Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD21
Clon 1F8
Kodnr M 0784
Upplaga 02.09.03
Avsedd användning
För diagnostisk användning in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human CD21, klon 1F8, är avsett för användning inom immunocytologi. Antikroppen
märker follikulära dendritiska celler och mogna B-celler och är ett användbart verktyg vid identifiering av
strukturella förändringar i nätverket hos follikulära dendritiska celler, vilka ofta återfinnes i maligna lymfom (1).
Differential identifiering underlättas av resultaten från en antikroppspanel. Tolkning måste göras av kvalificerad
specialist inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Synonymer för antigen
C3d-receptor, CR2, EBV-receptor (2).
Introduktion
CD21 är ett transmembranöst glykoprotein tillhörande en familj av komplementära reglerproteiner bestående av
CD35, C4-bindande protein, faktor H och CD55. CD21 har ett Mr av 145 000 och i sin lösta form, sCD21, ett Mr
av 130 000. Det extracellulära området består av multipla, korta överensstämmande upprepningar vilka
innehåller ett flertal distinkta ligandbindande platser. Bindandet av den speciella liganden resulterar i en
differentiell transmembranös signalering via den cytoplasmatiska svansen som har potentiella proteinkinas C
och tyrosinkinas fosforyleringsplatser (2, 3).
CD21 uttrycks av follikulära dendritiska celler (FDC) och mogna B-celler (3). FDC formar ett tredimensionellt
nätverk i B-cellsfolliklar vilka uppenbarligen definierar strukturen av den follikulära rummet (1). På B-celler från
lymfoid vävnad är CD21 uttryckt starkt i marginalzonen och moderat i B-cellernas mantelzon. B-cellernas
germinalcentra har påvisats vara negativa med de flesta CD21 mAbs och benmärgens B-celler har få eller inga
CD21 uttryck. Uttrycket av CD21 förloras gradvis, tillsammans med IgD efter stimulering av vilande B-celler in
vitro. Dessutom har CD21 funnits i ett flertal typer av epitelceller och med ett svagt uttryck på celler från akut Tcellslymfoblastleukemi, undergrupper av normala tymocyter och mogna T-celler (3).
Ingående reagenser
Monoklonal musantikropp i flytande form som supernatant av cellkultur dialyserad mot 0,05 mol/L Tris/HCl, pH
7,2 och innehållande 15 mmol/L NaN3.
Klon: 1F8 (4). Isotyp: IgG1, kappa.
Mus IgG-koncentration: Se etikett på vialen.
Immunogen
CD21-lösning renad från humana tonsiller till en renhet av 60 % (4).
Specificitet
Vid Western blotting av immunogenet märker antikroppen ett band på 145 kDa, motsvarande CD21. Epitopen,
igenkänd av antikroppen, är placerad inom ett 72 kDa C3-bindande fragment (4).
Antikroppen märker celler eller cellinjer kända för att uttrycka CD21 (Raji, NC 37, tonsillceller) medan ingen
märkning observerats i de CD21-negativa Jurkatcellerna (T-cellinjen) eller humana erytrocyter (4).
Försiktighetsåtgärder
1. För professionella användare.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som i ren form är synnerligen toxisk. I
produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten när det kastas bort så att inte
metallazider byggs upp i avloppen.
3. Som med alla produkter som kommer från biologiska källor måste korrekta procedurer användas vid
hanteringen.
Förvaring
Förvara vid 2–8C. Använd inte efter det utgångsdatum som är stämplat på vialen. Om reagensen förvaras i
annorlunda miljö än de specificerade måste förhållandena kontrolleras av användaren. Det finns inga tydliga
tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt
med patientprover. Kontakta vår tekniska service om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med
variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara något problem med antikroppen.
Provberedning
Paraffinpreparat: Antikroppen kan användas för märkning av paraffininneslutna vävnadspreparat fixerade i formalin.
Förbehandling av vävnader med värmeinducerad epitopretrieval krävs. Optimala resultat erhålls med Dako
Target Retrieval Solution, kod nr. S 1700, medan förbehandling av vävnader med Dako Proteinas K, kodnr. S
3020 befanns vara mindre effektivt. Mindre optimala resultat erhålls med värmeinducerad epitopåtervinning
med Dako Target Retrieval Solution, högt pH, kodnummer S 3308, Dako Target Retrival Solution, pH 9,0
kodnr. S2368, och 10 mmol/L citratbuffert, pH 6,0. Vävnadspreparaten får inte torka ut under behandlingen eller
under den efterföljande immunocytokemiska färgningsproceduren.
Frysta preparat och cellberedningar: Antikroppen kan användas för att märka acetonfixerade cellutstryk.
(105287-004)
M 0784/SE/CE/02.09.03 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Färgningsprocedur
Spädning: Musmonoklonal antihuman CD21, kod nr. M 0784 kan användas inom ett spädningsintervall på
1:25–1:50 vid användning på formalinfixerade paraffininbäddade preparat av human tonsill och med
användning av 20 minuters värmeinducerad epitopretrieval i Dako Target Retrieval Solution, kod nr. S 1700 och
30 minuters inkubation vid rumstemperatur med den primära antikroppen. De optimala villkoren kan variera
beroende på prov och prepareringsmetod och bör bestämmas av varje laboratorium individuellt. Den
rekommenderade negativa kontrollen är Dako Mouse IgG1, kod nr. X 0931, spädd till samma mus lgGkoncentration som den primära antikroppen. Såvida inte stabiliteten hos den utspädda antikroppen och den
negativa kontrollen har fastställts i den faktiska färgningsproceduren rekommenderas att späda dessa
reagenser omedelbart före användning eller späda med Dako Antibody Diluent, kod nr. S 0809. Positiva och
negativa kontroller skall köras samtidigt med patientprovet.
Visualisering: DAKO LSAB™+/HRP kit, kodnr. K 0679, och DAKO EnVision™+/HRP kits, kodnr. K 4004 och
K 4006 rekommenderas. För frysta preparat och cellberedningar är Dako APAAP kit, kodnr. K 0670 ett bra
alternativ om endogen peroxidasfärgning är ett problem. Följ proceduren som medföljer det visualiseringskit
som valts.
Resultatkarakteristika
Celler märkta med antikroppen uppvisar en färgning begränsad till cellmembranet.
Normala vävnader: Vid reaktiv lymfoid hyperplasi märker antikroppen starkt germinalcenter FDC i 11/11 fall
med ett tätt nät av FDC märkande den ljusa zonen och ett löst arrangerat, mycket mindre kompakt FDCmärkning i den mörka zonen. Antikroppen märker plasmaceller och ger en svag och mindre
överensstämmande märkning av lymfocyter i mantelzonen. Celler som bekläder sinus och monocytiska Bceller märks svagt (1).
Abnormala vävnader: I sex fall av kronisk B-cellsleukemi visade antikroppen svag ytmärkning av neoplastiska
celler i fyra fall och märkte FDC i glesa kvarstående germinalcenter i fyra fall. I 8/8 mantelcellsymfom märker
antikroppen den löst arrangerade, illa definierade och expanderade FDC-nätverken av antingen nodulära eller
diffusa mönster, liknande uppbrutna primärfolliklar I 11/11 follikulära lymfom visade de abnorma folliklarna tät,
kraftigt definierad, expanderad och ibland sammangående FDC-nätverk. Dock noterades endast lös och spridd
FDC-märkning i fem fall med höggradig omvandling i områden med diffust storcellslymfom. I 7/7 låggradiga Bcellslymfom av MALT-typ märker antikroppen expanderade FDC-nätverk med speciellt tätt och sammanvuxet
utseende främst i fall med lymfom av spottkörtel och ventrikel. I 5/5 T-cells- och histocytära B-cellslymfom
märkte antikroppen ett fåtal komprimerade residualfolliklar vid periferin av det lymfomatösa engagemanget. I
9/9 angioimmunoblastiska T-cellslymfom påvisades anhopningar av dendritiska celler med FDC-morfologi
tillsammans med frekvent inlemmande av prolifererande kapillärvenoler. I 4/4 Hodgins lymfom med
predominans av nodulära lymfocyter märker antikroppen förstorade FDC-nätverk överlappande de
expanderade mantelzonerna. I 15 fall av Hodgins lymfom av subtypen nodulärskleros märkte antikroppen
skarpt definierad, ibland oregelbundna FDC-nätverk omgivande de negativa tumörcellerna i 11 fall av grad 1
och visade sparsam eller ingen märkning i 4 fall av grad II sjukdom (1). Vid follikulärt dendritiskt sarkom märker
antikroppen neoplastiska celler i 17/17 fall (5). I en annan studie (6) märker antikroppen Reed-Sternberg och
Hodgkins celler i 7/37 fall av nodulärskleros, 2/41 fall av blandad celluläritet och 5/12 fall av lymfocytfattigt
Hodgkins lymfom, medan ingen märkning av tumörceller noterades i 4 fall av lymfocytdominerad typ. I nio av
de fall där Reed-Sternberg och Hodgkins celler märktes av antikroppen, uttryckte cellerna inga andra
märkningar associerade med B- eller T-celler.
Referenser
1. Bagdi E, Krenacs L, Krenacs T, Miller K, Isaacson PG. Follicular dendritic cells in reactive and neoplastic
lymphoid tissues: a reevaluation of staining patterns of CD21, CD23, and CD35 antibodies in paraffin
sections after wet heat-induced epitope retrieval. Appl Immunohistochem Molecul Morphol 2001;9:117-24.
2. Timens W. CD Guide. CD21. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY,
Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th
International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 1125.
3. Timens W. BC5. CD21 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York,
London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 140-2.
4. Petzer AL, Schulz TF, Stauder R, Eigentler A, Myones BL, Dierich MP. Structural and functional analysis of
CR2/EBV receptor by means of monoclonal antibodies and limited tryptic digestion. Immunology
1988;63:47-53.
5. Chan JKC, Fletcher CDM, Nayler SJ, Cooper K. Follicular dendritic cell sarcoma. Clinicopathologic analysis
of 17 cases suggesting a malignant potential higher than currently recognized. Cancer 1997;79:294-313.
6. Nakamura S, Nagahama M, Kagami Y, Yatabe Y, Takeuchi T, Kojima M, et al. Hodgkin’s disease
expressing follicular dendritic cell marker CD21 without any other B-cell marker. A clinicopathologic study of
nine cases. Am J Surg Pathol 1999;23:363-76.
Förklaring av symboler
(105287-004)
Katalognummer
Temperaturbegränsning
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Batchkod
Läs instruktionerna för
användning
Använd före
Tillverkare
M 0784/SE/CE/02.09.03 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17