FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Vimentin
Clone V9
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Kod GA630
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, Clone V9, Ready-to-Use (Dako Omnis), är avsedd för användning vid
immunhistokemi tillsammans med Dako Omnis-instrumentet. Denna antikropp är användbar för identifieringen av
celler av mesenkymalt ursprung i normala och neoplastiska vävnader och är värdefull vid tumördiagnos. Den kliniska
tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning
av lämpliga kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes
och andra diagnostiska tester.
Sammanfattning
och förklaring
Vimentin är ett intermediärt filament (IF) protein på 57 kDa som bildar en del av cytoskelettet i vertebratceller.
Vimentin tillhör klass III bland IF och visar en hög grad av specificitet för celler av mesenkymalt ursprung.
Celltypsspecificiteten, som uppvisas av varje IF-undertyp, ansågs initialt bibehållas i maligna celler liksom deras
normala motsvarighet, vilket gjorde att IF var viktiga som diagnostiska markörer i histogenes. Samuttrycket av
intermediära filament, speciellt vimentin och cytokeratin, har nu uppvisats i flera olika normala celler/vävnader och i
neoplastiska lesioner, vilket nödvändiggör användningen av antikroppspaneler vid differentiell tumördiagnos (2).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (allmänna instruktioner för immunhistokemisk
färgning) eller detekteringssystemets instruktioner för IHC-procedurer.
Medföljande reagens
Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och
0,015 mol/L natriumazid.
Klon: V9. Isotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Renat vimentin från ögonlins från gris (3).
Specificitet
I Western blotting av renat vimentin från gris märker antikroppen ett enkelt band på 57 kDa som motsvarar vimentin.
Vid användning av helblodsextrakt av cellinjer som uttrycker vimentin plus gliafibrillärt surt protein (GFAP) respektive
vimentin plus desmin märker antikroppen vimentinbandet på 57 kDa specifikt. Antikroppen reagerar inte med de två
IF-proteinerna som är mest närbesläktade med vimentin, dvs. desmin och GFAP (3), vilket har direkt påvisats med
dessa experiment.
I immuncytokemi märker antikroppen de vimentin-positiva humana cellinjerna IMR90, RD, gliom och HeLa (3).
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Den här produkten innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form.
I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter.
Förvaring
(123063-001)
Dako Denmark A/S
Förvara vid 2–8 °C. Stäng locket vid förvaring. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på
reagensflaskan. Produkten förblir stabil i instrumentet i 80 timmar. Kvarstående tid för produktens stabilitet i
instrumentet kontrolleras av Dako Omnis-programvaran. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som
avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför
bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt med patientprover. Kontakta Dakos tekniska support om oväntad
färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och det misstänks vara något
fel med antikroppen.
P02240SV_001_GA630/2013.01 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Snabbguide
Steg
Fixering/inbäddning
Kommentarer
Formalinfixerade, paraffininbäddade
Avparaffinering i instrumentet
Förbehandling
EnVision™ FLEX, High pH (kod GV804)
30 min HIER
Antikropp
Bruksfärdig
22,5 min inkubation
Negativ kontroll
FLEX Negative Control, Mouse (kod GA750)
22,5 min inkubation
Visualisering
EnVision™ FLEX (kod GV800)
Block: 3 min; polymer: 20 min;
kromogen: 5 min
Kontrastfärg
Hematoxylin (kod GC808)
3 min inkubation
Kontrollvävnad
Tonsill, lever
Cytoplasmatisk färgning
Objektglas
FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020)
Rekommenderas för bättre vidhäftning
av vävnadssnitten till objektglas
Montering
Icke-vattenhaltigt, permanent
monteringsmedel som krävs
Efter färgning måste snitten dehydreras,
rengöras och monteras med permanent
monteringsmedel
Instrumentering
Dako Omnis
Reagens förvaras i instrumentspecifika
flaskor
*Användaren måste alltid läsa produktbladet för detaljerade anvisningar om färgningsproceduren och hantering av produkten.
Provberedning
Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt.
Vävnadsprover ska snittas i 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med värmeinducerad
epitophämtning (HIER) krävs. För förbehandling av vävnader rekommenderas HIER med utspädd EnVision™ FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis) med kod GV804. Avparaffinering, rehydrering och
målåtervinning utförs på Dako Omnis. Se Dako Omnis användarhandbok.
Låt inte vävnadssnitten torka under förbehandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX
IHC Microscope Slides med kod K8020.
Färgningsprocedur
Program: Färgningsstegen och inkubationstiderna är förprogrammerade i programvaran för Dako Omnis. Se
användarhandboken för Dako Omnis för mer information om laddning av objektglas och reagens. Kontakta Dakos
tekniska service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Omnis-systemet. Alla inkubationssteg på Dako Omnis
utförs vid 32 °C.
Visualisering: Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis) med kod
GV800. Visualiseringen utförs på Dako Omnis.
Kontrastfärgning: Den rekommenderade kontrastfärgen är Hematoxylin (Dako Omnis) med kod GC808.
Kontrastfärgningen utförs på Dako Omnis.
Montering: Efter färgning på Dako Omnis måste snitten dehydreras, rengöras och monteras med permanent
monteringsmedel.
Kontroller: Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientproverna med samma protokoll. Den
positiva kontrollvävnaden ska innehålla tonsill och lever och cellerna/strukturerna ska visa reaktionsmönster i likhet
med dem som beskrivs för denna vävnad i avsnittet ”Prestandaegenskaper”. Rekommenderat negativt
kontrollreagens är FLEX Universal Negative Control, Mouse (Dako Omnis) med kod GA750.
Tolkning av
färgningen
Det cellulära färgningsmönstret är cytoplasmatiskt.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: I allmänhet märks de flesta mesenkymala celler av antikroppen, inklusive fibrocyter, lipocyter,
glatta muskelceller, endotelceller i kärl, astrocyter, celler i perifer nerv (Schwann), makrofager (inklusive Kupfferceller) samt myoepitelceller i svett- och spottkörtlar och bröst, och alla märks starkt. Follikelceller i sköldkörtel,
binjurebark, distala njurtubuli och mesangiala celler och endotelceller i njurglomeruli samt acinära celler i
bukspottkörtel är också positiva med varierande intensitet och distribution (1, 3). I humant öga märker antikroppen
pigmenterat posteriort och anteriort epitel i iris, inklusive muskeldelen (pupill) av anteriort epitel samt ickepigmenterat och pigmenterat flimmerepitel (4). I flimmerepitel var vimentin samuttryckt med cytokeratin (4). Skelettoch hjärtmuskelceller, epidermala, skivepitel- och urotelslemhinneceller och gliaceller i tjocktarm och magsäck samt
neuroner är konsekvent negativa med antikroppen (1, 3). I tonsill visar lymfocyter och endotelceller måttlig till stark
färgningsreaktion. I lever visar sinusoida glatta muskelceller en svag till måttlig färgningsreaktion.
Onormala vävnader: Antikroppen märkte 17/20 sarkom, 16/18 melanom, 4/4 meningiom och 3/3 schwannom och var
det enda intermediära filamentet i dessa tumörer. Dessutom var varierande procentandelar (10-57%) av karcinom,
neuroendokrina karcinom, neuroblastom, tymom och mesoteliom positiva med antikroppen. Med undantag för
neuroblastom var cytokeratin samuttryckt med vimentin i dessa tumörer. Bland adenokarcinom märktes mer än 50 %
av papillarkarcinom i sköldkörtel samt karcinom i njure, endometrium, äggstock och lunga av antikroppen och
samuttryckte keratiner och vimentin (1).
Referenser
1. Azumi N, Battifora H. The distribution of vimentin and keratin in epithelial and nonepithelial neoplasms. Am J Clin
Pathol 1987;88:286-96.
2. Herrmann H, Aebi U. Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements specifying
cytoarchitecture and cytodynamics. Curr Opin Cell Biol 2000;12:79-90.
3. Osborn M, Debus E, Weber K. Monoclonal antibodies specific for vimentin. Eur J Cell Biol 1984;34:137-43.
4. Kivelä T, Fuchs U, Tarkkanen A. Cytoskeleton in neuroectodermally derived epithelial and muscle cells of the
human iris and ciliary body. J Histochem Cytochem 1992;40:1517-26.
(123063-001)
P02240SV_001_GA630/2013.01 p. 2/3
Dako Denmark A/S
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Symbolförklaringar
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Medicinsk enhet för in vitrodiagnostik
Batchkod
Läs bruksanvisningen
Använd före
(123063-001)
Dako Denmark A/S
Tillverkare
P02240SV_001_GA630/2013.01 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
