Dako
Dual Endogenous
Enzyme Block
Kod S2003
Bruksfärdig
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
Denna produkt är avsedd för användning i peroxidas- såväl som alkalisk fosfatasbaserade immunhistokemiska
(IHC) färgningsprocedurer på cellpreparat, frusna vävnadssnitt, och formalinfixerade, paraffininbäddade
vävnadssnitt.
Medföljande
reagenser
Kod S2003
Dual Endogenous Enzyme Block levereras i följande storlekar:
15 ml
10 x 11 ml
för manuell färgning
förpackad för användning med Dako Autostainer
Försiktighetsåtgärder
1.
2.
3.
4.
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C.
Reagensberedning
Bruksfärdig. Låt anta rumstemperatur före användning.
Procedur
Prover inkuberas med Dual Endogenous Enzyme Block i 10 minuter vid rumstemperatur, följt av en sköljning
med en lämplig tvättbuffert såsom Tris-buffert, PBS eller TBS, före applicering av primärantikropp.
Resultat
Endogen aktivitet av peroxidas, pseudoperoxidas och alkalisk fosfatas observeras ofta i IHCfärgningsprocedurer. Bakgrundsfärgning, som inte är relaterad till den immunspecifika reaktionen, kan
förekomma med vissa molekyler.
För yrkesanvändning.
Liksom med alla produkter av biologiskt ursprung måste korrekta procedurer användas vid hanteringen.
Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
Oanvänd lösning ska kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Molekyler, som vanligen påverkas av peroxidas, är hemoproteiner såsom hemoglobin i röda blodkroppar,
myoglobin i muskelceller, cytokrom i granulocyter, och monocyter, såväl som katalaser i lever och njure.1
Endogen AP-aktivitet är starkt närvarande på ett flertal celler och vävnader, inklusive urinblåseepitel, lamina
propria i äggstockar, njure och spottkörtel.2 Intestinal AP finns vanligen i borstbrämen hos epitelialceller i
tunntarmen.3 Human placental AP framställs vanligen av mikrovilli hos syncytiotrofoblast i placenta.4
I cellutstrykpreparat är AP närvarande i neutrofila segmenterade celler, neutrofila bandceller, samt neutrofila
metamyelocyter. Alkalisk fosfatas kan även förekomma i leukemiceller vid kronisk och akut granulocytisk
leukemi och i vissa neutrofila leukemoida reaktioner.
Vid utvärderingen av vävnadsprover med ICH, med användning av HRP- och AP-metoder, kan närvaron av
endogen peroxidas och AP ofta skymma den specifika färgningen av målantigenen. Endogen peroxidas och
AP-aktivitet kan hämmas med användning av Dual Endogenous Enzyme Block, som undertrycker endogen
peroxidas, pseudoperoxidas och alkalisk fosfatas i cellpreparat, frusna vävnadssnitt och paraffininbäddade
vävnadssnitt.
Prover
Frysta vävnadssnitt och cellpreparat, såsom utstryk av perifert blod, benmärg och andra kroppsvätskor
innehållande ett stort antal hematopoetiska celler, kan användas. För frysta vävnadssnitt rekommenderas
fixering i aceton. För blod- och benmärgsutstryk rekommenderas fixering i
aceton/metanol.
TiIllämpningar
Denna produkt undertrycker icke-specifik färgning på grund av endogen peroxidas- och
pseudoperoxidasaktivitet i peroxidasbaserade IHC-färgningsprocedurer. Denna produkt undertrycker även
icke-specifik färgning på grund av endogen AP-aktivitet i AP-baserade IHC-färgningsprocedurer.
Begränsningar
Provfärgning är beroende av hantering och bearbetning av vävnaden före färgning. Inkorrekt fixering, frysning,
upptining, tvättning, torkning, uppvärmning eller snittning kan ge artefakter, antikroppsinfångning eller falskt
negativa resultat. Falskt positiv färgning kan även orsakas av korsreaktivitet eller icke-specifik reaktion med
nekrotiska eller degenererade celler. Lys av erytrocyter kan förekomma vid användning av denna produkt på
blod- och benmärgsutstryk.
(112110-003)
304869SE_002 s. 1/2
Referenser
1. Boenisch T. In: Naish SJ, ed. Handbook immunochemical staining methods. Carpinteria: Dako 1989
2. Ponder BA and Wilkinson MM. Inhibition of endogenous tissue alkaline phosphatase with the use of
alkaline phosphatase conjugates in immunohistochemistry. J Histochem Cytochem 1981; 29(8):981
3. Uchida T, et al. Immunohistochemical localization of placental and intestinal alkaline phosphatases. In
DeLellis RA (ed.) Advances in immunohistochemistry. New York: Masson Publishing 198;185
4. Groote GD, et al. Use of monoclonal antibodies to detect human placental alkaline phosphatase. Clin
Chem 1983; 29(1):115
Edition 06/10
(112110-003)
304869SE_002 s. 2/2
