Utvärdering av ”rosa glukosrören”
Ian Jones
Kem lab
Falun
2011-10-26
Rutin mätmetoder för glukos
Glukosoxidas (1963)
Glukos + O2 → Glukonsyra + H2O2
Amperometrisk detektion
Clarke elektrod (tex Yellow Spring, Blodgasinstrument)
H2O2 → 2H+ + O2 + 2eFärgutveckling (tex Vitros glukos slide)
2 H2O2 + 4-aminoantipyrin + 1,7-dihydroxinaftalen → röd färg
2011-10-26
Mätning av glukos idag 2
Glukoshexokinas
D-Glukos + ATP → Glukos-6-PO4 + ADP
Glukos-6-PO4 dehydrogenas
Glukos-6-PO4 + NADP+ → 6-fosfoglukonat + NADPH + H+
NADPH mäts vid 340 nm
Glukosdehydrogenas
D-glukos + NAD → D-glukolakton + NADH +H+
NADH mäts vid 340 nm
2011-10-26
Kalibrering
De flesta metoderna är spårbara till:
NIST 917c
Renhet bestämd med ”differential scanning calorimetry” och GC/MS
(Kan köpas, ca 2500 kr för 50 g)
2011-10-26
Krav på metoderna
Biologiska variationen (intraindividuell variation)
CVws
Friska: fP-Glukos ca 5 % (CVa krav ca 2,5 %)
Diabetes: fP-Glukos ca 30 %
Total error 6,4 %
(Carsen S et al. Clin Chem Lab Med 2011 49(9))
2h glukosbelastning CVws = 16,6 %
(Selvin S et al. Arch Intern Med 2007;167(14):1545-1551)
2011-10-26
Svenska kem lab bra på att bestämma glukos
Bra med Equalis ”referensmaterial” utskick
Problem med preanalys
2011-10-26
Hur ska vi ta provet?
Enligt WHO (Definition and Diagnosis of Diabetes Mellitus and Intermediate Hyperglycaemia 2006)
•vP-Glukos bör vara standardmetod för mätning och rapportering.
•Snabb separation av plasma (inom minuter) eller helblod i isbad högst 30 min innan
centrifugering.
•WHO erkänner att kapillär provtagning finns, ssk i U-länder och därför uppge den
som ett alternativ för 2 h belastningsprov.
Det är välkänt att……
I ”vanliga” provrör minskar glukos 5 – 7 % per timme pga glykolys i rumstemp.
I ”fluorid rör” har fluorid mycket liten effekt på glykolys under de första 1-3 h efter
provtagningen (Sidebottom, RA et al. Clin Chem 1982;28:190-192. Chan et al Clin
Chem 1989;35:315-7.)
Förbättring………….
2011-10-26
Terumo Venosafe® Glycaemia (FC-mix) rör
Venosafe Glycaemia rör innehåller NaF, citratbuffert och
EDTA (som pulver)
pH av blodprovet blir ca 5,5
Surgörningen innebär att glykolys hämmas omedelbart i
erytrocyter, leukocyter och trombocyter.
NaF-tillsats förlänger hållbarheten. EDTA förstärker
effekten genom bindning till Mg++
Rekommenderad hållbarhet som helblod:
Upp till 48 h i rumstemp, 72 h i kyl
2011-10-26
Terumo Venosafe® Glycaemia (FC-mix) rör 2
Patent söktes i USA 1986 och beviljades till Terumo 1988
Uchida, K et al. A new method of inhibiting glycolysis in blood samples. Clin
Chim Acta 172;(1988): 101-108
Rörtypen har använts nästan genomgående i Finland i ca 15 år
Har en relativ stor spridning i Danmark sedan 2004
Använts av ett ökande antal landsting i Sverige sedan 2008
Uppmärksammades i USA Gambino, R et al. Acidification of blood is superior
to sodium fluoride alone as an inhibitor of glycolysis. Clin Chem 2009;55:10191021
2011-10-26
Uchida, K et al. A new method of inhibiting
glycolysis in blood samples. Clin Chim Acta
1988;177:101-108
2011-10-26
Figure 1. Changes in glucose levels (%) compared with the reference
samples (0 h). Samples were stored as whole blood and tubes were
centrifuged just before analyses.
Väisänen et al Kliinlab 2002:19(3-4): 48-50
2
0
Change in glucose (%)
-2
-4
1. tube (NaF/EDTA)
2. tube (Li-hep)
-6
3. tube (NaF/K-oksal)
4. tube (FC-mix)
-8
-10
-12
-14
0
0.5
1
2
Time (h)
2011-10-26
6
24
Gambino R et al Clin Chem 2009;55:1019-1021
2011-10-26
Fluoride has no effect on the rate of decline in glucose
concentrations in the first 1 – 2 h after blood is collected and
glycolysis continues for up to 4 h in samples containing
fluoride….A recent publication showed that acidification
of the blood sample inhibits glycolysis in the first 2 h after
phlebotomy (Gambino 2009) but the collection tubes used
in the study are not commercially available. Placing tubes
in ice water immediately after collection may be the best way
to stabilize glucose initially but is not a practical solution in
most clinical situations. Separating cells from plasma within
minutes is also effective, but impractical.
Sacks DB. A1C versus Glucose testing: A Comparison.
Diabetes Care 34;Feb 2011: 518-523
2011-10-26
Recommendation: To minimize glycolysis one should
place the sample tube immediately in an ice-water
slurry, and the plasma should be separated by the cells
within 30 minutes. If that cannot be achieved, a
tube containing a rapidly effective glycolysis
inhibitor, such as citrate buffer should be used for
collecting the sample. Tubes with only enolase
inhibitors, such as sodium fluoride, should not be
relied upon to prevent glycolysis.
Sacks DB et al. Laboratory Analysis of Diabetes. Clin
Chem 2011 (June); 57
2011-10-26
Hemolys och FC-mix rör
Hemolys i FC-mix rör har en mörk färg.
Terumo säger att det beror på dålig blandning.
Rören innehåller relativt mycket salter som måste
lösas. Vändning rekommenderas 10 gånger.
Enligt företaget uppfattas detta inte som ett
problem i Finland och Danmark
Många lab har testat genom att provocera fram
den ”mörka” färgen och har visat att det har ingen
effekt på glukosmätningen.
2011-10-26
2011-10-26
2011-10-26
Hemolys och FC-mix rör 2
Den spektroskopiska undersökningen av ”hemolys” visar att det till stor
del består av methemoglobin.
Tillsatsförsök med ”ren” metHb upp till 10 g/L visar att det har ingen
effekt på glukosbestämning för glukoshexokinas metoder från Roche
(Cobas c501), Abbott (ci8200) och Beckman (Unicel DxC 800) .
Vitros (5,1) glukosoxidas metod visade en 2,7 % ökning vid 6,6 g/L Hb.
Hemolysindex mätning på Abbott, Roche och Vitros fungerar inte alls
medan Beckman fungerar. Hemocue Low Hb användes till mätningar
(azidmethemoglobin metod)
2011-10-26
Hemolysindex
MetHb (g/L)
HemoCue
H index
Cobas
H index
Abbott
H index
Beckman
H index
Vitros
1,45
4
0.02
1
<15
2,1
15
-0.04
3
<15
3,25
26
-0.26
5
<15
4,25
31
-0.51
8
<15
5,25
38
-0.82
10
<15
6,6
43
-1.06
>10
<15
7,8
54
-1.35
>10
<15
9,1
63
-1.64
>10
<15
9,75
60
-1.95
>10
<15
10,9
91
-2.24
>10
<15
Cobas: 90 = ca 1g hemoglobin/L. Beckman: 1 = ca 0,5 g/L.
Abbott: 1 = ca 1g/L. Vitros: 15 = ca 0,15 g/L
2011-10-26
Slutsats
Preanalytiska problem ”löst” med Terumo FC-rör
Hemolys inget problem
Övergång till plasma glukos från venblod för ”diagnostiska P-glukos”?
fP-Glukos
2 timmars belastningsprov
Icke fastande P-Glukos för gravida
Hypoglykemi
2011-10-26
