FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Ki-67 Antigen
Klon MIB-1
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kod IS626
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, klon MIB-1, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus),
är avsedd för användning vid immunhistokemi tillsammans med Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument.
Antikroppen har visat sig värdefull för påvisning av Ki-67-antigen i normala och neoplastiska celler, till exempel i
mjukvävnadssarkom (1), adenokarcinom i prostata (2) och bröstkarcinom (3). Differentiell identifiering underlättas av
resultaten från en panel av antikroppar. Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste göras
genom morfologiska studier, med användning av lämpliga kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog
inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Sammanfattning
och förklaring
Ki-67-antigen är ett kärnprotein som definieras av sin reaktivitet med monoklonal antikropp från Ki-67-klonen (4).
Två isoformer på 345 och 395 kDa har identifierats (5). Ki-67-antigen uttrycks företrädesvis vid alla aktiva faser
i cellcykeln (G1, S, G2 och M-faser), men är frånvarande i vilande celler (G0-fas) (4). Under interfasen kan antigenen
uteslutande detekteras inom kärnan medan det mesta av proteinet är flyttat till kromosomytan vid mitos. Antigenen
bryts snabbt ned när cellen går in i det icke-proliferativa stadiet (6) och det verkar inte finnas något Ki-67-uttryck vid
DNA-reparationsprocesser (7).
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHCprocedurer för: (1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning,
(5) Färgningsprocedur, (6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein
och 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: MIB-1 (8) Isotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Human rekombinant peptid, motsvarande ett Ki-67 cDNA-fragment med 1002 baspar (8).
Specificitet
I Western blotting av lysat av den multipla myelom-cellinjen, IM-9, märker MIB-1-antikroppen band på 345 och
395 kDa, identiska med banden som märkts av den ursprungliga Ki-67-antikroppen. Vidare visar Western blotting
och kompetitiva bindningsexperiment klart att MIB-1, som den ursprungliga Ki-67-antikroppen, reagerar med
en epitop som kodas av ett repeterande element med 66 baspar i Ki-67-genen.
I immunkistokemi ger antikropparna MIB-1 och Ki-67 identiska färgningsmönster på frysta seriesnitt av tonsill (8).
MIB-1-antikroppen känner igen nativa Ki-67-antigen och rekombinanta fragment av Ki-67-molekylen (8).
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form.
I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
5. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaring
(116573-004)
Dako Denmark A/S
Förvaras vid 2–8 °C. Använd inte efter utgångsdatum et tryckt på flaskan. Användaren måste validera
alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder
på instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med
patientproverna. Kontakta Dako Teknisk Support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras med
variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen.
IS626/SE/KIA/2011.09.20 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Provberedning
inklusive material
som behövs men
inte medföljer
Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt. Vävnadsprover skall
snittas i cirka 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling med värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) krävs med användning av Dako PT Link (kod
PT100/PT101). Se PT Link användarmanual för ytterligare information. Optimala resultat erhålls genom att
förbehandla vävnader med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kod K8005).
Paraffininbäddade snitt: Förbehandling av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt rekommenderas med
användning av 3-i-1- provberedningsprocedur för Dako PT Link. Följ förbehandlingsproceduren som beskrivs i
bipacksedeln för EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kod K8005). OBS: Efter färgning måste
snitten dehydreras, klargöras och monteras med permanent monteringsmedel.
Avparaffinerade snitt: Förbehandling av avparaffinerade, formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med Dako
PT Link rekommenderas, där samma procedur ska följas såsom beskrivs för paraffininbäddade snitt. Efter färgning
ska objektglasen monteras med ett vattenbaserat eller permanent monteringsmedel.
Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX
IHC Microscope Slides (kod K8020).
Färgningsprocedur
inklusive material
som behövs men
inte medföljer
Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod
K8010), som ersätter High pH Target Retrieval Solution i denna sats med EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, Low pH (50x) (kod K8005). Färgningsstegen och inkubationstider är förprogrammerade i programvaran för
Dako Autostainer/ Autostainer Plus-instrument, med följande protokoll:
Mallprotokoll: FLEXRTU2 (dispenservolym på 200 µL) eller FLEXRTU3 (dispenservolym på 300 µL)
Autoprogram: Ki67 (utan kontrastfärgning) eller Ki67H (med kontrastfärgning)
Det ytterligare steget ska ställas in på ”sköljbuffert” i färgningskörningar med ≤10 objektglas. För färgningskörningar
med mer än 10 objektglas skall det ytterligare steget ställas in på ”ingen”. Detta säkerställer jämförbara tvättider.
Alla inkubationssteg skall utföras vid rumstemperatur. Se användarhandboken för instrumentet i fråga för detaljer.
Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Autostainer-instrumentet som används.
Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och bör bestämmas av varje
enskilt laboratorium. Om den utvärderande patologen önskar en annan färgningsintensitet kan
en applikationsspecialist/teknisk servicespecialist från Dako kontaktas för information om omprogrammering
av protokollet. Bekräfta att prestandan för det justerade protokollet fortfarande är giltig genom att utvärdera
att färgningsmönstret är identiskt med det färgningsmönster som beskrivs i ”Prestandaegenskaper”.
Kontrastfärgning i hematoxylin med EnVision FLEX Hematoxylin (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod K8018)
rekommenderas. Icke-vattenhaltigt, permanent monteringsmedium rekommenderas.
Positiva och negativa kontroller bör analyseras samtidigt med patientproverna med samma protokoll. Den positiva
kontrollvävnaden bör inkludera tonsill och cellerna/strukturerna bör visa reaktionsmönster som beskrivs för denna
vävnad i ”Prestandaegenskaper” i alla positiva prover. Den rekommenderade negativa kontrollen är FLEX Negative
Control, Mouse (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod IS750).
Tolkning av
färgningen
Celler märkta av antikroppen visar ett nukleärt färgningsmönster utom i mitotiska celler, där kromosomerna
och cytoplasman är märkta.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: Slemhinnehalsceller och djupa kryptceller i tunntarm och tjocktarm såväl som germinala
centerceller i Payers plack är positiva med antikroppen. Ytepitelceller och andra slemhinneceller, t.ex. Paneths celler
och celler i submukös bindväv är negativa. Muskelceller är också negativa med undantag av ett fåtal positiva celler i
glatt muskulatur. Njure, lever, bukspottkörtel och hjärna är negativa (9).
Sporadisk märkning av vävnadskomponenter i kärlväggar och stroma i bukspottskörtel kan observeras
i immunhistokemi. I tonsill visar B-celler i germinalcentrets mörka zon en måttlig till stark färgningsreaktion, medan
B-celler i germinalcentrets ljusa zon visar en svag till måttlig färgningsreaktion.
Onormala vävnader: I en undersökning av 123 mjukvävnadssarkom visades Ki-67 med det högsta uttrycket
i maligna fibrösa histiocytom och det lägsta i liposarkom med användning av MIB-1-antikroppen. Antikroppen märkte
även Ki-67-antigenen i 221 prostatakarcinom (2) och 919 bröstkarcinom (3). Membranös/cytoplasmisk färgning
rapporterades i en studie av 322 invasiva duktala bröstkarcinom och membranös/cytoplasmisk Ki-67 befanns
associera med grad 3-tumörer, ER-negativitet och HER2-amplifiering (10).
(116573-004)
Dako Denmark A/S
IS626/SE/KIA/2011.09.20 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Litteraturhänvisningar
1.
Huuhtanen RL, Blomqvist CP, Wiklund TA, Böhling TO, Virolainen MJ, Tukiainen EJ, et al. Comparison of the
Ki-67 score and S-phase fraction as prognostic variables in soft-tissue sarcoma. Br J Cancer 1999; 79:945–51.
2.
Borre M, Bentzen SM, Nerstrøm B, Overgaard J. Tumor cell proliferation and survival in patients with prostate
cancer followed expectantly. J Urol 1998; 159:1609–14.
3.
Seshadri R, Leong AS-Y, McCaul K, Firgaira FA, Setlur V, Horsfall DJ. Relationship between p53 gene
abnormalities and other tumour characteristics in breast-cancer prognosis [published erratum appears in Int
J Cancer 1996; 69:354]. Int J Cancer 1996; 69:135–41.
4.
Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle analysis of a cell proliferationassociated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984; 133:1710–5.
5.
Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al. Immunobiochemical and molecular
biologic characterization of the cell proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal
antibody Ki-67. Am J Pathol 1991; 138:867–73.
6.
Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown [review]. J Cell Physiol 2000;
182:311–22.
7.
Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of an enzyme-linked immunosorbent
assay based on the detection of the Ki-67 protein. J Immunol Methods 1994; 177:113–7.
8.
Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-67-equivalent murine
monoclonal antibodies (MIB 1–3) generated against bacterially expressed parts of the Ki-67 cDNA containing
three 62 base pair repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993; 68:629–36.
9.
Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al. Monoclonal antibodies against
recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed
formalin-fixed paraffin sections. J Pathol 1992; 168:357–63.
10. Faratian D, Munro A, Twelves C,Bartlett JMS. Membranous and cytoplasmic staining of Ki67 is associated with
HER2 and ER status in invasive breast carcinoma. Histopathology 2009:54:254-257.
Förklaring av symboler
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Använd före
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Innehåller tillräckligt för <n>
tester
Tillverkare
Läs instruktionerna för
användning
Batchkod
(116573-004)
Dako Denmark A/S
IS626/SE/KIA/2011.09.20 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
