Biotestcell

[SE]
Biotestcell-I8/I11
Steg 3: Indirekt antiglobulintest
a) Tvätta erytrocyterna 3 ggr med isoton koksaltlösning. Dekantera därefter den
kompletta supernatanten.
b) Tillsätt 2 droppar anti-humant-globulin till sedimentet och blanda.
c) Centrifugera 2 minuter vid 150-200 x g eller 20 sekunder vid 800-1000 x g.
d) Skaka försiktigt upp innehållet och kontrollera med avseende på agglutination.
Med hjälp av den indirekta antiglobulintesten kan inkompletta antikroppar som antiDuffy, anti-Kidd, samtliga Rh-antikroppar och liknande påvisas.
Testerytrocyter för identifiering av erytrocytära antikroppar
[REF]
816 020
8 x 4 ml
Biotestcell-I8
[REF]
816 021
11 x 4 ml
Biotestcell-I11
[PRES]
Konserveringsmedel:
0,01 % Neomycinsulfat, 0,033 % Kloramfenikol,
5 ppm Amphotericin B
[IVD] Reagens för in vitro-diagnostik
Testen får endast utföras av utbildad laboratoriepersonal. De symboler som används
överensstämmer med standarden EN 980. Symboler som inte ingår i EN 980
förklaras i texten.
Avsedd användning
Identifieringen av antikroppar syftar till att bestämma antikroppar mot
erytrocytantigener. När irreguljära antikroppar påvisas i en antikroppstest bestäms
deras specificitet och kliniska betydelse genom antikroppsidentifieringen.
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 används för exakt identifiering av irreguljära antikroppar
som dessförinnan påvisats i en antikroppstest med Biotestcell, Biotestcell-P1, P2 eller
Biotestcell-P3.
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 används i rörtest eller i fastfas-testen Solidscreen II och
lämpar sig för alla rutinundersökningar. Användning av dessa Reagent Red Blood
Cells med Solidscreen II på TANGO optimo och TANGO infinity är inte godkänd av
Health Canada (den kanadensiska hälsovårdsmyndigheten).
Metodbeskrivning
Metoden utgörs av en hemagglutinationstest, alternativt fastfas-test. De antigener
som befinner sig på testerytrocyterna reagerar antingen direkt eller efter tillsättning av
anti-humant-globulin med de korresponderande antikropparna i det serum eller den
plasma som skall undersökas. Om testen utförs enligt rörmetoden sker en
agglutinationsreaktion. I fastfas-testet Solidscreen II bildas en cellmatta i brunnarna
på mikrotestplattan.
Reagens
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 är testerytrocyter med polyvalenta antigener.
Testcellerna har följande egenskaper: D, C, Cw, E, c, e, K, k, Fya, Fyb, Lua, Lub, Jka,
Jkb, Jsb, M, N, S, s, Lea, Leb, P1, Xga, Coa. Med Biotestcell-I 11 kan dessutom
antikroppar mot Dia, Kpa och Jsa identifieras.
Det exakta antigenmönstret för varje lot framgår av bifogad tabell.
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 lämpar sig även för användning tillsammans med
enzymer (papain, ficin, bromelin, trypsin osv) eller med supplement (albumin, LISS).
Livslängden för enzymbehandlade erytrocyter framgår av bruksanvisningen till
respektive enzym som har använts.
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 är suspenderade ca 3 %-igt i modifierad alseverslösning och kan omedelbart användas efter försiktig resuspendering.
Reagenser och material som erfordras men inte medföljer
3-stegs rörtest
•
Pipetter (droppvolym 40-50 µl)
•
Isoton koksaltlösning
•
Anti-human globulin (t ex Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115
och 804 130 eller Anti-Human-Globulin Solidscreen II [REF] 806 515)
•
IgG-sensibiliserade erytrocyter (t ex Coombscell-E [REF] 816 030)
•
Glasrör
•
Laboratoriecentrifug
Solidscreen II
För ytterligare information se även användarinformation för Solidscreen II Strip ([REF]
806 521). ◄
Provmaterial
Använd färskt serum eller plasma. För påvisning av komplementberoende
antikroppar får inte plasma användas, eftersom antikoagulantia inhiberar
komplement. Endast serum eller EDTA-plasma är lämpligt för testning med TANGO
optimo och TANGO infinity.
Testutförande
Resuspendera testerytrocyterna
rumstemperatur.
före
användning
och
se
till
att
de
har
3-stegs rörtest
När enzym eller supplement (albumin eller LISS) används skall instruktionerna i
motsvarande bruksanvisning följas.
Steg 1: Omedelbar centrifugeringstest
a) Placera 2 droppar av ovan beskrivet provmaterial i vart och ett av de märkta
rören. En autokontroll skall inkluderas. Erytrocyterna för autokontrollen skall
tvättas två gånger med isoton koksaltlösning (NaCl).
b) Tillsätt 1 droppe av testerytrocyterna till vart och ett av de korresponderande
rören och blanda. (Om så önskas kan en andra sats rör med enzymbehandlade
respektive albuminbehandlade Biotestcell-I 8 eller –I 11 undersökas.)
c) Centrifugera 2 minuter vid 150-200 x g eller 20 sekunder vid 800-1000 x g.
d) Kontrollera med avseende på hemolys och skaka upp försiktigt för att avläsa
agglutinationens reaktionsstyrka.
Redan med hjälp av den omedelbara centrifugeringstesten är det ofta möjligt att
påvisa Anti-M, -N, -P och köldantikroppar.
Steg 2: Centrifugeringstest efter värmeinkubation
a) Inkubera 30-60 minuter vid 37 °C.
b) Centrifugera 2 minuter vid 150-200 x g eller 20 sekunder vid 800-1000 x g.
c) Kontrollera med avseende på hemolys och skaka upp försiktigt för att avläsa
agglutinationens reaktionsstyrka.
Med hjälp av centrifugeringstesten efter värmeinkubation kan framför allt kompletta
Rh-antikroppar liksom en del inkompletta antikroppar påvisas.
Solidscreen II
Se den utförliga bruksanvisningen till Solidscreen II Strip ([REF] 806 521) angående
exakt testutförande och information om hur resultatet skall tolkas.
Resultatens tolkning
3-stegs rörtest
De resulterande antigenmönstren för Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 jämförs med
tabellerna och utvärderas. Negativa reaktioner indikerar vilka antikroppar som kan
uteslutas. Positiva reaktioner indikerar förekomst av antikroppar. Dessa är enkla att
identifiera genom att avläsa antigenmönstret. En antigenundersökning av
erytrocyterna skall anslutningsvis genomföras för att verifiera resultatet. Påvisade
antigener utesluter förekomst av korresponderande antikroppar, om inte autoantikroppar förekommer.
Negativa resultat i antiglobulintesten skall kontrolleras med IgG-sensibiliserade celler
i en rörtest. Tillsätt 1 droppe IgG-klädda erytrocyter, blanda och centrifugera 2
minuter vid 150-200 x g eller 20 sekunder vid 800-1000 x g.
Reaktion positiv:
Reaktion negativ:
Den negativa reaktionen i den indirekta antiglobulintesten
gäller, reaktivt anti-humant-globulin förekommer.
Ett tekniskt fel har gjorts och testen måste upprepas.
Negativa reaktioner i 3-stegs-testen liksom efterföljande positiv reaktion med IgGsensibiliserade celler betyder att serumet inte innehåller några påvisbara antikroppar
mot en av de listade antigenerna (bifogat antigenmönster).
För att göra en kvantitativ antikroppspåvisning titreras serumet och blandas med
erytrocyterna i Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11. Undersökningsmetoden rättar sig efter
den funna antikroppen (koksaltmiljö, albuminmiljö, indirekt antiglobulin- respektive
enzymtest).
Utvärdering av reaktionens styrka sker i enlighet med rekommendationerna i
Technical Manual (1):
Reaktionens styrka
Agglutinationsbild
4+
Ett stort agglutinat
3+
Flera stora agglutinat
2+
Mellanstora agglutinat, klar bakgrund
1+
Små agglutinat, oklar bakgrund
+/Knappt synlig agglutination, oklar bakgrund
Ingen agglutination
Hållbarhet och förvaring
Efter det att flaskan öppnats är produkten hållbar fram till angivet bäst-före-datum,
förutsatt att den förvaras vid 2...8°C. Bäst-före-datum anges på reagensens etikett.
Eftersom cellernas antigenitet kan avta, bör cellerna inte användas efter bäst-föredatum. Information om användning av reagenser på TANGO optimo eller TANGO
infinity finns i respektive användarhandbok.
Använd inte produkten om flaskorna är skadade.
Funktionsegenskaper och begränsningar av metoden
Eftersom en del antikroppar uppvisar en doseffekt, skall hänsyn tas till
antigentätheten på testcellerna (arvsanlag av homozygot eller heterozygot typ för
allelen) när resultatet utvärderas.
Ett heterozygot uttryck av antigenet kan beroende på testmetoden leda till att svaga
antikroppar inte registreras. I ytterst sällsynta fall kan HLA-antigener i produkten leda
till falskt positiva reaktioner.
Reaktiviteten kan avta under hållbarhetstiden. Avtagandet av reaktiviteten är delvis
beroende på individuella givar egenskaper som ej kan kontrolleras eller förutses av
producenten.
Kontakta Bio-Rad-Service (tel +49 6103–3130-611) om orsakerna till tvivelaktiga
testresultat inte kan klarläggas.
Varningar och försiktighetsåtgärder
•
En grumling, hemolys eller andra synliga förändringar av produkten kan vara
ett tecken på bakteriell förorening. I sådana fall får produkten inte användas
och tillverkaren skall utreda orsaken till grumlingen.
•
Manuella arbetstekniker skall tillämpas i enlighet med de anvisningar som ges
av tillverkaren. Användaren ansvarar för alla avvikelser från tillverkarens
anvisningar.
•
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 lämpar sig för användning i Solidscreen II-testen
och
därmed
även
för
användning
i
det
helautomatiska
blodgrupperingssystemet TANGO optimo och TANGO infinity. Användning i
andra automatiska system skall valideras av användaren själv och under eget
ansvar.
•
Använt testmaterial skall betraktas som farligt avfall. Information om hantering
av använda reagens framgår av säkerhetsdatabladet.
•
Allt material av humant ursprung som använts i denna produkt har testats ej
reaktivt för HbsAg, anti-HCV och anti-HIV-1/-2. Alla produkter av humant ursprung
skall ändå betraktas som potentiella överförare av hepatit, HIV och andra
infektiösa sjukdomar. Det rekommenderas att vidta lämpliga säkerhetsåtgärder.
•
Produkten innehåller naturligt gummilatex som kan orsaka allergiska reaktioner
•
Interna kvalitetskontroller skall utföras regelbundet enligt nationella riktlinjer.
Biotestcell-I8/ Biotestcell-I11 tillverkas var 4:e vecka.
Litteratur
(1) Technical Manual, 17th edition, Sect. 1, American Association of Blood Banks
Nyckel: Stryk under = Ytterligare eller signifikant förändring ◄= Borttagande av text
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
| 0197
186177/23 – 07/2016