FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Herpes Simplex Virus Type 1
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kod IS521
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Herpes Simplex Virus Type 1, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer Plus), är
avsedd för användning vid immunhistokemi tillsammans med Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument.
Antikroppen reagerar med typspecifika såväl som vanliga typer av antigener. Antikroppen är till hjälp vid identifieringen
av herpes simplexvirus i humant cellulärt material (1, 2). Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning
måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga kontroller och skall utvärderas av en
kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester.
Sammanfattning
och förklaring
Herpex simplexvirus (HSV) tillhör virusfamiljen Herpesviridae. HSV-genomen innefattar ett linjärt dubbelsträngat
DNA på 150 kb, inneslutet i en nukleokapsid som omges av tegument och ett hölje bestående av ett lipidbilager och
olika glykoproteiner (3, 4). Vid infektion binder HSV till cellytan på värdcellen via höljeglykoproteiner och virushöljet
fusioneras med membranet (5-8).
HSV infekterar mukoepiteliala eller hudceller och HSV typ 1 associeras primärt med orala, faryngeala, faciala,
okulära infektioner och infektioner i centrala nervsystemet, medan HSV typ 2 associeras med anala och genitala
infektioner (3, 5). Efter primärinfektionen går herpesvirus tillbaka in i ganglia i värdnervsystemet. Där reproducerar
viruset, avskiljs från värdimmunövervakningen och fortsätter en inaktiv levnad. När det väl reaktiverats färdas viruset
längs sensoriska neuroner till de innerverade mukokutana platserna, genomgår reproducering och leder till
bildningen av ett kluster av vesiklar i närheten av det ursprungliga anatomiska exponeringsstället (3).
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHCprocedurer för: 1) Procedurprincip, 2) Material som behövs men inte medföljer, 3) Förvaring, 4) Provberedning,
5) Färgningsprocedur, 6) Kvalitetskontroll, 7) Felsökning, 8) Tolkning av färgningen, 9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Bruksfärdig polyklonal kaninantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och
0,015 mol/L natriumazid.
Immunogen
Tvättmedelssolubiliserad HSV typ 1 (stam MacIntyre)-infekterade celler från hel hornhinna från kanin (kontinuerlig
cellinje).
Specificitet
Denna antikropp reagerar med HSV typ 1-specifika antigener och med antigener som är gemensamma för HSV typ
1 och typ 2. Antikroppen reagerar med alla större glykoproteiner som är närvarande i virushöljet och med minst ett
kärnprotein, enligt bestämning med korsad immunoelektrofores. Kontaminerande antikroppar för humant och bovint
serum har avlägsnats genom absorption i fast fas.
I ELISA visar antikroppen ingen reaktion med human och bovin plasma. Antikroppen visar ingen korsreaktivitet med
cytomegalovirus och Epstein-Barr-virus.
I indirekt immunfluorescens kan en svag korsreaktivitet mot varicella zoster-virus förväntas om antikroppen används
i en relativt hög koncentration. Ingen korsreaktivitet upptäcktes emellertid när antikroppen testades vid en spädning
på 1:100.
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer
kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva
metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
5. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C. Får inte användas efter det u tgångsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera
alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder på
instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna.
Kontakta Dako Teknisk Support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras med variationer i
laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen.
Provberedning
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt. Vävnadsprover skall
snittas i cirka 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling med värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) krävs med användning av Dako PT Link (kod
PT100/PT101). Se PT Link användarmanual för ytterligare information. Optimala resultat erhålls genom att
förbehandla vävnader med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kod K8010/K8004).
Paraffininbäddade snitt: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt rekommenderas med
användning av 3-i-1- provberedningsprocedur för Dako PT Link. Följ förbehandlingsproceduren som beskrivs i
bipacksedeln för EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x), (kod K8010/K8004). OBS: Efter färgning
måste snitten dehydreras, klargöras och monteras med permanent monteringsmedel.
(118089-002)
Dako Denmark A/S
IS521/SE/MNI/2009.12.04 s. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Avparaffinerade snitt: Förbehandling av avparaffinerade, formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med Dako
PT Link rekommenderas, där samma procedur ska följas såsom beskrivs för paraffininbäddade snitt. Efter färgning
ska objektglasen monteras med ett vattenbaserat eller permanent monteringsmedel.
Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX
IHC Microscope Slides (kod K8020).
Färgningsprocedur
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kod K8010). Färgningsstegen och inkuberingstiderna är förprogrammerade i programvaran för Dako
Autostainer/Autostainer Plus-instrument, med användning av följande protokoll:
Protokollmall: FLEXRTU2 (200 µL dispenseringsvolym) eller FLEXRTU3 (300 µL dispenseringsvolym)
Autoprogram: HSV1 (utan motfärgning) eller HSV1H (med motfärgning)
Steget ”hjälpmedel” (auxiliary) skall ställas in på ”sköljbuffert” (rinse buffer) i färgningskörningar med 10 eller färre
objektglas. För färgningskörningar med mer än 10 objektglas skall det ytterligare steget ställas in på ”ingen” (none).
Detta säkerställer jämförbara tvättider.
Alla inkubationssteg skall utföras vid rumstemperatur. Se användarhandboken för instrumentet i fråga för ytterligare
information. Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Autostainer-instrumentet
som används.
Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium. Om den utvärderande patologen önskar en annan färgningsintensitet kan en
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist från Dako kontaktas för information om omprogrammering av
protokollet. Bekräfta att prestandan för det justerade protokollet fortfarande är giltig genom att utvärdera att
färgningsmönstret är identiskt med det färgningsmönster som beskrivs i "Prestandaegenskaper".
Motfärgning i hematoxylin rekommenderas med användning av EnVision FLEX Hematoxylin, Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (kod K8018). Ett icke vattenhaltigt, permanent monteringsmedel rekommenderas.
Positiva och negativa kontroller bör analyseras samtidigt med patientproverna med samma protokoll. Den positiva
kontrollvävnaden bör inkludera en lesion med HSV-infektion och cellerna/strukturerna bör visa reaktionsmönster som
beskrivs för denna vävnad i "Prestandaegenskaper" i alla positiva prover. Den rekommenderade negativa kontrollen
är FLEX Negative Control, Rabbit (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod IS600).
Tolkning av färgningen
Celler märkta av antikroppen visar en stark, ibland diffus intranukleär färgning.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: Denna antikropp märker inte normal vävnad.
Onormala vävnader: Antikroppen märkte 7/7 CNS-vävnader från patienter med herpes simplexencefalit (1) och
14/14 esofageala lesioner från patienter med herpes simplexesofagit (2). Infekterade celler i en lesion med HSV
visar en svag till stark färgningsreaktion.
Referenser
1. Debiasi RL, Kleinschmidt-DeMasters BK, Richardson-Burns S, Tyler KL. Central nervous system apoptosis in
human herpes simpex virus and cytolomegavirus encephalitis. J Infect Dis 2002;186:1547-57.
2. Itoh T, Takahashi T, Kusaka K, Kawaura K, Nakagawa Y, Yamakawa J, et al. Herpes simplex esophagitis from
1307 autopsy cases. J Gastroenterol Hepatol 2003;18:1407-11.
3. Fatahzadeh M, Schwartz RA. Human herpes simplex virus infections: epidermiology, pathogenesis,
symptomatology, diagnosis and management. J Am Acad Dermatol 2007; 57:737-63.
4. Grünewald K, Desai P, Winkler DC, Heymann JB, Belnap DM, Baumeister W et al. Three-dimensional structure
of herpes simplex virus from cryo-electron tomography. Science 2003;302:1396-8.
5. Koelle DM, Corey L. Recent progress in herpes simplex virus immunobiology and vaccine research. Clin
Microbiol Rev 2003;16:96-113.
6. Turner A, Bruun B, Minson T, Browne H. Glycoproteins gB, gD, and gHgL of herpes simplex virus type 1 are
necessary and sufficient to mediate membrane fusion in a cos cell transfection system. J Virol 1998;72:873-5.
7. Subramanian RP, Geraghty RJ. Herpes simplex virus type 1 mediates fusion trough a hemifusion intermediate by
sequential activity of glycoproteins D, H, L and B. PNAS 2007; 104:2903-8.
8. Mettenleiter TC. Herpesvirus assembly and egress. J Virol 2002;76:1537-47.
Förklaring av symboler
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Använd före
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Innehåller tillräckligt för <n>
tester
Tillverkare
Läs bruksanvisningen
Batchkod
(118089-002)
Dako Denmark A/S
IS521/SE/MNI/2009.12.04 s. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
