53-1058-02, Mar-12
Phadebact® Streptococcus Tests
(A, B, C, G), (A-D, F, G) och (A-D, G)
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
Bruksanvisning
MKL Diagnostics AB
Kung Hans Väg 3
SE-192 68 Sollentuna
Sweden
Co-agglutination
Stafylokocker med antikroppar
Mikroorganism med motsvarande
antigener
ANVÄNDNINGSOMRÅDE
Phadebact® Streptococcus Tests, Strep Respiratory Test, Strep A Test, Strep B Test, Strep D Tests och Strep F Test är
avsedda för identifiering av beta-hemolytiska streptokocker som tillhör grupperna A, B, C, D, F och G.
SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING
Differentiering av betahemolytiska streptokocker i Lancefieldgrupper är viktigt för behandling och prognos av patient
(1). Genom att ge läkaren information om serologisk grupp kan rätt behandling ges samtidigt som onödig användning
av antibiotika undviks (2). De streptokocker som oftast associeras med humana streptokockinfektioner tillhör
grupperna A, B, C, D, F and G (3-9).
Det finns åtskilliga metoder för identifikation av streptokocker. Metoder som biokemisk typning och bacitracin test
används för preliminär identifiering. Lancefield precipitation, immunoelektrofores och latex agglutination ger slutlig
identifiering. Dessa metoder kräver dock extraktion med gruppspecifika antigener. Phadebact® Streptococcus
är baserat på en s k co-agglutinationsteknik (10) som är en snabb och enkel metod för direkt identifiering av
Streptokocker grupp A, B, C, D, F och G.
ANALYSPRINCIP
Co-agglutination teknik: Antikroppar från kaniner, som är specifika mot streptokockgrupperna A, B, C, D, F and G,
är bundna till Protein A på ytan av avdödade stafylokocker. När ett prov innehåller en av streptokockgrupperna och
blandas med motsvarande reagens så binds de specifika antigenerna som sitter på ytan av streptokockerna till de
specifika antikropparna. En agglutination synlig för blotta ögat bildas.
REAGENS
Varje Phadebact® kit innehåller tillräckligt med reagens för att utföra följande antal bestämningar (se nedan).
Produkt
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Phadebact® Strep A-D,F, G Test
Phadebact® Strep A-D, G Test
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D 100 Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Antal bestämningar
300
300
250
200
100
100
100
50
50
För att underlätta tolkningen av resultaten är reagensen blå-färgade (metylenblått).
Aktiva komponenter
Aktiva komponenter för de förtecknade produkterna är följande:
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Gruppspecifikt antiserum, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
En flaska av vardera Strep A, B, C och G reagenser.
Phadebact® Strep A-D, F, G Test
Gruppspecifikt antiserum, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
En flaska av vardera Strep A, B, C, D, F och G reagenser.
Phadebact® Strep A-D, G Test
Gruppspecifikt antiserum, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
En flaska av vardera Strep A, B, C, D och G reagenser.
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Gruppspecifikt antiserum, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
En flaska av vardera Strep A, C and G reagenser.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
Phadebact® Strep A Test
•
Strep A Reagens:
Specifika antikroppar, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
Phadebact® Strep B Test
•
Strep B Reagens:
Specifika antikroppar, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
Phadebact® Strep D 100 Test
•
Strep D Reagens:
Specifika antikroppar, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
1 flaska
1 flaska
1 flaska
1 flaska
1 flaska
2 flaskor
2 flaskor
Phadebact® Strep D Test
•
Strep D Reagens:
Specifika antikroppar, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
Phadebact® Strep F Test
•
Strep F Reagens:
Specifika antikroppar, från kanin, bundet till avdödade stafylokocker.
•
Phadebact® Control reagens:
Gammaglobulin från icke-immuniserade kaniner, bundet till avdödade stafylokocker.
1 flaska
1 flaska
1 flaska
1 flaska
Övriga komponenter
•
Dropphattar
•
Engångskort
•
Bruksanvisning
Försiktighetsåtgärder
Endast tillämpning inom in vitro diagnostik.
Varning! Reagensen innehåller konserveringsmedlet natriumazid (NaN3). Natriumazid kan reagera med bly och
koppar och bilda mycket explosiva metallazider. Vid kassation, spola rikligt med vatten för att förhindra ackumulering
av azid.
Förberedelse reagens
Reagensen är FÄRDIGA ATT ANVÄNDAS.
Utgångsdatum och förvaring
Utgångsdatum står på ytteretiketten och på flasketiketterna. Det rekommenderas att kitet förvaras mellan 2-8°C.
Reagens får ej frysas.
PROVHANTERING
För information och hantering av prov så hänvisas till standardlitteratur. Prov som ska undersökas kan tas från vilken
del som helst på kroppen där det finns levande organismer. Om provet ska transporteras till ett laboratorium så bör
bomullspinnen nedsänkas i ett transportmedium, t ex Stuart´s. Bomullspinnen bör nå laboratoriet inom 24-48 timmar.
Inga tillsatser och/eller konserveringsmedel behövs under transporten. Prov från patienter som tar antibiotika kan
innehålla väldigt få eller inga levande bakterier alls.
METOD
Tillhandahållet material
Se REAGENS.
Material som behövs utöver det tillhandahållna materialet
•
Primärkultur
•
Näringsmedium (Todd-Hewitt Broth tillverkat av BBL rekommenderas starkt) behövs endast för
referensbuljongmetod
•
Pasteur pipetter
•
Engångsöglor för ympning eller liknande
•
Inkubator 35-37°C (endast om referensbuljongmetod används)
•
Klocka, avläsbar 1 min
Metodparametrar
Reaktionstemperatur
Reaktionstid
Reagensvolym
rumstemperatur
1 minut
en droppe för varje grupp som testas
Förberedelse prov
För information och hantering av primärkulturer så hänvisas till standardlitteratur. Det finns tre alternativa metoder för
preparering av prov som ska användas i Phadebact® Streptococcus testet.
I.
•
•
•
•
Direkt koloni test
Välj ut betahemolytiska kolonier från primärplattan.
Plocka 1-5 kolonier med hjälp av en engångsögla eller liknande
Sprid kolonierna på utvalda cirklar på engångskortet.
Dessa kolonier används i testet.
II. Extraktion av kolonier
Phadebact® Extraction Solutions finns tillgänglig hos MKL Diagnostics AB och kan vara fördelaktigt i vissa situationer:
Det finns otillräckligt provmaterial för att möta kraven i direkta kolonitester (1-5 kolonier per reagens).
Icke-tydbart resultat från direkta kolonitester.
OBS! Strep D och Strep F är inte avsedda för extraktion (ympning i buljong rekommenderas).
III.
•
•
•
•
•
Ympning i buljong
Välj ut betahemolytiska kolonier från primärplattan.
Plocka 1 eller fler betahemolytiska streptokockkolonier.
Inokulera kolonin/kolonierna i 2 mL näringsmedium.
Inkubera i 35-37°C över natt eller tills buljongen är grumlig (likvärdigt med Mac-Farland Standard Densitet 2-3).
0.5 mL näringsmedium och ett antal kolonier ger normalt tillräcklig tillväxt efter endast 4 timmars inkubation.
Droppar av suspension används i testet.
Test protokoll
•
Blanda reagenser grundligt genom att skaka flaskorna innan användning.
•
Reagensen bör stå i rumstemperatur innan användning.
•
Enligt god laboratoriesed och liksom vid andra testmetoder så bör positiva och negativa kontroller användas.
I.
Direkt Koloni Test
Märk ovaler på kortet
som motsvarar de
utvalda grupperingsreagens som skall testas.
Välj ut 1-5 kolonier från
primärplattan och rör ut
grundligt och jämnt i det
inre cirkulära området på
kortet. Fig 1.
Placera en droppe av
varje utvalt reagens på
de utspridda kolonierna i
den motsvarande märkta
ovalen. Fig. 2.
Fig. 2
Fig. 1
Med hjälp av släta applikatpinnar i
trä eller engångsöglor i plast, blanda
reagensdroppen omedelbart och
grundligt med de tidigare utspridda
kolonierna. Använd en ny pinne eller
ögla för varje oval.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER:
- Applikatpinnar i papper kan
adsorbera reagens vilket leder till
svag eller ingen reaktion alls.
- Spridning av reagens över ett
större område inom ovalen än de
utspridda kolonierna gör reaktionen
lättare att tyda. Fig. 3.
Fig. 4
Fig. 3
Vicka på kortet fram och
tillbaka och läs av resultatet
inom 1 minut. Fig. 4.
II.
•
•
•
•
•
•
•
III.
•
•
•
•
•
Extraktion av Kolonier
Från Phadebact® Extraction Solutions kitet, blanda 4 droppar av Extraction Solution 1 med 4 droppar av
Extraction Solution 2 i ett litet teströr (t ex storlek 8 x 50 mm).
Välj ut 1-3 kolonier beta-hemolytiska streptokocker från den primära plattan och lös upp dem i Extraction
Solution blandningen.
Inkubera i rumstemperatur i 10-15 minuter eller i 100°C i en minut.
Med hjälp av en Pasteur pipett, placera en droppe av blandningen med streptokockerna i var och en av de
märkta ovalerna på engångskortet.
Tillsätt en droppe av varje utvalt Phadebact® reagens bredvid de extraherade kolonidropparna i ovalen med
motsvarande märkning.
Med hjälp av släta applikat pinnar i trä eller engångsöglor i plast, blanda reagensdroppen omedelbart och
grundligt med de tidigare utspridda kolonierna. Använd en ny pinne eller ögla för varje oval.
Vicka på kortet fram och tillbaka och läs av resultatet inom 1 minut.
Referens Buljong Test
Märk ovaler på kortet som motsvarar utvalda grupperingsreagens som skall testas.
Placera en droppe av buljongkulturen i den inre cirkeln av varje oval som är märkt.
Tillsätt en droppe av varje utvalt reagens bredvid buljongdroppen i ovalen med motsvarande märkning.
Med hjälp av släta applikat pinnar i trä eller engångsöglor i plast, blanda reagensdroppen omedelbart och
grundligt med de tidigare utspridda kolonierna. Använd en ny pinne eller ögla för varje oval.
Vicka på kortet fram och tillbaka och läs av resultatet inom 1 minut.
Stabilitet av slutlig reaktionsblandning
Co-agglutinationsreaktionen är stabil men enligt god laboratoriesed skall resultaten avläsas inom 1 minut (observera
att det finns en risk av uttorkning av reagensen som kan misstolkas som en reaktion).
Kalibrering
Ingen kalibrering är nödvändig.
Kvalitetskontroll
Positiv kontroll
•
Ett kit, Phadebact® Strep Positive Control, är tillgängligt från MKL Diagnostics AB. Kitet innehåller separata flaskor med
antigen av renodlade streptokockkulturer från grupperna A, B, C, D, F och G.
•
Eftersom dessa antigenkontroller är separata och renade, så kan de användas till att testa Phadebact®
streptokockreagens för specificitet samt reaktivitet; kontroll med levande organismer är till följd av detta inte
nödvändigt.
•
Dessa positiva kontroller testas på samma sätt som oidentifierade bakterier i en buljongkultur.
•
Alternativt så bör etablerade laboratoriestammar av streptokockgrupper användas, t ex Strep A (ATCC 19615),
Strep B (ATCC 12401), Strep C (ATCC 9892), Strep D (ATCC 9812), Strep F (ATCC 12392) och Strep G (ATCC
12395).
Negativ kontroll
•
Vid samtidig användning av flera reagens vid testning av en kontroll eller en oidentifierad stam så finns det en
inbyggd negativ kontroll i testet. Om de oidentifierade bakterierna tillhör Streptokockgrupp A så sker en coagglutination i A reagenset. Reagensen B, C och G visar då negativa resultat (d v s ingen eller betydligt svagare
reaktion).
•
Vid testning av endast ett reagenskit, till exempel Phadebact® Strep A, Phadebact® Strep B, Phadebact® Strep
D eller Phadebact® Strep F så kan en annan streptokockgrupp än den som testas (kontroll eller laboratoriestam)
utgöra en negativ kontroll.
Synbild av en reaktion
Ingen reaktion
Positiv reaktion
RESULTAT
Positivt resultat
Ett positivt resultat med Phadebact® Streptococcus Test ger en betydligt starkare samt snabbare reaktion i ett av
reagensen i jämförelse med de andra reagensen. Phadebact® Control reagens måste användas i de andra testerna.
Negativt resultat
Ingen reaktion i alla reagens betyder med stor sannolikhet att bakterien som testats inte tillhör grupperna A, B, C, D,
F eller G eller att provet inte innehåller tillräckligt med antigen. Se PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR.
Icke-tydbart resultat
Om co-agglutination förekommer i fler än ett streptokockreagens och med lika stark intensitet, se PROCEDURENS
BEGRÄNSINGAR.
PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR
•
Bactus AB odlar sina streptokockstammar till antiseraproduktionen i Todd-Hewitt buljong som tillverkas av Difco.
Det rekommenderas därför att inte använda Difco’s buljong för odling av prov som skall testas med Phadebact®
reagens.
•
Om resultat från Direkt Koloni testet (I) inte är övertygande p g a otillräckligt testmaterial så rekommenderar vi
att testet upprepas med proceduren Extraktion av kolonier (II).
•
Om resultat från 4 timmars Buljong testet (III) inte är trovärdigt p g a otillräcklig växt så rekommenderar vi att
buljongen inkuberas över natt och testas igen på vanligt sätt.
•
Om co-agglutination förekommer i fler än ett streptokockreagens och med lika stark intensitet och hastighet så
rekommenderar vi att testet upprepas med proceduren Extraktion av kolonier.
•
Listeria stammar uttrycker liknande antigena egenskaper som grupp B Streptokocker och kan därför reagera
positivt med ett grupp B reagens. Ett katalastest kan genomföras för att skilja mellan Listeria och grupp B
streptokocker: streptokocker är katalasnegativa medan Listeria är katalaspositiva.
•
Phadebact® Strep D och Phadebact® Strep F är inte avsedda för test Extraktion av Kolonier.
PRESTANDA
Specificitet and sensitivitet
I.
Koloni test
Enligt kliniska studier (11, 12) med utvärdering kolonitest, så blev 263/279 (94.3%) av beta-hemolytiska
streptokockstammar som testats med denna metod korrekt identifierade.
II. Buljong test - 4 timmars inkubation
Kliniska studier (13, 14, 15) har påvisat att 272/285 (95.4%) av beta-hemolytiska streptokockstammar blev korrekt
identifierade efter 4 timmars inkubation i jämförelse med Lancefield tekniken.
III. Buljong test - 24 timmars inkubation
Kliniska studier (16, 17) har påvisat att 99% av streptokockstammar blev korrekt identifierade efter en 24 timmars
(över natt) inkubation.
V. Streptococcus grupp B
IV. Streptococcus grupp A
Bakteriespecies
Antal stammar
som reagerar
Bakteriespecies
Antal stammar
som reagerar
Strep A
166/168
Strep B
128/130
Non-strep A
(beta-hemolytic)
1/56
Non-strep B
(beta-hemolytic)
1/18
Strep D
0/13
alpha-hemolytic strep.
0/109
S. pneumoniae
1/11
non-hemolytic strep.
0/98
Klebsiella spp.
0/10
Enterococci
0/28
H. influenzae
0/10
Staphylococci
0/118
Staphylococcus spp.
0/20
Sensitivitet: 98.5%
Precision: 99.4%
Sensitivitet: 98.8%
Precision: 99.1%
Specificitet: 99.7%
Specificitet: 99.4%
VII. Streptococcus grupp F
VI. Streptococcus grupp D
Antal stammar som reagerar
Bakteriespecies
Strep D
Direkt koloni
4-h buljong
178/190
226/240
Strep A,B,C,G
0/40
0/40
S. mutans
0/11
0/11
S. sangius
4/19
-
S. uberis
0/2
0/2
S. mitis
S. milleri
Sensitivitet: 93.4%
3/4
0/11
Bakteriespecies
Antal stammar
som reagerar
Strep F
77/81
Strep A
1/26
Strep B
1/24
Strep C
0/21
Strep D
0/7
Strep G
2/19
0/1
S. pneumoniae
1/71
Sensitivitet: 95.0%
Precision: 96.4%
0/11
Precision: 93.4%
Specificitet: 97.0%
Specificitet: 92.8%
OBS! Felaktiga resultat kan förekomma om andra bakterier än beta-hemolytiska streptokocker testas. Till exempel
så kan stammar av Streptococcus faecalis ge svag reaktion i C reagenset. Streptococcus pneumoniae (Diplococcus
pneumoniae) kan reagera med grupp C reagens, vilket överensstämmer med redan kända likheter mellan antigen
från S. pneumoniae och grupp C streptokocker.
Reproducerbarhet
Reagensen som används i denna test blir regelbundet kontrollerade med kända stammar för att försäkra
reproducerbarhet.
GARANTI
De data som presenteras här har erhållits genom användning av den angivna metoden. Ändringar eller modifieringar
av metoden som inte har rekommenderats av MKL Diagnostics AB kan påverka resultaten av analysen. MKL Diagnostics AB kan då inte
längre ge den garanti som är uttryckt, implicerad eller lagstadgad. MKL Diagnostics AB och dess auktoriserade distributörer ska
i sådana fall inte vara ansvariga för skador som kan uppstå, vare sig de är direkta eller indirekta.
Referenser:
1.
Moody M D: p 182 in Streptococci and streptococcal diseases. Eds. Wannamaker & Matsen. Academic Press
(New York, London) 1972.
2.
Wadström T, Nord C-E, Lindberg A & Mollby R: Rapid grouping of streptococci by immunoelectrophoresis. Med
Microbiol Immunol 159 (1974), 191-200.
3.
Pollock, H M & Dahlgren B J: Distribution of streptococcal groups in clinical specimens with evaluation of
bacitracin screening, Appl Microbiol 27 (1974), 141-143.
4.
Horn K, Meyer W T, Wyrick B C & Zimmerman R A: Group B streptococcal neonatal infections. JAMA 230
(1974), 1165-1167.
5.
Reid T M S: Emergence of group B streptococci in obstetric and perinatal infections. Br J Med (1975:2),
533-536.
6.
Feingold D S, Stagg N L & Kunz L J: Extra-respiratory streptococcal infections. New Eng J Med 275 (1966),
356-361.
7.
Finnegan P, Fitzgerald M M, Cumming G & Geddes A M: Lancefield group C streptococcal endocarditis. Thorax
29 (1974), 245-247.
8.
Baker C: Unusual occurence of neonatal septicaemia due to group G streptococcus. J Pediatr 53 (1974),
568-569.
9.
Facklam R: Isolation and identification of streptococci, part II. US. HEW/Public Health Service/Center for
Disease Control/Atlanta Georgia 30333.
10. Christensen P, Kahlmeter G, Johnson S & Kronvall G: New method for the serological grouping of streptococci
with specific antibodies absorbed to protein A containing staphylococci. Inf Imm 7 (1973), 881-885.
11. Pillot S, Lebrun L & De Maneville M: Progress in the identification of pathogenic Streptococcus. La Nouvelle
Presse Medicale 6 (1977), 1822.
12. Slifkin M, Engwall C, Pouchet G R: Direct-plate serological grouping of beta-hemolytic streptococci from primary
isolation plates with the Phadebact® Streptococcus Test. J Clin Microbiol 7 (1978), 356-360.
13. Rosner R: Clinical evaluation of a rapid four hour serological grouping of groups A, B, C and G beta-streptococci
using the Phadebact ® Streptococcus Test. J Clin Microbiol 6 (1977), 23-26.
14. Farrel B & Amirak I: Agglutination grouping of streptococci. Lancet (1976:2), 1082.
15. West M E and Jacobs P F: Abstract C 162, presented Annual Meeting American Society for Microbiology, 1979.
16. Arvilommi H: Grouping of beta-hemolytic streptococci by using co-agglutination, precipitin or bacitracin
sensitivity. Acta Path Microbiol Scand 84 (1976), 79-84.
17. Finch R G & Philips I: Serological grouping of streptococci by a slide co-agglutination method. J Clin Pathol 30
(1977), 23-26.
18. Manual Guide-Safety Management, No CDC-22, 4/30/76.
PRODUKTER
Phadebact® COA System
Phadebact® Streptococcus Tests
Phadebact® Streptococcus Respiratory Test
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Phadebact® Strep Positive Controls
Phadebact® Pneumococcus Test
Phadebact® Haemophilus Test
Phadebact® GC Positive Controls
Phadebact® CSF Test
Phadebact® CSF Positive Controls
Phadebact® Extraction Solutions
Phadebact® Monoclonal GC Test
Phadebact® ETEC-LT Test
Phadebact® Salmonella Test
Phadebact® Staph Aureus Test
Near Patient Testing
Strep A
Phadirect®
Phadirect®
Rapid CRP Test
På andra språk: www.mkldiagnostics.com
For other languages: www.mkldiagnostics.com
Für andere Sprachen: www.mkldiagnostics.com
Para otros idiomas: www.mkldiagnostics.com
Per altre lingue: www.mkldiagnostics.com
Pour d'autres langues: www.mkldiagnostics.com
Andre sprog, se venligst: www.mkldiagnostics.com
Гια άλλες γλώσσες: www.mkldiagnostics.com
