FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Kod GA524
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein, Ready-to-Use (Dako Omnis) är avsedd för användning vid
immunhistokemi tillsammans med Dako Omnis-instrumentet. Gliafibrillärt surt protein (GFAP) är det huvudsakliga
intermediära filamentet i mogna astrocyter (1) och antikroppen är ett användbart verktyg t.ex. för identifieringen av
astrocyter i centrala nervsystemet (CNS) under normala och patologiska förhållanden (2-4). Den kliniska tolkningen
av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga
kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra
diagnostiska tester.
Sammanfattning
och förklaring
GFAP är ett intracytoplasmiskt filamentprotein på 50 kDa som utgör en del av cytoskelettet i astrocyter och det har
visats vara den mest specifika markören för celler av astrocytiskt ursprung. I molekylens centrala stavdomän delar
GFAP i betydande utsträckningavsevärt den strukturella homologin med de övrigaandra intermediära filamenten (5).
Funktionellt sett anses GFAP vara viktigt för astrocyters motalitet och form genom att ge strukturell stabilitet till
astrocytiska processer (1). Efter en skada på det humana centrala nervsystemet orsakat av trauma, genetiska
rubbningar eller kemikalier prolifereras astrocyter och visar omfattande hypertrofi hosav cellkroppen och processer
och GFAP uppregleras markant. I kontrast med stigande astrocytmalignitet sker en progressiv förlust av produktion
av GFAP. Därför har maligna astrocytom färre tumörceller som färgas positivt och intensivt för GFAP än mindre
maligna astrocytom och normala hjärnprover (5).
Utanför CNS kan känsliga detektionsmetoder påvisa GFAP i Schwann-celler, gliaceller i tarmen, neoplasmer i
spottkörtel och metastaserande njurkarcinom. Dessutom har immunreaktivitet av GFAP påvisats i cartilago
epiglottica, pituicyter, omogna oligodendrocyter, papillärt meningiom (1) och myoepitelceller i bröstet (6).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Allmänna instruktioner för immunhistokemisk
färgning) (www.dako.com/IHC-instructions) eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer.
Medföljande reagens
Bruksfärdig polyklonal kaninantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och
0,015 mol/L natriumazid.
Immunogen
GFAP isolerat från koryggmärg.
Specificitet
Antikroppen har fastfasabsorberats med serumproteiner från människa och ko.
2
I korsad immunoelektrofores med användning av 50 µL koncentrerad antikropp per cm gelområde observeras ingen
reaktion med 2 µL humanplasma och 2 µL koserum. Antikroppen visar en distinkt fällning (GFAP) med
kohjärnextrakt. Färgning: Coomassie Brilliant Blue.
Antikroppen visade ingen reaktion med human plasma och koserum i indirekt ELISA.
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form.
I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter.
Förvaring
(123925-001)
Dako Denmark A/S
Förvaras vid 2-8 °C. Locket ska hålla stängt under förvaring. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges
på reagensflaskan. Produkten förblir stabil i instrumentet i 80 timmar. Kvarstående tid för produktens stabilitet i
instrumentet kontrolleras av Dako Omnis-programvaran. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som
avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför
bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt med patientprover. Kontakta Dakos tekniska support om oväntad
färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och det misstänks vara något
fel med antikroppen.
P02433SE_001_GA524/2013.06 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR-nr 33 21 13 17
Snabbguide
Steg
Fixering/inbäddning
Kommentarer
Formalin-fixerade, paraffininbäddade
Avparaffinering i instrumentet
Förbehandling
EnVision™ FLEX, High pH (kod GV804)
30 min HIER
Antikropp
Bruksfärdig
12,5 min inkubation
Negativ kontroll
FLEX Negative Control, Rabbit (kod GA600)
12,5 min inkubation
Visualisering
EnVision™ FLEX (kod GV800)
Block: 3 min; polymer: 20 min;
kromogen: 5 min
Kontrastfärg
Hematoxylin (kod GC808)
3 min inkubation
Kontrollvävnad
Hjärna, kolon
Cytoplasmatisk färgning
Objektglas
FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020)
Rekommenderas för bättre vidhäftning
av vävnadssnitten till objektglas
Montering
Icke-vattenhaltigt, permanent
monteringsmedel som krävs
Efter färgning måste snitten dehydreras,
rengöras och monteras med permanent
monteringsmedel
Instrumentering
Dako Omnis
Reagens förvaras i instrumentspecifika
flaskor
*Användaren måste alltid läsa produktbladet för detaljerade anvisningar om färgningsproceduren och hantering av produkten.
Provberedning
Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt.
Vävnadsprover ska snittas i 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med värmeinducerad
epitopåtervinning (HIER) krävs. För förbehandling av vävnader rekommenderas HIER med utspädd EnVision™
FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis) med kod GV804. Avparaffinering, rehydrering och
målåtervinning utförs på Dako Omnis. Se Dako Omnis användarhandbok.
Låt inte vävnadssnitten torka under förbehandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX
IHC Microscope Slides med kod K8020.
Färgningsprocedur
Program: Färgningsstegen och inkubationstiderna är förprogrammerade i programvaran för Dako Omnis. Se
användarhandboken för Dako Omnis för mer information om laddning av objektglas och reagens. Kontakta Dakos
tekniska service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Omnis-systemet. Alla inkubationssteg på Dako Omnis
utförs vid 32 °C.
Visualisering: Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), med kod
GV800. Visualiseringen utförs på Dako Omnis.
Kontrastfärgning: Den rekommenderade kontrastfärgen är Hematoxylin (Dako Omnis) med kod GC808.
Kontrastfärgningen utförs på Dako Omnis.
Montering: Efter färgning på Dako Omnis måste snitten dehydreras, rengöras och monteras med permanent
monteringsmedel.
Kontroller: Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientproverna och med samma protokoll. Den
positiva kontrollvävnaden ska innehålla hjärna och kolon och cellerna/strukturerna ska visa reaktionsmönster som
liknar dem som beskrivs för denna vävnad i avsnittet ”Prestandaegenskaper”. Rekommenderat negativt
kontrollreagens är FLEX Universal Negative Control, Rabbit (Dako Omnis) med kod GA600.
Tolkning av
färgningen
Celler som märkts av antikroppen visar cytoplasmatisk färgning.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: Antikroppen märker astrocyter i hjärnan (3), follikel-stjärnformade celler i hypofysen (7),
Schwann-celler och enterogliaceller. Dessutom märks myoepitelceller i bröst (6). I hjärna visar astrocyterna en
måttlig till stark färgningsreaktion. I kolon visar gangliecellerna i Auerbach och Meissners plexus en svag till måttlig
färgningsreaktion. Ingen färgning observeras i urinblåsa, bindvävnad, lever, lymfvävnad, muskulatur, bukspottkörtel,
hud eller urinledare.
Onormala vävnader: Samtliga 23 multiforma glioblastom (GBM) märktes av antikroppen. I 20 av 23 GBM var minst
50% av maligna celler positiva för GFAP. Endast 3 av 22 fall av metastatiska karcinom i hjärnan märktes. Denna
märkning var fokal och begränsad till mindre än 10 % maligna celler (3). 5/5 hemisfäriska astrocytom av den
sällsynta granulära typen visade fokal GFAP-positivitet med antikroppen (4), som också märkte 7/7 pleomorfa
xantoastrocytom (8) och follikel-stjärnformade celler i framloben i 20/20 neoplasmer i hypofysen (7).
I medulloblastom (MB) av den ”desmoplastiska varianten” märkte antikroppen 8/11 fall. Märkning visades som fokala
områden i GFAP-positiva celler med neoplastisk morfologi. Endast 4/31 MB av den ”klassiska varianten” visade
denna typ av neoplastiska celler, men i klassisk MB observerades GFAP-positiva celler med samma morfologi som
reaktiva astrocyter i 27/31 fall (9). Antikroppen har också visat sig märka 15/38 schwannom (38 %) och 2 fall av
plexiformt neurofibrom, medan 16 fall av dermalt neurofibrom var negativa (10). I olika neoplastiska och ickeneoplastiska sjukdomar i bröst steg procentandelen av myoepitelceller som var reaktiva med antikroppen kraftigt
jämfört med normalt bröst medan positivitet inte påträffades i maligna celler av 183 bröstkarcinom av olika typer (6).
Antikroppen märkte inte meningiom i en studie som innefattade 36 patienter (11).
(123925-001)
Dako Denmark A/S
P02433SE_001_GA524/2013.06 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR-nr 33 21 13 17
Referenser
1.
Eng LF, Ghirnikar RS, Lee YL. Glial fibrillary acidic protein: GFAP-thirty-one years (1969-2000). Neurochem Res
2000;25:1439-51.
2.
Reske-Nielsen E, Oster S, Reintoft I. Astrocytes in the prenatal central nervous system. Acta path microbiol
immunol scand Sect. A 1987;95:339-46.
3.
Oh D, Prayson RA. Evaluation of epithelial and keratin markers in glioblastoma multiforme. An immunohistochemical study. Arch Pathol Lab Med 1999;123:917-20.
4.
Geddes JF, Thom M, Robinson SFD, Revesz T. Granular cell change in astrocytic tumors. Am J Surg Pathol
1996;20:55-63.
5.
Rutka JT, Murakami M, Dirks PB, Hubbard SL, Becker LE, Fukuyama K, et al. Role of glial filaments in cells and
tumors of glial origin: a review. J Neurosurg 1997;87:420-30.
6.
Viale G, Gambacorta M, Coggi G, Dell'Orto P, Milani M, Doglioni C. Glial fibrillary acidic protein immunoreactivity
in normal and diseased human breast. Virchows Arch A Pathol Anat 1991;418:339-48.
7.
Morris CS, Hitchcock E. Immunocytochemistry of folliculo-stellate cells of normal and neoplastic human pituitary
gland. J Clin Pathol 1985;38:481-8.
8.
Powell SZ, Yachnis AT, Rorke LB, Rojiani AM, Eskin TA. Divergent differentiation in pleomorphic xanthoastrocytoma. Evidence for a neuronal element and possible relationship to ganglion cell tumors. Am J Surg
Pathol 1996;20:80-5.
9.
Giangaspero F, Chieco P, Ceccarelli C, Lisignoli G, Pozzuoli R, Gambacorta M, et al. "Desmoplastic" versus
"classic" medulloblastoma: comparison of DNA content, histopathology and differentiation. Virchows Arch A
Pathol Anat 1991;418:207-14.
10. Kawahara E, Oda Y, Ooi A, Katsuda S, Nakanishi I, Umeda S. Expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP)
in peripheral nerve sheath tumors. A comparative study of immunoreactivity of GFAP, vimentin, S-100 protein,
and neurofilament in 38 schwannomas and 18 neurofibromas. Am J Surg Pathol 1988;12:115-20.
11. Thompson L, Bouffard JP, Sandberg GD, Mena H. Primary ear and temporal bone meningiomas: a
clinicopathologic study of 36 cases with a review of the literature. Mod Pathol 2003;16:236-45.
Symbolförklaringar
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Medicinsk enhet för in vitrodiagnostik
Batchkod
Läs bruksanvisningen
Använd före
(123925-001)
Dako Denmark A/S
Tillverkare
P02433SE_001_GA524/2013.06 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR-nr 33 21 13 17
