Monoclonal Mouse
Anti-Human
Progesterone Receptor
Clone PgR 636
Kod M3569
Avsedd användning
För diagnostisk användning in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Progesterone Receptor, klon PgR 636 (Anti-PR, PgR 636) är avsedd för laboratoriebruk för att
semikvantitativt detektera progesteronreceptor med hjälp av ljusmikroskopi i normala och patologiska humana paraffininbäddade vävnader
behandlade i neutral buffrad formalin. Denna antikropp indikeras för användning som hjälp vid behandling, prognos och utgångsförutsägning
av bröstcancer. Positiva resultat hjälper till vid klassificering av normala och abnormala celler/vävnader och fungerar som ett komplement till
konventionell histopatologi. Den kliniska tolkningen av närvaro eller frånvaro av positiv färgning ska kompletteras med morfologiska och
histologiska studier med ordentliga kontroller. Tolkning måste göras av kvalificerad specialist inom ramen för patientens anamnes och andra
diagnostiska tester.
Sammanfattning och förklaring
Rollen av steroid hormon receptorer vid bröstcancer är välkänd. 2,3 Frånvaro av ER och PR beräknar tidig rekurrens och dålig överlevnad
hos patienter med bröstcancer.4-7 Dessutom förutsäger närvaro av ER och PR i tumörer möjliga förmåner från tamoxifen och andra
endokrinrelaterade terapier. Mätning av ER och PR kan bestämmas semikvantitativt med hjälp av IHC eller kvantitativt med hjälp av DCC
eller EIA. Korrelationen mellan semikvantitativa och kvantitativa bedömningar av PR har varit mellan 73 och 91% beroende på vilket
laboratorium och vilken antikropp som använts. 8-10
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer för:
(1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning, (5) Färgningsprocedur,
(6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Ingående reagenser
Monoklonal mus-antikropp levererad i flytande form som vävnadskultursupernatant i 0,05 mol/L Tris-HCl, pH 7,2, och 0,015 mol/L
natriumazid. Denna produkt innehåller stabiliserande protein.
Klon: PgR 6361
Isotyp: IgG1, kappa
Mus IgG koncentration mg/L: Se etikett på vialen.
Vid utförande av IHC med detektionssystemet LSAB™2, använd en spädning på 1:50 i en 10 till 30 minuters inkubation med det utspädda
Anti-PR, PgR 636. Detta är endast riktlinjer. De optimala antikroppkoncentrationerna kan variera beroende på preparat och
prepareringsmetod och bör bestämmas av varje laboratorium individuellt.
Proteinkoncentrationen mellan partier kan variera utan att påverka den optimala spädningen. Titern hos varje enskilt parti jämförs och
justeras till ett referensparti för att säkerställa en konsekvent immunhistokemisk färgningsprestanda inom partier.
Immunogen
Formalinfixerad rekombinant full längd A-form av human progesteronreceptor1
Specificitet
Anti-PR, PgR 636 har visats reagera med PR-A och PR-B genom Wester blot av hela cellextrakt och reagerar med både fria och
hormonbundna PR.1 Epitopet har lokaliserats till den aminoterminala domänen som delas av PR-A och PR-B.
Erforderligt material som ej ingår
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning och/eller detektionssystemets instruktioner. Dessurom, använd följande
negativa reagenskontroll:
Mus IgG1 (kod X0931)
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan NaN3, trots att
det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten
vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala och nationella föreskrifter.
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C. Får ej användas efter det utgå ngsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden
som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och
negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna. Kontakta Dako teknisk service om du observerar oväntad färgning som inte
kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det finns något problem med antikroppen.
(118757-002)
303352SE_002 s. 1/3
Provpreparation
Biopsiprover kan konserveras för IHC-färgning genom formalinfixation efter paraffininbäddning.
Anti-PR, PgR 636 kan användas på vävnader som fixerats i neutral buffrad formalin, metacarn, eller Carnoys fixativ innan
paraffininbäddning. Deparaffiniserade vävnadssnitt måste behandlas med värme innan IHC-färgningsproceduren.10 Target retrieval innebär
immersion av vävnadssnitt i en uppvärmd buffertlösning och bibehållen värme, antingen i ett vattenbad (95–99 °C), ångkokare (95–99 °C)
eller en autoklav (121 °C). För att vävnadssnitten ska sitta fast bättre på objektglasen rekommenderas användning av Silanized Slides (kod
S3003). Target Retrieval Solution (kod S1700) eller 10x Concentrate (kod S1699) rekommenderas med ett värmeprotokoll på 20–40
minuter.
Anti-progesteronreceptor kan även användas för att märka kryostatsnitt eller cellutstryk.
Färgningsprocedur
Följ proceduren för utvalt detektionssystem.
Färgningstolkning
Det cellulära färgningsmönstret för anti-PR, PgR 636 är nukleär. Ett positivt färgningsresultat definieras som att mer än 10% av cellerna har
färgade kärnor av någon slags intensitet.
Resultatkarakteristika
Normala vävnader
En distributionen av PgR över hela normala vävnader har rapporterats i ett antal studier. Kärnor i uterina körtelceller har funnits vara starkt
immunoreaktiva. Svagare immunofärgning observerades i kärnor på endometriala och prostatiska stromalceller.
Immunoreaktivitet i en panel normala vävnader: Tabell 1 innehåller en lista med positiva vävnader med PgR 636-immunoreaktivetet. Alla
vävnader formalinfixerades och inbäddades i paraffin och färgades med Anti-PR, PgR 636 enligt instruktionerna på förpackningsinlägget
med detektionssystemet LSAB2 (kod K0675). Negativa vävnader inkluderade binjure (4), benmärg (2), hjärna/cerebellum (4),
hjärna/cerebrum (3), kolon (3), esofagus (3), hjärta (3), njure (3), lever (3), lunga (3), mesotelceller (3), äggstock (3), pankreas (3),
paratyreoida (3), perifära nerver (3), salivkörtel (3), skelettmuskulatur (3), hud (3), tunntarm (3), mjälte (4), mage (3), testis (3), tymus (3),
sköldkörtel (3) och tonsiller (3).
Tabell 1: Sammanfattning av PgR 636 normal vävnadsreaktivitet
Vävnadstyp(antal testade)
Bröst (3)
Cervix (3)
Hypofys (3)
Prostata (3)
Livmoder (3)
Positivt vävnadselement
Duktala epitelceller
Glandulära epitelceller
Stromala fibroblaster
Pituicyter
Stromala fibroblaster
Endometrial stroma
Myometrium
Endometriala körtlar
Färgning och färgningsmönster
3+ färgningsintensitet, 3/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 1/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 2/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 1/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 1/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 3/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 3/3 vävnader
2+ färgningsintensitet, 2/3 vävnader
En andra undersökning av normala vävnader visade positivitet i endometrium och svag positivitet i prostata efter värmeinducerad
epitopretrieval med detektionssystemet LSAB™+. Negativa vävnader inkluderade esofagus, testiklar, bröst, lever, njure, skelettmuskulatur,
placenta, adrenal, tonsill, lunga, kolon, hud, pankreas, mjälte, sköldkörtel, mage och hjärtmuskulatur.1
Abnormal vävnad
Nittisju bröstcancervävnader testades med anti-PR, PgR 636 med hjälp av detektionssystemet LSAB™2, som tidigare hade utvärderats för
PR-expression med hjälp av PR-EIA. Korrelationen mellan de 2 assayerna var 90,7% medan specificiteten var 94% och känsligheten var
87,2%. I en annan studie färgades 31 bröstcarcinom, som tidigare testats med DCC-assayen, med hjälp av detektionssystemet LSAB+.
Positiv färgning rapporterades för 21/23 tidigare bestämda positiva tumörer, medan 6/8 förblev negativa
(91% känslighet och 75% specificitet).1
Anti-PR, PgR 636 med ett peroxidas/antiperoxidas detektionssystem användes till att immunofärga 60 olika typer av tumörer. Bröstcancer
(5/11), livmoders- (2/2), äggstocks- (2/6) och endometriala (2) carcinom färgades starkt. Medullärt carcinom i sköldkörteln (1/2) och testikulär
tumör i gulsäcken var positiva. Andra tumörer inklusive melanom, lymfom och neuroendokrina och neurala tumörer var negativa för PRexpression.1
Reproducerbarhet
Reproducerbarhet
Åtta seriesektioner från vardera av tre olika formalinfixerade, paraffininbäddade block av bröstcarcinom samlades för testning. Testning
utfördes enligt följande:
Reproducerbarhet inom körningar
Genom att följa standardprotokollet för EnVision+ Peroxidase Kit (kod K4007) färgades 3 objektglas från varje vävnadsblock på ett vis som
randomiserade färgningssekvensen, med Ready-to-Use Mouse Anti-Human Progesterone Receptor, klon PgR 636. Samtidigt färgades ett
objektglas från varje vävnadsblock med en matchad negativ kontrollreagens.
(118757-002)
303352SE_002 s. 2/3
Reproducerbarhet mellan körningar
Efter att ha färgat ett objektglas från varje vävnadsblock, upprepades proceduren under ytterligare två dagar med en annan tekniker som
färgade med en tredje färgningsprocedur. Samtidigt färgades ett objektglas från varje vävnadsblock med en matchad negativ
kontrollreagens.
Reproducerbarhetsexperimenten med anti-PR, PgR 636 gav konsekventa resultat med testning inom- och mellan körningar.
Testförhållandena var konsekventa under hela studien och reagenser förvarades vid 2–8 °C mellan körnin gar.
Referenser
1. Press M, Spaulding B, Groshen S, Kaminsky D, Hagerty M, Sherman L, Christensen K, Edwards DP. Comparison of different
antibodies for detection of progesterone receptor in breast cancer. Steroids 2002;67(9):799-813
2. Henderson C. Breast cancer. In: Harrison’s principles of internal medicine, 12th edition, Wilson JD, Braunwald E, Isselbacher KJ,
Petersdorf RG, Martin JB, Fauci AS, Root RK (eds). McGraw-Hill, Inc. New York, 1991
3. Fuqua SAW. Estrogen and progesterone receptors and breast cancer. Diseases of the Breast, Harris et al, eds. Lippincott-Raven,
1996. p. 261
4. McGuire WL, Clark GM. The prognostic role of progesterone receptors in human breast cancer. Sem Oncol 1983;10(4 Suppl 4):2-6
5. Clark GM, McGuire WL, Hubay CA, Pearson OH, Marshall JS. Progesterone receptors as prognostic factor in stage II breast cancer. N
Engl J Med 1983;309(22):1343-7
6. Ravdin PM, Green S, Dorr TM, McGuire WL, Fabian C, Puch RP, Carter RD, Rivkin SE, Borst JR, Belt RJ, Metch B, Osborne CK.
Prognostic significance of progesterone receptor levels in estrogen receptor-positive patients with metastatic breast cancer treated with
tamoxifen: Results of a prospective southwest oncology group study. JCO 1992;10(8):1284-91
7. Chevallier B, Heintzmann F, Mosseri V, Dauce JP, Bastit P, Graic Y, Brunelle P, Basuyay JP, Comoz M, Asselain B. Prognostic value
of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer: Results of a univariate and multivariate analysis. Cancer
1988;62(12):2517-24
8. Page DL, Jensen RA, Simpson JF. Routinely available indicators of prognosis in breast cancer. Breast Can Res Treat 1998;51(3):195208
9. Allred DC, Harvey JM, Berardo M, Clark GM. Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod
Pathol 1998;11(2):155-68
10. Fitzgibbons PL, Page DL, Weaver D, Thor AD, Allred DC, Clark GM, Ruby SG, O’Malley F, Simpson JF, Connolly JL, Hayes DF, Edge
SB, Lichter A, Schnitt SJ. Prognostic factors in breast cancer. College of American Pathologists consensus statement 1999. Arch
Pathol Lab Med 2000;124(7):966-78
Edition 01/09
(118757-002)
303352SE_002 s. 3/3
