Screening av blodburna
infektioner
HIV-screening, gammal och
ny metodik
Historik
• 1948-1954
Syfilis
VDRL-test
• 1970-1972
Hepatit B
• 1985
HIV-antikroppar
• 1991
Hepatit B, anti-HBc
HBsAg
Hepatit B
Hepatitis
Hepatitis BB Diagnostic
Diagnostic Profile
Profile
Relative Concentration
Duration
Incubation
Acute Infection
Early Recovery
(4-12 weeks)
(2 weeks – 3 months)
(3 - 6 months)
Recovery
(6-12 months)
(Years)
Anti-HBc Total
Symptoms
HBsAg
Anti-HBs
Anti-HBe
HBeAg
Anti-HBc IgM
Time
Historik
• 1991
HIV 1 och HIV 2 antikroppar
• 1992
Hepatit C
• 1994
HTLV 1+2
• 2010
HIV antigen/antikroppstest
NAT-tester?
antikroppar
antikroppar
HIV / AIDS
• Första fallen av AIDS beskrivs 1981.
• HIV-1 upptäcktes 1983-84, retrovirus
• HIV-2 virus upptäcktes 1986.
• Infekterar celler med CD4 protein, till exempel T4lymfocyter, monocyter och makrofager.
• Virus integrerar sin genetiska information i värdcellen,
och kan när som helst börja replikera igen
HIV / AIDS i världen
•37 miljoner människor i världen
lever med HIV
•C:a 3 miljoner dödsfall årligen
•Totalt har c:a 30 miljoner dött
av AIDS sedan första fallet
diagnosticerades 1981.
A global view of HIV infection
33 million people [30–36 million] living with HIV, 2007
2008 Report on the
global AIDS epidemic
HIV / AIDS i Sverige
• T.o.m dec. 2008 har 7500 patienter
rapporterats med HIV.
• C:a 2050 har insjuknat i AIDS.
C:a 1930 har avlidit.
C:a 5000 patienter inskrivna vid HIVkliniker.
70% av dessa behandlas med antiviral
terapi.
• 448 nya fall 2008.
http://en.wikipedia.org/wiki/Image:Hiv-timecourse.png
HIV-infektion
HIV RNA
HIV antibodies
HIV antigen
2w
(11-28d)
4w
2-3 mon after infection
years
HIV Diagnostik
• Screeningtester som bygger på EIA-teknik
• Upprepad positivitet
• Konfirmerande tester
Antigentest
WB-test
RNA-påvisning
Flera antikropps- eller kombinationstester
• B-prov
HIV screeningtest
1985
1988
1994
1999
1 gen
2 gen
3 gen
4 gen
Helt
viruslysat
rekomb ±
syntetiska
ag
Indirekt,
kompetitiv
IgG
rekomb ±
syntetiska
ag
Sandwich
antikroppar
+ recomb ±
synt ag
Sandwich
+ indirekt
antigen,
IgM, IgG
Indirekt
IgG
IgM, IgG
HIV screening
Obligatorisk
• Blod och plasmagivare
Övriga
• Gravida
• Inför operation
• IVF-patienter
• STI-kliniker
• Donatorer (organ,
• Ungdomsmottagningar
vävnad, modersmjölk) • Stickincidenter
HIV-screening i Örebro län
År 2008
• 275 000 invånare
• 35 205 prover från blod- och plasma-givare
• 11 765 kliniska prover
• 13 HIV positiva individer, nyupptäckta.
HIV screening vid USÖ
• Fr.o.m 1999 tredje generationens EIA-test
(Abbott Murex HIV 1.2.O)
• Fr.o.m maj 2003 Kombotest (Abbott AxSYM HIV
Ag/Ak Kombo)
• Fr.o.m januari 2005 Kombotest (Abbott
ARCHITECT HIV Ag/Ak Kombo
Murex 1.2.O
• Tredje generationens antikroppstest
• Syntetisk peptid HIV-1 (O), rekombinant protein
från höljet hos HIV-1 och HIV-2 samt HIV Coreprotein
• Serum och diluenttillsats med en
pipetteringsrobot.
• Tillsats av reagens manuellt, tvätt med separat
tvättapparat, avläsning med Multiscan
spektrofotometer
• Hög manuell arbetsinsats
• Carry-over effekter vid starkt positiva prover
• Ingen “random access”
Automatiserade analyser
PRISM
AxSYM
ARCHITECT
Abbott AxSYM HIV Ag/Ak Kombo
2002
• Microparticle Enzyme Immunoassay (MEIA)
• Rekombinant HIV antigen (transmembran-protein
från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och HIV p24
monoklonala antikroppar.
• Flourescensproduktens bildningshastighet
jämförs med ett fastställt cut-offvärde
• Första resultat efter 30 minuter, 50 test/timme.
Abbott ARCHITECT HIV Ag/ Kombo
2005
• Chemiluminescent Microparticle Immunoassay
(CMIA)
• Recombinant HIV-1 and HIV-2 antigen
(transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O
och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV
p24 antigen.
• Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av
instrumentets optiska system.
• Första resultat efter 30 minuter, 130 test/timme.
Assay Design
Anti-HIV Antibody Detection
Conjugate
Microparticle
rHIV-1 Group M Envelope Protein Conjugate
rHIV-1 Group M Envelope Protein,(gp 41)
rHIV-2 Envelope Protein, (gp36)
HIV-2 Peptide Conjugate
rHIV-1 Group O Envelope Protein, (gp41)
HIV-1 Group M Peptide Conjugate
rHIV-1 Group O Envelope Protein Conjugate
Abbott diagnostic division
Assay Design
HIV p24 Antigen Detection
Microparticle
Conjugate
Monoclonal Ab
(Conformational)
Monoclonal Ab
(Conformational)
Sample
Specimen Diluent
Microparticle
Abbott diagnostic division
18 min
Incubation
Wash
Add 50 µl Conjugate
4 min
Incubation
Wash
Pretrigger
Trigger
Report Result
Abbott Prism HIV Ag/Ab Kombo
2005
• Chemiluminescent Immunoassay (ChLIA)
• Rekombinant HIV-1 and HIV-2 antigen
(transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O
och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV
p24 antigen.
• Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av
instrumentets optiska system
• 240 test/timme
Utvärdering av analyserna
Sensitivitet
Specificitet
• Utvalda konfirmerat
positiva ur prod.
• 90 HIV-1 och ~40 HIV-2
från SMI
• 4 serokonversionspaneler
(3 köpta 1 egen)
• 13 patientfall, 27 prover
blev tidigare positiva
• Spädd p24 antigen
• Jämförelser med
tredjegenerationstester
• Murex 1.2.O (USÖ)
• AxSYM HIV 1/2 gO (KS)
• PRISM HIV O Plus (KS)
Konf. positiva och p24 spädning
Fourth
generation
assays
AxSYM HIV
Ag/Ab
Combo
ARCHITECT
HIV Ag/Ab
PRISM HIV
Ag/Ab
HIV-1
HIV-2
selected selected
HIV-1
panel
HIV-2
panel
32/32
13/13
90/90
26/27
HIV
p24
antigen
pg/mL
14
32/32
16/16
90/90
36/36
18
18/18
4/4
83/83
16/16
25
Serokonversionspaneler
Days since first
bleed
HIV antigen test
HIV-1
RNA
3
Third
generation
assay
0,41
0,55
0,38
0,21
4
0,4
0,55
0,83
0,44
5
0,48
4,96
15,07
8,42
5
1
5,53
16,91
11,39
5
18,56
5,25
12,8
5,85
5
15,52
5,26
20,19
5,36
5
0,35
6,24
130,78
NT
5
0,4
5,19
NT
21,16
153,94
652,57
NT
NT
20,01
20
15,71
16,53
20
19,41
8,91
7,44
9,19
9,67
196,68
297,1
211,9
168,5
122,62
NT
NT
NT
NT
NT
PRB944-1
0
1.0
7x10
PRB944-2
2
3.5
8x10
PRB944-3
7
26.7
>8x10
PRB944-4
9
26.3
>8x10
PRB944-5
14
22.5
6x10
PRB944-6
16
12.1
3x10
ORE001-1
0
40.3
ORE001-2
ORE001-3
1
7
NT
49.2
>8x10
NT
ORE001-4
ORE001-5
ORE001-6
ORE001-7
ORE001-8
10
15
21
24
30
NT
NT
NT
NT
0,68
>8x10
NT
NT
NT
NT
NT
Fourth generation assays
Diagnostisk sensitivitet
• 13 patienter med primär HIV-infektion (PHI)
inkluderades, 27 prover.
• Samtliga 27 prover var positiva med kombotest,
men samtidigt negativa med antikroppstest
(RIBA eller WB).
Exempel PHI-patient
• Man, 56 år. Feber, diarré en vecka efter oskyddad
sex med ny partner. Utslag tillkommer fyra dagar
senare.
• Söker primärt på STI-mottagning, där HIV-test
rutinmässigt erbjuds.
• ”Kombo test” utfaller reaktivt, medan
antikroppstest var negativt på detta första prov.
Diagnostisk sensitivitet, patient 2
Days since
symptom
debut
HIV Ag/Ab
Combo S/CO
Axs
ARC
9
Pos
2.6
Pos
25
Pos
25
Neg
0.62
Neg
16
Pos
8.0
Pos
38
Pos
14
Pos
>9
Indet
gp41
25
Pos
7.2
Pos
76
Pos
25
39
HIV p24 Ag
EIA
S/CO
Anti-HIV EIA
S/CO
Anti-HIV RIBA
HIV RNA
2.3x106
copies/mL
Pos
Gp41,p24
285 000
copies/mL
Exempel PHI-patient
• Man 29 år.
• Feber och kroppsvärk sedan 2 veckor, varit i Kina
• Söker på vårdcentral en dag efter symtomdebut
• Kombotest utfaller positivt, antikroppstest är
negativt.
Diagnostisk sensitivitet, patient 5
Days since
symptom
debut
HIV Ag/Ab
Combo S/CO
Axs
ARC
HIV p24
Ag EIA
S/CO
Anti-HIV EIA Anti-HIV
RIBA
S/CO
1
Pos
2.63
Pos
25.32
Pos
24.7
Neg
0.62
Neg
17
Pos
8.00
Pos
37.57
Pos
14.2
Pos
>9
Indet
gp41
26
Pos
7.17
Pos
75.69
Pos
24.6
Pos
P24, gp41
Exempel PHI patient
• Man, 23 år, oskyddad sexkontakt
• Mononukleosliknande bild, lymfopeni,
leverpåverkan
• Axsym HIV-combo positiv ( 4,78 x cut-off),
ARCHITECT HIV-combo positiv (30,79x cut-off), 6
dagar efter symtomdebut
• Antikroppstester negativa (SMI), t.o.m dag 10
Specificitet
• Jämförelse med äldre, tredje generationens EIA-analys;
Murex HIV 1.2.O
• Proverna delades in i fyra grupper; blod- och
plasmagivare, nyanmälda givare, gravida kvinnor och
övriga kliniska prover. Specificitet räknades ut för varje
grupp och totalt för samtliga grupper
MUREX
Antal Antal reaktiva
HIV 1.2.0
testade (init/upprep)
22
Plasmagivare 25 921 107
Blodgivare
Nyanmälda
givare
Kliniska, exl
gravida
Gravida
Totalt
Specificitet
Konfirmerade
(init/upprep)
99,58% 99,91%
0
16 845
59
14
99,65% 99,91%
0
936
11
5
98,82% 99,47%
0
8 211
120
54
98,68% 99,63%
12 (10 ind.)
2 770
42
17
98,48% 99,39%
0
54 683
339
112
99,42% 99,82%
12 (10 ind.)
AxSYM HIV Antal Antal reaktiva
Combo
testade (init/upprep)
5
Plasmagivare 18 506 21
Blodgivare
Nyanmälda
givare
Kliniska,
excl. gravida
Gravida
Totalt
Specificitet
Konfirmerade
(init/upprep)
99,88% 99,97%
0
10 154
16
4
99,84% 99,96%
0
798
2
2
99,75% 99,75%
0
4 935
39
29
99,55% 99,76%
17 (12ind.)
1 740
12
10
99,31% 99,43%
0
36 148
96
54
99,80% 99,91%
17 (12 ind)
Architect
Antal Antal reaktiva
HIV Combo testade (init/upprep)
4
Plasmagivare 22 867 35
Blodgivare
15 374
22
10
Nyanmälda
givare
Kliniska
664
0
0
6 386
38
Specificitet
Konfirmerade
(init/upprep)
99,85% 99,98%
0
99,86% 99,94%
100%
1
100%
0
29
99,69% 99,83%
18
Gravida
2 561
4
2
99,84% 99,92%
0
Totalt
47 852
99
45
99,83% 99,95%
19
Specificitet 2
• AxSYM HIV 1/2 g O. 45 320 kliniska prover, 38
ospecifikt reaktiva efter upprepad analys.
• Prism HIV O Plus. 143 547 blod- och plasmagivare,
116 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys.
• ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo. 34 450 kliniska
prover, 37 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys.
• Prism HIV Ag/Ab Combo. 64 453 blod- och
plasmagivare, 20 ospecifikt reaktiva efter upprepad
analys.
Specificitet 2
AxSYM
HIV 1/2 g O
NA
99,92%
PRISM
HIV O Plus
99,90%
99,92%
ARCHITECT
HIV Ag/Ab Combo
NA
99,89%
PRISM
HIV Ag/Ab Combo
99,86%
99,97%
Variationer i specificiet?
Assay and
reagent lot
AxSYM HIV
Kombo
Used between Number tested % false reactives
dates
Initial
Repeat
03156LU00 (A)
2003
May 19-Jun 04
3089
0.26%
0.03%
04090LU00 (B)
04276LU00 (C)
07090LU00 (D)
07255LU00 (E)
08017LU00 (F)
08059LU00 (G)
08059LU01 (H)
09235LU00 (I)
Jun 05-Jun 23
Jun 24-Sep 03
Sep 04-Sep 16
Sep 17-Sep 30
Oct 01-Oct 26
Oct 27-Nov 19
Nov 20-Dec 14
Dec 15-Dec 31
2834
9091
2440
2637
4721
4735
4603
1926
0.42% a
0.25%
0.12%
0.08%
0.11%
0.21%
0.17%
0.10%
0.25% b
0.11%
0.08%
0.00%
0.04%
0.11%
0.09%
0.10%
Variationer i specificiet?
• Ingen signifikant variation
månadsvis
• Viss batchvariation kunde påvisas
• Ingen carry-over effekt
Sammanfattning
• Alla tre fjärdegenerations HIV-testerna har hög
sensitivitet.
• Alla tre testerna kan detektera HIV p24-antigen, ner till
åtminstone 25 pg/mL
• Alla tre testerna har hög specificitet (99.97%, 99.98%
och 99,97% blod- och plasmagivare, 99,91% resp
99,95% totalt för AxSYM och ARCHITECT). Viss
batchvariation kan ses.
• Inga carry-over effekter observerades,
• Instrumenten är lätta att arbeta med, och innebär en
rationell hantering av stora mängder prover.
TACK
• Sören Andersson, USÖ och SMI
• Madeleine von Sydow, KS, Solna
• Lena Jakobsson, Mikrobiologen USÖ
• Ingmarie Jonsson, Blodcentralen USÖ
• Monica Ulfström, KS
• Christina Wallberg, KS
• Abbott
