Coombsreactive Antisera

[SE]
4.
Coombsreactive Antisera
För påvisande av erytrocytära antigener i en indirekt
antiglobulin-test.
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
◄
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
[REF]
[ACT]
[PRES]
808 120
808 131
808 141
808 145
808 150
5 ml
2 ml
2 ml
1 ml
1 ml
Anti-k (KEL2)
Anti-Kpa (KEL3)
Anti-Kpb (KEL4)
Anti-Jsa (KEL6)
Anti-Jsb (KEL7)
808 181
2 ml
Anti-Jkb (JK2)
808 186
2 ml
Anti-Fya (FY1)
808 191
2 ml
Anti-Fyb (FY2)
808 216
2 ml
Anti-Lua (LU1)
808 230
1 ml
Anti-Xga (XG1)*
808 260
1 ml
Anti-Wra (DI3)*
808 270
1 ml
Anti-Dia (DI1)*
Aktivitet / lägsta titer
Konserveringsmedel: < 0,1 % NaN3
|
|
|
|
|
| 0197
| 0197
| 0197
|
|
|
|
Tvätta erytrocyterna 3 ggr med isoton koksaltlösning. Dekantera den
kompletta supernatanten.
5. Tillsätt 2 droppar anti-humant-globulin till sedimentet och blanda.
6. Centrifugera 20 sekunder vid 800 - 1000 x g.
7. Skaka försiktigt upp innehållet och kontrollera med avseende på
agglutination.
En positiv och en negativ kontroll skall inkluderas vid alla undersökningar.
Resultatens tolkning
Utvärdering av reaktionens styrka sker i enlighet med rekommendationerna i
Technical Manual (1):
Reaktionens
Agglutinationsbild
styrka
4+
Ett stort agglutinat
3+
Flera stora agglutinat
2+
Mellanstora agglutinat, klar bakgrund
1+
Små agglutinat, oklar bakgrund
+/Knappt synlig agglutination, oklar bakgrund
Ingen agglutination
Avsedd användning
Coombsreaktiva antisera är polyklonala reagenser för bestämning av
erytrocytära antigener i olika blodgruppssystem. Kell-systemet (k, Kpa, Kpb, Jsa,
Jsb), Duffy-systemet (Fya, Fyb), Lutheran-systemet (Lua), Kidd-systemet (Jkb),
Xg-systemet (Xga), Diego-systemet (Dia, Wra).
De lämpar sig för utförande av en indirekt antiglobulintest i teströr.
Funktionsegenskaper och begränsningar av metoden
•
Vid negativa resultat i ett indirekt antiglobulintest måste ett nytt test med
antikroppsklädda reagensceller (t.ex. Coombscell-E [REF] 816 030)
utföras.
•
Otillräcklig eller felaktig tvätt kan leda till falska negativa reaktioner. Små
restmängder av serum/plasma kan neutralisera det antihumana globulinet.
•
Kraftigt lipemiskt, ikteriskt eller mikrobiologiskt kontaminerade prover kan
leda till falska resultat.
•
Vid tvetydiga resultat rekommenderas tvätt av de röda blodkropparna
minst två gånger.
•
Anti-Dia innehåller ytterligare antikroppar mot det lågfrekventa antigenet
HUT (MNS19). HUT-antigenet är känsligt för papain/ficin. Dia-antigenet är
resistent mot papain/ficin. Du kan försöka få ett specifikt positivt resultat
genom att testa med papain-/ficinbehandlade röda blodkroppar.
•
Tillstånd som kan orsaka falskt positiva resultat är:
Kontaminering av prov eller reagens
Autoantikroppar
Inkorrekt förvaring eller beredning av röda blodkroppar
Antikroppar mot antibiotika eller andra reagens
Kalla antikroppar
Positivt direkt antiglobulintest
Okända åtföljande antikroppar mot lågfrekventa antigen
Kontakta Bio-Rad-Service (tel 06103–3130-611) om orsakerna till tvivelaktiga
testresultat inte kan klarläggas.
Metodbeskrivning
Metoden utgörs av en hemagglutinationstest. Erytrocyternas antigener reagerar
med de korresponderande antikropparna i testreagensen. Immunglobuliner av
klass IgG är i stånd att binda till erytrocyternas korresponderande antigener.
Detta leder inte till en direkt agglutinationsreaktion. Genom att tillsätta
polyspecifikt anti-humant-globulin länkas de med antikroppar klädda
erytrocyterna samman och en agglutinationsreaktion (indirekt antiglobulintest)
äger rum.
Hållbarhet och förvaring
Flytande reagenser: Efter det att reagensen öppnats är produkten hållbar fram
till angivet bäst-före-datum, förutsatt att den förvaras vid 2...8°C. Bäst-föredatum anges på reagensens etikett.
Torkade reagenser (lyofiliserade): I lyofiliserad form är produkten hållbar fram
till det bäst-före-datum som är angivet på reagensens etikett, förutsatt att den
förvaras enligt rekommendationerna. Efter det att reagensen suspenderats kan
den förvaras 4 veckor i kylskåp vid 2...8 °C. ◄
Reagens
Coombsreaktiva antisera är polyklonala reagenser och innehåller som reaktiva
komponenter antikroppar av immunglobulinklass IgG. Antisera är reaktiva vid
37 °C. De utvinns ur human plasma och lämpar sig för en indirekt
antiglobulintest i teströr och även för LISS-metoden (t ex med MLB 2 , se
bruksanvisningen till MLB 2). Anti-Jsa lämpar sig inte för LISS-metoden. De
flytande reagenserna är bruksfärdiga. Polyklonala reagens från human plasma
kan ha en ljus brunaktig färg. De torkade reagenserna (lyofiliserade) måste
lösas upp i 1 ml aqua dest. före användning.
Det bovina albumin som används vid framställning av reagenserna stammar
från BSE-fria boskapsbestånd.
Varningar och försiktighetsåtgärder
Följande risk- och säkerhetsfraser gäller endast frystorkad/frystorkat Anti-Xga
[REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 och Anti-Dia [REF] 808 270:
Faroangivelser:
•
H302 Skadligt vid förtäring.
•
H312 Skadligt vid hudkontakt.
•
H412 Skadliga långtidseffekter för vattenlevande organismer.
Skyddsangivelser:
•
P273 Undvik utsläpp till miljön.
•
P280 Använd skyddshandskar/skyddskläder/ögonskydd/ansiktsskydd.
•
P312 Vid obehag, kontakta GIFTINFORMATIONSCENTRALEN/läkare.
•
P501 Innehållet/behållaren lämnas till insamlingsställe för farligt avfall
•
Använd inte produkten om flaskorna är skadade.
•
En grumling av produkten kan vara ett tecken på bakteriell förorening. I
sådana fall får produkten inte användas och tillverkaren skall utreda
orsaken till grumlingen.
•
Alla arbetstekniker skall utföras i enlighet med de anvisningar som ges av
tillverkaren. Användaren ansvarar för alla avvikelser från tillverkarens
anvisningar.
•
Använda tester måste kasseras som farligt riskavfall. Information om
avfallshantering finns i säkerhetsdatabladet.
•
Allt material av humant ursprung som använts i denna produkt har testats
ej reaktivt för HbsAg, anti-HCV och anti-HIV-1/-2 med FDA-licenserade
testmetoder. En infektion med dessa infektiösa patogener är därför
osannolik. Alla produkter av humant ursprung skall ändå hanteras som
potentiella överförare av hepatit, HIV och andra infektiösa sjukdomar. Det
rekommenderas att vidta lämpliga säkerhetsåtgärder. ◄
Användaren måste med jämna mellanrum genomföra en intern kvalitetskontroll.
För detta ändamål skall antisera kontrolleras med testerytrocyter som bär det
korresponderande antigenet i heterozygot form.
*
*H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501
[IVD] Reagens för in vitro-diagnostik
Testen får endast utföras av utbildad laboratoriepersonal. [ACT] framgår av
flaskans etikett. De symboler som används överensstämmer med standarden
EN 980. Symboler som inte ingår i EN 980 förklaras i texten.
Reagenser och material som erfordras men inte medföljer
•
Pipetter (droppvolym 40-50 µl)
•
Aqua dest.
•
Isoton koksaltlösning
•
Anti-humant-globulin (t ex Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120,
804 115 och 804 130)
•
MLB 2 [REF] 805 205, 805 200
•
IgG-sensibiliserade erytrocyter (t ex Coombscell-E [REF] 816 030)
•
Glasrör
•
Laboratoriecentrifug
Provtagning, provförvaring och transport
Provtagning av blod sker i enlighet med allmänt vedertagna metoder. Använd
färska prov som inte uppvisar hemolys (nativt blod, EDTA- eller citratblod). Om
en erytrocytsuspension krävs för metodens utförande skall denna beredas av
erytrocyterna i det centrifugerade blodprovet (t ex 2 min vid 1000 x g) med
isoton koksaltlösning som suspensionsmedium.
Testutförande (indirekt antiglobulintest)
Rörtest
1. Suspendera de erytrocyter som skall undersökas till 3 -5 procent i isoton
koksaltlösning.
2. Blanda 1 droppe reagens och 1 droppe erytrocytsuspension i ett märkt rör.
3. Inkubera 30-60 minuter vid 37 °C. Inkubera 60 min med Anti-Jsa.
Litteratur
(1) Technical Manual, 17th edition, Sect. 1, American Association of Blood
Banks
Nyckel: Stryk under = Ytterligare eller signifikant förändring ◄= Borttagande av text
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
186164/33 – 04/2016