Kopiera DNA med hjälp av
PCR-metoden
Niklas Dahrén
Förstliteallmänkunskapom
kromosomer,DNA,generetc.
VarjekromosombeståravenlångDNAmolekylsomärlindadrunthistoner
EngenärenlitendelavenDNA-molekyl
ochvarjegenfungerarsomenritningförett
speciDiktprotein
Vårakromosomerinnehållerstora
mänger”skräp-DNA”
Dengenetiskavariationenärhögrei
”skräp-DNA:t”jämförtmedidedelar
sominnehållergener
”Skräp-DNA”beståravSTR-områden–Dessa
utnyttjasvidenkriminaltekniskDNA-analys
0 STR-områden(shorttandemrepeat)beståravkortasekvensersom
upprepasettvisstantalgånger.Antaletupprepningarochdärmed
längdenavettSTR-områdeskiljersigoftamellanpersoner.
MinsttioSTR-områdenanalyseras
0 MananalyserarminsttioSTR-områdennärmanskagöraenDNA-
analys.
0 OmmanbaraanalyserarettSTR-områdeDinnsdetenriskattlängden
avdettaområdeärexaktlikaförtvåpersoner.Däremotär
sannolikhetenatttvåpersonerharexaktlikalånglängdavtioolika
STR-områdenväldigtliten.
KriminaltekniskDNAanalysifemsteg!
KriminaltekniskDNA-analysifemsteg:
1. SamlainDNA:t:Polisensamlarincellerfrånbrottsplatsenoch/eller
frånmisstänktapersoner.DetkanvaracellersomDinnsisperma,
blod,salivetc.
2. ExtraheraDNA(renafram):DNA:trenassedanframurcellernamed
hjälpavolikaämnensomtillsättsochmedhjälpavencentrifug.
3. KopieraSTR-områdenamedPCR:DetioSTR-områdenakopieras
uppistoramängdermedhjälpavens.k.PCR-maskin.Detinnebär
attdetkommerendastvaradessaDNA-områdensomingåriden
avslutandeanalysen.DessaområdenkommerävenDinnasistora
mängdersåattdesynsordentligtnärmangörsjälvaanalysen.
GenetiskaDingeravtryckifemsteg
(forts.):
4. SorteraSTR-områdenaefterstorlek:NästastegärattsorteraSTR-
områdenautifrånstorlekmedantigenengelelektroforeselleren
kapillärelektrofores.
5. JämföraDNAt:Sistastegetärattjämföradetuppkomna”bandmönstret”
fråndenmisstänkapersonenmedmönstretfrånbrottsplatsen.Om
mönstrenöverensstämmerkanpersonenbindastillbrottsplatsenochev.
tillbrottet.
Principenbakomgelelektrofores
0 Ielektroforesen”tvingar”manSTR-områdena
att”vandra”genomengel.
0 Vandringenskerp.g.a.attenspänning
kopplaspå.DNAtärnegativtladdatoch
kommerdärförvandramotpluspolen.
0 GelensomSTR-områdenaskavandragenom
liknaren”djungel”.JustörreSTR-områdena
ärdestosvårareärdetfördessaatttasig
igenom”djungeln”.
0 Efterenbestämdtidstängermanav
spänningen.KortaSTRhardåvandratlångti
gelenmedanlångaharvandratenkortbit.
KortaSTR-områdenvandrar
snabbastgenomgelen
Resultatetavgelelektroforesenvisasgenom
fotograferingavDNA-banden
0 GelenläggspåettUV-bordoch
fotograferasmedendatorkamera.
0 UV-ljusetfårDNA-bandenatt
Dluorescera.Enkamerakandå
fotograferaavgelen.
0 Förstmåstedockgelenbehandlas
medettämneförattDNA-banden
skakunnaDluorescera
(etidiumbromidförbästresultat).
Statenskriminaltekniskalaboratorium
använderdockkapillärelektroforesistället!
Resultatetavkapillärelektroforesenvisasgenom
ettelektroferogram
0 VarjetoppvisarettSTR-
område.
0 Tvåtopparalldelesnära
varandraärsammaSTRområdefastpåolika
kromosomer(denenafrån
pappanochdenandrafrån
mamman).
0 Dengrönasiffranangerlängden
avSTR-området(egentligen
antaletggrsomdenrepetitiva
sekvensenuppreparsig).
Resultatetkanävenpresenterasientabell
0 Tabellenvisar10olikaSTR-områdensomharanalyserats.
0 SiffrornaangerlängdenavSTR-området(egentligenantaletggrsomden
repetitivasekvensenuppreparsig).
0 VarjeindividharförståstvåexemplaravvarjeSTR(enfrånmammanoch
enfrånpappan)ochdärförsynstvåsiffrorivarjeruta.
Fördelenmedkapillärelektroforesjämförtmed
gelelektrofores
1. Mycketkänsligaremetod:KansepareraDNA-fragmentsom
endastavvikerfrånvarandrailängdmedettfåtalkvävebaser.
2. KananalyseraettstortantalDNA-proversamtidigt.
3. Analysenärdatoriserad:Resultatetavanalysenblirettdiagram
medtopparochsiffror(s.k.elektroferogram)somenkeltoch
smidigtkanjämförasmeddiagramfrånandraanalyser.
SegärnaflerfilmeravNiklasDahrén:
h"p://www.youtube.com/Kemilek4oner
h"p://www.youtube.com/Medicinlek4oner
