FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Gross Cystic Disease Fluid Protein-15
Clone 23A3
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Kod GA077
Svenska
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Gross Cystic Disease Fluid Protein-15, Clone 23A3, Ready-to-Use (Dako
Omnis) är avsedd för användning vid immunhistokemi tillsammans med Dako Omnis-instrumentet. Antikroppar till
GCDFP-15 (Gross Cystic Disease Fluid Protein-15) kan vara användbara för identifiering av bröstkarcinom och
metastatiska tumörer med ursprung i bröstet (1). Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning
måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga kontroller, och måste utvärderas av
en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester.
Synonymer för
antigen
GCDFP-15, extra-parotid-glykoprotein (EP-GP), glykoprotein (gp17), prolaktin-inducerbart protein (PIP),
sekretoriskt aktin-bindande protein (SABP) (2)
Sammanfattning
och förklaring
GCDFP-15 är ett 15 kDa monomeriskt sekretoriskt glykoprotein som kodas av PIP-genen i kromosom 7 q32-36området (3,4). GCDFP-15 är en markör för apokrin differentiering och uttrycks i vätska från cystisk bröstvävnad
samt i apokrina körtlar, tårkörtlar, ceruminösa körtlar, Molls körtlar och ekkrina körtlar. Serösa celler i de
submandibulära, de sublinguala och de små spottkörtlarna samt i de nasala och bronkiala körtlarna uttrycker
också GCDFP-15 (5). Vid användning av IHC har uttryck av GCDFP-15 observerats i neoplastiska celler från
primära och metastatiska brösttumörer (1,26-8). Immunreaktivitet har även observerats i karcinom i spottkörtlar,
svettkörtlar och prostata, medan majoriten av övriga maligniteter som utvärderades var icke-reaktiva (1).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Allmänna instruktioner för immunhistokemisk
färgning) (www.dako.com/IHC-instructions) eller detektionssystemets instruktioner om IHC-procedurer.
Medföljande reagens
Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och
0,015 mol/L natriumazid.
Klon: 23A3. Isotyp: IgG2a, kappa.
Immunogen
Rekombinant protein motsvaras av den utsöndrade domänen i GCDFP-15-molekylen (Gross Cystic Disease
Fluid Protein-15) (15 kDa).
Specificitet
Vid Western blotting av humant MDA-MB-361-cellysat märker antikroppen ett band på 15 kDa motsvarande den
förväntade molekylvikten för GCDFP-15.
Försiktighetsåtgärder
1.
För yrkesmässigt bruk.
2.
Den här produkten innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form.
I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
3.
I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4.
Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5.
Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala, statliga och överstatliga föreskrifter.
Förvaring
Snabbguide
(123781-001)
Förvaras vid 2-8 °C. Locket ska hållas stängt vid f örvaring. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges
på reagensflaskan. Produkten förblir stabil i instrumentet i 80 timmar. Kvarstående tid för produktens stabilitet i
instrumentet kontrolleras av Dako Omnis-programvaran. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden
som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt.
Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt med patientprover. Kontakta Dakos tekniska support
om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och det
misstänks vara något fel med antikroppen.
Steg
Kommentarer
Fixering/inbäddning
Formalinfixerade, paraffininbäddade
Avparaffinering i instrumentet
Förbehandling
EnVision™ FLEX, High pH (kod GV804)
30 min HIER
Antikropp
Bruksfärdig
10 min inkubation
P02737SE_002_GA077/2013.08 s. 1/3
Negativ kontroll
FLEX Negative Control, Mouse (kod GA750)
10 min inkubation
Visualisering
EnVision™ FLEX (kod GV800) + EnVision™
FLEX+ Mouse LINKER (kod GV821)
Block: 3 min; Länk: 10 min; Polymer:
20 min; Kromogen: 5 min
Kontrastfärg
Hematoxylin (kod GC808)
3 min inkubation
Kontrollvävnad
Brösthyperplasi
Cytoplasmatisk färgning
Objektglas
FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020)
Rekommenderas för bättre
vidhäftning av vävnadssnitten till
objektglas
Montering
Icke-vattenhaltigt, permanent
monteringsmedel som krävs
Efter färgning måste snitten
dehydreras, rengöras och monteras
med permanent monteringsmedel
Instrumentering
Dako Omnis
Reagens förvaras i
instrumentspecifika flaskor
*Användaren måste alltid läsa produktbladet för detaljerade anvisningar om färgningsproceduren och hantering av produkten.
Provberedning
Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt.
Vävnadsprover ska snittas i 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med värmeinducerad
epitopåtervinning (HIER) krävs. För förbehandling av vävnader rekommenderas HIER med utspädd EnVision™
FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis) med kod GV804. Avparaffinering, rehydrering och
målåtervinning utförs på Dako Omnis. Se Dako Omnis användarhandbok.
Låt inte vävnadssnitten torka under förbehandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av
FLEX IHC Microscope Slides med kod K8020.
Färgningsprocedur
Program: Färgningsstegen och inkubationstiderna är förprogrammerade i programvaran för Dako Omnis. Se
användarhandboken för Dako Omnis för mer information om laddning av objektglas och reagens. Kontakta
Dakos tekniska service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Omnis-systemet. Alla inkubationssteg på
Dako Omnis utförs vid 32 °C.
Visualisering: Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), med kod
GV800 kombinerat med EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (Dako Omnis), med kod GV821. Visualiseringen
utförs på Dako Omnis.
Kontrastfärgning: Den rekommenderade kontrastfärgen är Hematoxylin (Dako Omnis) med kod GC808.
Kontrastfärgningen utförs på Dako Omnis.
Montering: Efter färgning på Dako Omnis måste snitten dehydreras, rengöras och monteras med permanent
monteringsmedel.
Kontroller: Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientproverna och med samma protokoll.
Den positiva kontrollvävnaden ska innehålla brösthyperplasi och cellerna/strukturerna ska uppvisa
reaktionsmönster som dem som beskrivs för denna vävnad i avsnittet ”Prestandaegenskaper”. Rekommenderat
negativt kontrollreagens är FLEX Universal Negative Control, Mouse (Dako Omnis) med kod GA750.
Tolkning av
färgningen
Det cellulära färgningsmönstret är cytoplasmatiskt. Märkning av det utsöndrade GCDFP-15 i det intercellulära
utrymmet kan observeras.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: De glandulära och duktala epitelialcellerna i brösthyperplasi bör uppvisa minst en fokal
cytoplasmatisk färgningsreaktion med måttlig till stark intensitet.
Sammanfattning av normal vävnadsreaktivitet (9):
Vävnadstyp (antal testade)
(123781-001)
Positivt färgade vävnadselement
Binjure (2)
0/2
Benmärg (1)
0/1
Hjärna/cerebellum (3)
0/3
Hjärna/cerebrum (3)
0/3
Bröst (3)
2/3; Glandulära och duktala celler, cytoplasmatiska
Cervix (3)
0/3
Tjocktarm (3)
0/3
Esofagus (2)
0/2
Njure (3)
0/3
Lunga (3)
Mesotelcell (2)
0/3
0/2
Nerv, perifer (2)
0/2
Äggstock (2)
0/2
Bukspottkörtel (3)
0/3
P02737SE_002_GA077/2013.08 s. 2/3
Bisköldkörtel (1)
0/1
Hypofys (3)
0/3
Prostata (3)
0/3
Spottkörtel (2)
2/2; Serösa körtlar, cytoplasmatiska
Hud (3)
3/3; Svettkörtlar, cytoplasmatiska
Tunntarm (2)
0/2
Mage (3)
0/3
Sköldkörtel (3)
0/3
Tonsill (2)
0/2
Livmoder (3)
0/3
Onormala vävnader: Måttlig till stark diffus eller punktvis färgning observerades i 24/58 (41 %) primära och
metastatiska bröstkarcinom, och ytterligare 25 fall demonstrerade svag och/eller fokal färgning, vilket gav en total
känslighet på 84,5 %. I mikroanalyser av bröstkarcinomvävnad demonstrerade antikroppen måttlig till stark diffus
eller punktvis färgning på 4/63 kärnor (6 %), och ytterligare 8 kärnor uppvisade svag och/eller fokal färgning med
en total känslighet på 22 % (10).
Referenser
1.
Wick MR, Lillemoe TJ, Copland GT, Swanson PE, Manivel JC, Kiang DT. Gross cystic disease fluid protein15 as a marker for breast cancer: immunohistochemical analysis of 690 human neoplasms and comparison
with alpha-lactalbumin. Hum Pathol 1989;20:281-7.
2.
Fritzsche FR, Thomas A, Winzer KJ, Beyer B, Dankof A, Bellach J, Dahl E, Dietel M, Kristiansen G. Coexpression and prognostic value of gross cystic disease fluid protein 15 and mammaglobin in primary breast
cancer. Histol Histopathol 2007;22:1221-30.
3.
Caputo E, Carratore V, Ciullo M, Tiberio C, Mani JC, Piatier-Tonneau D, Guardiola J. Biosynthesis and
immunobiochemical characterization of gp17/GCDFP-15. A glycoprotein from seminal vesicles and from
breast tumors, in HeLa cells and in Pichia pastoris yeast. Eur J Biochem 1999;265:664-70.
4.
Myal Y, Robinson DB, Iwasiow B, Tsuyuki D, Wong P, Shiu RP. The prolactin-inducible protein
(PIP/GCDFP-15) gene: cloning, structure and regulation. Mol Cell Endocrinol 1991;80:165-75.
5.
Viacava P, Naccarato AG, Bevilacqua G. Spectrum of GCDFP-15 expression in human fetal and adult
normal tissues. Virchows Arch 1998;432:255-60.
6.
Haagensen DE Jr. Is cystic disease related to breast cancer? [review]. Am J Surg Pathol. 1991;15:687-94.
7.
Mazoujian G, Bodian C, Haagensen DE Jr, Haagensen CD.Expression of GCDFP-15 in breast carcinomas.
Relationship to pathologic and clinical factors. Cancer 1989;63:2156-61.
8.
Hall RE, Clements JA, Birrell SN, Tilley WD. Prostate-specific antigen and gross cystic disease fluid protein15 are co-expressed in androgen receptor-positive breast tumours. Br J Cancer 1998;78:360-5.
9.
Dako in-house documentation IHC040408-150
10. Bhargava R, Dabbs DJ. Use of immunohistochemistry in diagnosis of breast epithelial lesions [review]. Adv
Anat Pathol. 2007;14:93-107.
Utgåva 08/13
(123781-001)
P02737SE_002_GA077/2013.08 s. 3/3
