):1001-5
10. Hosomi Y, Yokose T, Hirose Y, Nakajima R, Nagai K, Nishiwaki Y, Ochiai A. Increased cyclooxygenase 2 (COX-2) expression occurs
frequently in precursor lesions of human adenocarcinoma of the lung. Lung Cancer 2000 Nov;30(2):73-81
11. Zimmermann KC, Sarbia M, Weber AA, Borchard F, Gabbert HE, Schror K. Cyclooxygenase-2 expression in human esophageal
carcinoma. Cancer Res 1999;59(1):198-204
12. Shono T, Tofilon PJ, Bruner JM, Owolabi O, Lang FF. Cyclooxygenase-2 expression in human gliomas: prognostic significance and
molecular correlations. Cancer Res 2001;61(11):4375-81
13. Denkert C, Kobel M, Berger S, Siegert A, Leclere A, Trefzer U, Hauptmann S. Expression of cyclooxygenase 2 in human malignant
melanoma. Cancer Res 2001;61(1):303-8
14. Lim HY, Joo HJ, Choi JH, Yi JW, Yang MS, Cho DY, Kim HS, Nam DK, Lee KB, Kim HC. Increased expression of cyclooxygenase-2
protein in human gastric carcinoma. Clin Cancer Res 2000;6(2):519-25
15. Chan G, Boyle JO, Yang EK, Zhang F, Sacks PG, Shah JP, Edelstein D, Soslow RA, Koki AT, Woerner BM, Masferrer JL, Dannenberg
AJ. Cyclooxygenase-2 expression is up-regulated in squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer Res 1999;59(5):991-4
16. Okami J, Yamamoto H, Fujiwara Y, Tsujie M, Kondo M, Noura S, Oshima S, Nagano H, Dono K, Umeshita K, Ishikawa O, Sakon M,
Matsuura N, Nakamori S, Monden M. Overexpression of cyclooxygenase-2 in carcinoma of the pancreas. Clin Cancer Res
1999;5(8):2018-24
17. Tucker ON, Dannenberg AJ, Yang EK, Zhang F, Teng L, Daly JM, Soslow RA, Masferrer JL, Woerner BM, Koki AT, Fahey TJ 3rd.
Cyclooxygenase-2 expression is up-regulated in human pancreatic cancer. Cancer Res 1999;59(5):987-90
18. Salmenkivi K, Haglund C, Ristimaki A, Arola J, Heikkila P. Increased expression of cyclooxygenase-2 in malignant
pheochromocytomas. J Clin Endocrinol Metab 2001;86(11):5615-9
19. Hase T, Yoshimura R, Matsuyama M, Kawahito Y, Wada S, Tsuchida K, Sano H, Nakatani T. Cyclooxygenase-1 and -2 in human
testicular tumours. Eur J Cancer 2003;39(14):2043-9
20. Shirahama T, Sakakura C. Overexpression of cyclooxygenase-2 in squamous cell carcinoma of the urinary bladder. Clin Cancer Res
2001;7(3):558-61
21. Denkert C, Kobel M, Pest S, Koch I, Berger S, Schwabe M, Siegert A, Reles A, Klosterhalfen B, Hauptmann S. Expression of
cyclooxygenase 2 is an independent prognostic factor in human ovarian carcinoma. Am J Pathol 2002;160(3):893-903
22. Kirschenbaum A, Klausner AP, Lee R, Unger P, Yao S, Liu XH, Levine AC. Expression of cyclooxygenase-1 and cyclooxygenase-2 in
the human prostate. Urology 2000;56(4):671-6
23. Mohammed SI, Knapp DW, Bostwick DG, Foster RS, Khan KN, Masferrer JL, Woerner BM, Snyder PW, Koki AT. Expression of
cyclooxygenase-2 (COX-2) in human invasive transitional cell carcinoma (TCC) of the urinary bladder. Cancer Res 1999;59(22):564750
24. Miyata Y, Koga S, Kanda S, Nishikido M, Hayashi T, Kanetake H. Expression of cyclooxygenase-2 in renal cell carcinoma: correlation
with tumor cell proliferation, apoptosis, angiogenesis, expression of matrix metalloproteinase-2, and survival. Clin Cancer Res
2003;9(5):1741-9
25. Bae SH, Jung ES, Park YM, Kim BS, Kim BK, Kim DG, Ryu WS. Expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) in hepatocellular carcinoma
and growth inhibition of hepatoma cell lines by a COX-2 inhibitor, NS-398. Clin Cancer Res 2001;7(5):1410-8
26. IHC003 Report On File
Edition 06/07
(109230-002)
305834SE_001 s. 3/3
